摘要：为探讨刚地弓形虫Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型ROP16蛋白与NKRF互作对A549细胞凋亡、周期及增殖的影响。本研究通过构建过表达Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型ROP16蛋白和空载体对照组的慢病毒感染A549细胞,并通过实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和Western-blot对Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型ROP16的表达进行验证。利用免疫共沉淀与液相色谱-质谱联用技术获取同ROP16可能发生互作的蛋白,并利用Venn图、Score分值、Intensity分值筛选出评分较高的互作蛋白NKRF进行验证。设计并合成NKRF-siRNA,分别转染至过表达Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型ROP16细胞,并利用CCK-8法检测各组细胞增殖情况,利用RT-qPCR和Western-blot分别对凋亡相关蛋白及细胞周期相关蛋白的m RNA和蛋白表达水平进行检测。此次试验成功构建了Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型ROP16过表达A549稳转细胞株。利用IP-MS及CO-IP技术筛选并验证ROP16互作蛋白NKRF。筛选并构建NKRF沉默的过表达各型ROP16蛋白A549细胞。在过表达Ⅰ型、Ⅲ型ROP16的A549细胞中,促凋亡蛋白Bax表达水平上调,抑凋亡蛋白BCL-2、Caspase-9、p53表达水平明显下调;细胞周期抑制蛋白p21表达明显上调,而G1/S期相关蛋白CDK6和CyclinD1蛋白表达明显下调,提示Ⅰ、Ⅲ型ROP16蛋白会引起细胞凋亡和周期停滞,而在沉默NKRF组中,过表达Ⅰ型、Ⅲ型ROP16蛋白的A549细胞中Ⅰ型、Ⅲ型ROP16蛋白的促凋亡作用减弱,细胞周期无明显停滞,与Ⅱ型ROP16蛋白之间没有统计学差异。综上所述得出弓形虫Ⅰ、Ⅲ型ROP16蛋白通过与NKRF互作,诱导A549细胞凋亡、细胞周期阻滞并抑制A549细胞增殖。

摘要：目的基于改良3D打印导板的设计理念与材质,探讨其在经皮肾镜碎石取石术中的应用效果。方法采用镂空“D”形设计、光敏树脂材料对3D打印导板进行改良。53例经皮肾镜碎石取石术的患者中,采用改良3D打印导板辅助下经皮肾镜碎石取石术(实验组)10例,传统超声引导下经皮肾镜碎石取石术(对照组)43例,对比两组患者的肾镜通路建立时间、手术时间、术中出血、术前术后肌酐和血红蛋白变化幅度及住院时间等临床数据。结果实验组的肾镜通路建立时间、术中出血量、住院时长均少于对照组(P均0.05)。结论改良3D打印导板辅助经皮肾镜碎石取石术可提高手术精准性,减少并发症,降低患者住院花费,值得临床推广应用。

摘要：现代临床医疗理念趋向精准化、微创化发展。脊柱外科手术因其特殊的解剖位置,毗邻重要血管、神经,更加需要临床操作的安全性和准确性。3D打印技术以3D图像数据为基本数据,通过专用3D打印计算机软件设计、规划所需3D数字模型,导入打印机后可应用多种材料进行实物打印。3D打印技术是数字信息技术、数字工业技术、生物化学材料等前沿科技结合体,广泛应用于航天材料、工业制造、生物研究以及临床医疗等领域,在临床医疗应用中涉及数字解剖模型构建、器官实物打印、人工假体置换、导航板设计等方面。3D打印导航板技术可以根据临床需要预先规划并设计术中导航通道,具有精准导航、安全定位等特点,在脊柱外科中有巨大发展前景。本文就3D打印导航板在脊柱外科中的研究进展做一综述。

摘要：目的 构建人白细胞介素(interleukin,IL)-26慢病毒表达质粒与基因敲除质粒,为研究IL-26基因在细胞信号通路及细胞自噬中的功能奠定基础。方法 利用RT-PCR从人外周血单个核细胞中扩增IL-26基因序列,克隆至pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP真核表达载体中,构建过表达质粒;并根据IL-26外显子序列设计4个敲除靶点Exon1sgRNA1、Exon1sgRNA2、Exon3sgRNA1、Exon3sgRNA2,利用CRISPR/Cas9技术构建至lentiCRISPRv2载体中,构建基因敲除质粒。将过表达质粒和基因敲除质粒分别瞬时转染至HEK293T细胞,利用RT-qPCR和Western blot验证IL-26 mRNA和蛋白的表达情况。并对IL-26进行氨基酸序列分析、结构预测及亚细胞定位观察。结果 通过酶切、测序鉴定及生物信息学分析显示,IL-26全长516 bp,编码171个氨基酸。IL-26过表达质粒转染的HEK293T细胞与正常对照组相比,IL-26 mRNA水平升高了656.789倍,蛋白质水平升高了1.978倍,差异均有统计学意义(t分别为17.976和7.859,P分别<0.000 1和<0.001)。4个敲除靶点Exon1sgRNA1、Exon1sgRNA2、Exon3sgRNA1、Exon3sgRNA2质粒转染至HEK293T细胞中后,IL-26的表达水平分别下降了0.930、0.980、0.523 3和0.316 9倍,其中Exon3-sgRNA2质粒能够显著下调IL-26的表达(t=7.440,P <0.001)。IL-26蛋白的前22个氨基酸存在信号肽结构,且具有一定的跨膜功能,IL-26存在于细胞质中。结论 成功构建了IL-26过表达和基因敲除质粒,为后续IL-26功能的研究奠定了基础。

