摘要：目的:探讨使用CRSIPR/Cas9技术删除CTL的免疫检查点CTLA-4后CTL的抗裸鼠结肠癌移植瘤的效果及其作用机制。方法:针对CTLA-4设计特异性小向导RNA(small guide RNA,sgRNA)并构建sgRNA/Cas9质粒,使用慢病毒载体转染质粒至CTL获得删除CTLA-4的CTL(CTLA-4 KO CTL),并验证质粒的转染效率和CTLA-4的删除效率。BALB/c裸鼠随机分为2组进行实验,预防性注射CTLA-4 KO CTL(实验组)及CTL(对照组),3 d后接种结肠癌细胞株LS174-T,观察成瘤率及成瘤时间。建立结肠癌移植瘤裸鼠模型,成瘤后裸鼠随机分为2组,分别给予CTLA-4 KO CTL(实验组)及CTL(对照组)进行细胞治疗,观察移植瘤的体积、裸鼠的生存时间,并检测移植瘤裸鼠血清中TNF-α及IFN-γ分泌水平。结果:设计sgRNA并成功构建以慢病毒为载体的CRSIPR/Cas9系统,使用构建好的CRSIPR/Cas9系统转染CTL细胞,转染效率最高可达(28.80±0.62)%,转染后以流式细胞术检测CTLA-4的删除效率,CTLA-4 KO CTL组的CTLA-4表达较CTL组显著降低[(0.91±0.25)%vs(42.70±2.72)%,P<0.01]。预防实验中,实验组结肠癌移植瘤发生率明显低于对照组(33.33%vs 100.00%,P<0.01)。治疗实验中,实验组肿瘤体积较对照组显著减少[(503.0±23.9)vs(911.2±51.4)mm^3,P<0.05],实验组裸鼠相较于对照组生存时间明显延长(中位生存期:78 vs 42 d,P<0.05),实验组裸鼠血清TNF-α[(268.93±17.04)vs(148.26±20.07)pg/ml,P<0.05]及IFN-γ[(315.38±18.67)vs (202.92±29.32) pg/ml,P<0.05]的分泌水平较对照组明显增高。结论:以CRSIPR/Cas9技术成功删除CTL中免疫检查点CTLA-4后可以显著抑制裸鼠结肠癌移植瘤的成瘤率、增强CTL对荷结肠癌裸鼠的抗肿瘤作用,并明显增高荷瘤鼠血清中TNF-α和IFN-γ水平。

摘要：目的构建LOX-shRNA的慢病毒表达载体及其病毒包装鉴定。方法利用Oligo Designer 3.0,根据人LOX基因序列设计shRNA,并合成包含正、反义靶序列的互补DNA链,退火后插入LOX表达载体中,构建shRNA表达质粒,并转化至*** TOP10感受态细胞,抽提质粒后进行测序。将重组质粒转染HEK-293T细胞,应用RT-PCR检测各组LOX基因mRNA的表达水平,筛选出最有效的LOX-shRNA后,通过Lipofect AM INE^(TM)2000介导转染293T细胞,对慢病毒进行包装并测定慢病毒滴度。结果利用慢病毒介导将重组质粒LOX-shRNA-3024高效转导入HEK-293T细胞并稳定表达。荧光显微镜显示,转染24 h后,HEK-293T细胞即开始发出绿色荧光;72 h后,有大量荧光表达,而对照组未转染质粒的HEK-293T细胞不表达,可见慢病毒载体被成功转染。LOX-3024重组慢病毒的滴度为2×10^(10)TU/ml。结论成功构建LOX-shRNA慢病毒表达载体,并稳定转染HEK-293T细胞,为研究LOX对人阴道壁成纤维细胞生物学行为的影响提供了实验基础。

摘要：外科腹部手术纵向切开者术后常规使用腹带,但传统腹带存在着掩盖切口,不易及时观察,增加病人痛苦,使病人感到不适等缺陷.我们在传统腹带的基础上设计并制作了可视性腹带,于2006年2～12月应用于临床,效果满意,现介绍如下.