摘要：目的调查分析妊娠期孕妇体质量管理知信行现状及其影响因素,为制定有针对性的妊娠期体质量管理方案提供参考。方法采用自行设计的妊娠期孕妇体质量管理知信行问卷对宁夏地级市5所医疗机构的430名孕妇进行调查,回收有效问卷421份,分析不同特征妊娠期孕妇体质量管理知信行得分情况及其影响因素。结果宁夏5所医疗机构妊娠期孕妇体质量管理知识、态度、行为得分及知信行总分分别为(19.53±1.56)分、(32.69±5.49)分、(36.31±5.58)分、(88.60±14.15)分,其得分率依次为54.25%、74.30%、64.84%、65.15%。多因素回归分析显示,影响妊娠期孕妇体质量管理知信行水平的主要因素分别是孕妇的文化水平、家庭人均月收入、妊娠期饮食主要照顾者、是否计划妊娠、有无参加体质量与营养管理课程及医院性质(P均<0.05)。结论宁夏5所医疗机构妊娠期孕妇体质量管理知信行水平有待进一步提高。医护人员应针对孕妇的文化程度、家庭人均月收入、妊娠期饮食主要照顾者、计划妊娠、参加体质量与营养管理课程及医院性质进行个性化体质量管理指导,以提高孕妇知信行水平。

摘要：目的:分析S100-A8蛋白在脊柱结核患者外周血中的表达与临床诊断的相关性,评价其作为脊柱结核诊断标志物的价值.方法:收集2018年9月~2021年6月宁夏医科大学总医院脊柱骨科收治的脊柱结核患者100例作为观察组,健康体检者30例作为对照组.观察组男性50例,女性50例,年龄49.5±16.3岁;对照组男性12例,女性18例,年龄53.4±9.7岁.两组各选取3例样本进行蛋白质组学检测并筛选差异蛋白,结合脊柱结核信号通路,确认目标蛋白.选取50例观察组与30例对照组,运用酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定并比较两组血清目标蛋白表达水平.收集观察组临床病历资料,包括:年龄、性别、病程、实验室检查、细菌培养、T-SPOT、抗酸染色、病理学及影像学资料,收集对照组实验室检查并与观察组进行比较;采用T-test分析目标蛋白在观察组各项临床资料之中的表达差异;通过线性回归及双变量斯皮尔曼相关性分析目标蛋白与观察组临床资料的相关性;受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析目标蛋白联合STB常用诊断指标的价值.结果:S100-A8蛋白具有诊断脊柱结核的价值(AUC=0.931,P0.05).观察组中、细菌学培养阳性16例,阴性84例;T-SPOT阳性80例,阴性20例;抗酸染色阳性19例,阴性81例;病理学阳性73例,阴性27例;影像学诊断阳性76例,阴性24例.S100-A8蛋白在观察组的临床分组(年龄、性别、病程、白细胞、淋巴细胞、中性粒细胞)无统计学意义(P>0.05),在影像学诊断中差异显著(P0.05).ROC曲线分析显示其联合细菌学检测、T-SPOT结果、影像学诊断、抗酸染色结果、病理学具有诊断价值(AUC>0.6,P<0.05).结论:S100-A8蛋白在脊柱结核患者与健康人外周血中存在表达差异,可能成为诊断脊柱结核的新型候选生物标志物.

摘要：文章首先阐述了课程思政在“临床微生物学检验技术”教学中应用的目标,然后说明了课程思政在“临床微生物学检验技术”教学中应用的主要特色和关键点,接着提出了课程思政在“临床微生物学检验技术”教学中应用的具体方案,最后对课程思政在“临床微生物学检验技术”教学中的应用进行了积极反思。

摘要：目的:探讨趋化因子Fractalkine(FKN)联合肿瘤相关M2型巨噬细胞对人胰腺癌PANC-1细胞增殖、侵袭和迁移等生物学功能的影响。方法:将含FKN基因序列的重组慢病毒HBLV-h-FKN-GFP-PURO感染人胰腺癌PANC-1细胞,同时用佛波酯及白细胞介素4序贯诱导人白血病单核细胞THP-1成为M2型巨噬细胞,然后通过Transwell小室系统建立胰腺癌细胞与M2型巨噬细胞非接触式共培养模型。共培养后收集胰腺癌细胞,采用CCK-8法检测PANC-1细胞的增殖情况,Transwell小室法和划痕愈合实验分别检测细胞的侵袭和迁移能力。结果:HBLV-h-FKN-GFP-PURO感染人胰腺癌细胞PANC-1后,FKN蛋白表达水平较未感染对照组和空病毒感染组明显升高(P值均<0.001)。THP-1细胞经序贯诱导后成为高表达精氨酸酶Ⅰ(arginase-1,Arg-1)、低表达诱生型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)蛋白的M2型巨噬细胞(PArg-1<0.001,PiNOS<0.01)。过表达FKN后,PANC-1细胞趋化共培养M2型巨噬细胞的能力明显增强(P <0.001)。FKN过表达后,PANC-1细胞的增殖、侵袭和迁移能力均增强(P值均<0.001);而与M2型巨噬细胞共培养后,PANC-1细胞的增殖、侵袭和迁移能力均更加显著地增强(P值均<0.01);依据析因设计资料的双向分组方差分析结果提示,FKN与M2型巨噬细胞之间存在交互作用(P增殖<0.01,P侵袭<0.01,P迁移<0.05)。结论:趋化因子FKN能促使人胰腺癌PANC-1细胞趋化募集M2型巨噬细胞。FKN和M2型巨噬细胞均可增强PANC-1细胞的增殖、侵袭和迁移能力,且二者之间具有交互协同作用。

摘要：目的 构建过氧化物酶体增殖物激活受体γ亚型1(peroxisome proliferator-activated receptor gamma isoform 1,PPAR γ1)、泛素连接酶肌肉环指状蛋白2(ubiquitin ligase muscle ring finger protein 2,MuRF2)和泛素(ubiquitin,Ub)的重组质粒并进行鉴定。方法 根据MuRF2、PPAR γ1和Ub的cDNA序列及GV146和GV417载体质粒上的多克隆位点设计目的基因克隆引物。XhoI/EcoRI内切酶分别双酶切PPAR γ1目的DNA与GV146载体;NheI/BamHI内切酶分别双酶切MuRF2和Ub目的 DNA与GV417载体。用连接酶连接双酶切后的目的 DNA和载体,导入大肠杆菌经筛选获得重组质粒。PCR鉴定重组克隆后进行DNA测序。转染HEK 293T细胞后,于荧光显微镜下观察转染效率;免疫共沉淀实验后用Western blot检测蛋白的表达及蛋白质相互作用。结果 以合成的PPAR γ1、Ub、MuRF2的引物分别对PPAR γ1、Ub和MuRF2的菌落进行PCR扩增,产物大小分别为943、451和1 154 bp,与预期结果一致。测序结果与目的基因序列进行比对分析,证实成功构建出PPAR γ1、Ub和MuRF2的重组质粒。在HEK 293T细胞中共转染His-MuRF2、HA-Ub、PPAR γ1重组质粒,荧光显微镜观察结果提示重组质粒成功转染。免疫共沉淀试验后用Western blot检测可见PPAR γ1、MuRF2和Ub蛋白的有效表达,且验证了MuRF2介导PPAR γ1发生泛素化修饰反应。结论成功构建PPAR γ1、MuRF2和Ub的重组质粒,且三种质粒在HEK 293T细胞中有效表达,验证了MuRF2介导PPAR γ1发生泛素化修饰反应。

摘要：目的基于第2版前列腺影像报告和数据系统（PI-RADS）评估多参数磁共振成像（mp-MRI）对中央腺体前列腺癌（CG-PCa）的诊断价值。资料与方法前瞻性分析62例行前列腺mp-MRI并经穿刺病理证实的前列腺中央腺体疾病患者的MRI资料,根据病变性质分为22例CG-PCa患者和40例良性前列腺增生（BPH）患者,mp-MRI参数包括T2WI、扩散加权成像（DWI）和动态对比增强MRI（DCE-MRI）,以第2版PI-RADS为各独立及联合技术方案依据,分别对其扫描参数设计及影像资料进行判读评分,即T2WI、DWI、DCE-MRI和T2WI＋DWI。分别对各方案的PI-RADS评分结果进行分析,计算每种方案的诊断敏感度、特异度和准确度,以ROC曲线下面积比较不同方案的诊断效能。结果依据第2版PI-RADS评分,1-3分：T2WI 39例,DWI 36例;4-5分：T2WI 23例,DWI 26例;DCE-MRI：30例为阴性,32例为阳性。T2WI、DWI、DCE-MRI和T2WI＋DWI诊断CG-PCa的敏感度、特异度、准确度和ROC曲线下面积分别为72.73%、80.00%、77.42%、0.840,81.82%、72.50%、75.81%、0.827,77.27%、62.50%、67.74%、0.699,90.91%、77.50%、82.26%、0.890。结论 T2WI单独诊断CG-PCa的价值高于DWI和DCE-MRI,基于第2版PI-RADS的T2WI联合DWI对CG-PCa的诊断价值最高。