摘要：目的评价妇炎舒胶囊联合应用抗菌药物治疗盆腔炎性疾病(PID)湿热瘀结证的有效性和安全性。方法采用前瞻性、多中心、随机、双盲设计,2017年6月至2018年9月在5家医院入组20~50岁288例PID患者,按区组随机1:1比例分配至研究组(采用妇炎舒胶囊治疗)及对照组(采用安慰剂治疗),两组各144例均从入组第1~14 d加服左氧氟沙星片+甲硝唑片。比较两组治疗8周后(2个月经周期后)McCormack量表评分,中医证候等,并在停药后1个月后随访。结果研究组McCormack量表评分较治疗前下降[(7.65±2.21)分],并高于对照组下降[(4.01±2.46)分](P <0.0001);研究组中医证候有效率[93.75%(135/144)]高于对照组[41.67%(60/144)](P <0.0001);研究组停药后1个月内复发率为3.50%(5/144)、盆腔痛发生率为10.49%(15/144),均低于对照组(P <0.0001)。结论抗生素联合应用妇炎舒胶囊在改善PID患者McCormack量表评分、中医证候疗效、疾病及盆腔痛后遗症均优于单纯使用抗生素组。

摘要：目的 构建改良型TAT-VP3融合基因原核表达载体,并表达目的 蛋白.方法 采用PCR法设计和扩增改良型TAT-VP3融合基因,克隆至表达载体pThioHisA中,构建非融合表达载体,转化大肠杆菌BL21（DE3）plyS,经IPTG诱导表达,15%SDS-PAGE鉴定.结果 成功构建了改良型TAT-VP3融合基因的原核表达载体,经酶切、测序鉴定,证明构建正确.经SDS-PAGE鉴定可见相对分子质量16400的特异性目的 条带,37℃诱导8h的蛋白表达量最高,且多数以包涵体形式存在.结论 已成功构建改良型TAT-VP3融合基因原核表达载体,并表达目的 蛋白,为进一步的蛋白制备和应用研究奠定了基础.

摘要：目前本科采血时所用采血针的针套是由透明塑料两端开口直径宽2 mm、长35 mm圆柱形塑料套。采血时针套拔下即可穿刺。针套件小容易遗漏在治疗区不便于回收,采血后针头暴露在空气中医护人员容易针刺伤,残留的血迹易污染工作人员及环境[1]。因此本科设计了一种防止污染、针刺伤便于回收的针套。现介绍如下。

摘要：目的 了解临床N1级护士对情景模拟教学相关内容认知程度,为开展情景模拟教学提供依据. 方法 采用自行设计情景模拟教学相关知识调查表,对110名临床N1级护士在情景模拟教学实施前后进行问卷调查. 结果 110 名N1 级护士在实施情景模拟教学前,16. 36%了解情景模拟教学, 13. 64%认为此教学法能增加对理论知识的巩固,10. 91%认为此教学法能锻炼理论联系实际的能力, 15. 45%认为此教学法能锻炼语言表达能力,11. 82%认为此教学法能培养团队协调能力,11. 82%认为此教学法能帮助后续临床工作,3. 64%认为此教学法具有人文关怀,16. 36%希望采用此教学法,实施后均为100%. 结论 临床带教人员应对N1级护士采用情景模拟教学的培训,帮助其树立正确的学习态度和方法,尽快进入工作状态,为后续临床护理工作做好准备.

摘要：临床上住院患者往往要进行各项化验检查，所需采集的血标本试管很多，晨起采血时，试管寻找起来既费时又费力。从2009年3月开始，我科设计了一种血标本采集盒，临床应用效果良好。现介绍如下。

摘要：临床上对于脑血栓、脑出血、蛛网膜下腔出血、脑外伤及大手术恢复期的患者，锻炼步行对肢体功能恢复有非常重要的意义。目前，临床多采用人工搀扶的方式进行康复锻炼，存在很大的局限性，不能满足临床要求。我们设计了一种步行辅助器，经临床使用，取得了满意效果。

摘要：[目的]观察滋水清肝饮治疗肾虚肝郁型围绝经期综合征疗效。[方法]采用前瞻性设计方法,94例门诊患者避风寒、畅情志、慎起居,适度运动。滋水清肝饮(银柴胡15g,栀子、熟地黄各10g,山茱萸、山药、牡丹皮、秦艽、地骨皮、知母、淫羊藿各15g,盐黄柏、五味子各10g;汗出明显加黄芪、浮小麦;腰膝酸痛加杜仲、怀牛膝;胸胁乳胀加制香附、橘核;腹胀加枳壳、大腹皮;失眠加夜交藤、酸枣仁),1剂/2d,水煎300m L,3次/d。连续治疗14d为1疗程。观测临床症状、主症积分、雌激素、卵泡刺激素、黄体生成素、不良反应。连续治疗2疗程,判定疗效。[结果]显效57例,有效29例,无效8例,总有效率91.30%。主症积分均有改善(P<0.01)。内分泌激素均有改善(P<0.01)。[结论]滋水清肝饮治疗肾虚肝郁型围绝经期综合征疗效满意,无严重不良反应,值得推广。