摘要：目的:探讨趋化因子Fractalkine(FKN)联合肿瘤相关M2型巨噬细胞对人胰腺癌PANC-1细胞增殖、侵袭和迁移等生物学功能的影响。方法:将含FKN基因序列的重组慢病毒HBLV-h-FKN-GFP-PURO感染人胰腺癌PANC-1细胞,同时用佛波酯及白细胞介素4序贯诱导人白血病单核细胞THP-1成为M2型巨噬细胞,然后通过Transwell小室系统建立胰腺癌细胞与M2型巨噬细胞非接触式共培养模型。共培养后收集胰腺癌细胞,采用CCK-8法检测PANC-1细胞的增殖情况,Transwell小室法和划痕愈合实验分别检测细胞的侵袭和迁移能力。结果:HBLV-h-FKN-GFP-PURO感染人胰腺癌细胞PANC-1后,FKN蛋白表达水平较未感染对照组和空病毒感染组明显升高(P值均<0.001)。THP-1细胞经序贯诱导后成为高表达精氨酸酶Ⅰ(arginase-1,Arg-1)、低表达诱生型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)蛋白的M2型巨噬细胞(PArg-1<0.001,PiNOS<0.01)。过表达FKN后,PANC-1细胞趋化共培养M2型巨噬细胞的能力明显增强(P <0.001)。FKN过表达后,PANC-1细胞的增殖、侵袭和迁移能力均增强(P值均<0.001);而与M2型巨噬细胞共培养后,PANC-1细胞的增殖、侵袭和迁移能力均更加显著地增强(P值均<0.01);依据析因设计资料的双向分组方差分析结果提示,FKN与M2型巨噬细胞之间存在交互作用(P增殖<0.01,P侵袭<0.01,P迁移<0.05)。结论:趋化因子FKN能促使人胰腺癌PANC-1细胞趋化募集M2型巨噬细胞。FKN和M2型巨噬细胞均可增强PANC-1细胞的增殖、侵袭和迁移能力,且二者之间具有交互协同作用。

摘要：目的 了解宁夏男大学生人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)疫苗的认知和接种意愿及其影响因素，为今后在男性群体中推广HPV疫苗提供参考。方法 采用分层整群抽样的方法抽取宁夏3所本科院校、3所专科院校的1 842名男大学生，采用自行设计问卷调查男大学生对HPV及其疫苗认知情况、HPV疫苗接种意愿及其影响因素。采用独立样本t检验或方差分析比较不同特征男大学生对HPV及其疫苗的知晓水平，采用χ2检验分析不同特征男大学生HPV疫苗的接种意愿，采用多因素logistic回归分析HPV疫苗接种意愿的影响因素。结果 宁夏男大学生有81.7%听说过HPV及HPV疫苗，HPV疫苗相关知识的平均得分为(5.6±3.0)分，高知晓水平(≥7分)学生占52.5%。本科生、大学一年级学生、医学生、每月生活费<1 000元者、异性恋者、发生过性关系者、既往患有生殖系统疾病或性病者知晓得分高，差异均有统计学意义(P均<0.05)。有80.3%男大学生愿意接种HPV疫苗，本科生、医学生、大学一年级学生、城市来源、异性恋、发生过性关系、HPV及疫苗高知晓水平者HPV疫苗接种意愿高，差异均有统计学意义(P均<0.05)。来自县城(OR=0.699,95%CI:0.519～0.941)、同性恋(OR=0.648,95%CI:0.457～0.920)、HPV及其疫苗高知晓水平(OR=7.706,95%CI:5.697～10.423)是HPV疫苗接种意愿的影响因素。结论 宁夏男大学生对HPV及疫苗认知程度、接种意愿较高，但仍有部分学生存在认知偏差，建议有关部门及高校开展相关健康教育，提高男大学生对HPV及其疫苗的认知。

摘要：目的基于第2版前列腺影像报告和数据系统（PI-RADS）评估多参数磁共振成像（mp-MRI）对中央腺体前列腺癌（CG-PCa）的诊断价值。资料与方法前瞻性分析62例行前列腺mp-MRI并经穿刺病理证实的前列腺中央腺体疾病患者的MRI资料,根据病变性质分为22例CG-PCa患者和40例良性前列腺增生（BPH）患者,mp-MRI参数包括T2WI、扩散加权成像（DWI）和动态对比增强MRI（DCE-MRI）,以第2版PI-RADS为各独立及联合技术方案依据,分别对其扫描参数设计及影像资料进行判读评分,即T2WI、DWI、DCE-MRI和T2WI＋DWI。分别对各方案的PI-RADS评分结果进行分析,计算每种方案的诊断敏感度、特异度和准确度,以ROC曲线下面积比较不同方案的诊断效能。结果依据第2版PI-RADS评分,1-3分：T2WI 39例,DWI 36例;4-5分：T2WI 23例,DWI 26例;DCE-MRI：30例为阴性,32例为阳性。T2WI、DWI、DCE-MRI和T2WI＋DWI诊断CG-PCa的敏感度、特异度、准确度和ROC曲线下面积分别为72.73%、80.00%、77.42%、0.840,81.82%、72.50%、75.81%、0.827,77.27%、62.50%、67.74%、0.699,90.91%、77.50%、82.26%、0.890。结论 T2WI单独诊断CG-PCa的价值高于DWI和DCE-MRI,基于第2版PI-RADS的T2WI联合DWI对CG-PCa的诊断价值最高。

摘要：星形胶质细胞上调基因-1（astrocyte elevated gene-1,AEG-1）在多种肿瘤中过表达,参与肿瘤的形成、转移等过程。本实验利用CRISPR/Cas9技术敲除AEG-1基因并研究其在胶质瘤细胞转移过程中的作用。首先设计构建sgRNA/Cas9二合一表达载体并转染到人胶质瘤U251细胞中,通过TA克隆测序鉴定sgRNA的活性;然后筛选建立稳定的AEG-1敲除U251细胞系,并利用Western blot实验检测AEG-1的敲除效率;最后利用Transwell小室、划痕实验评价AEG-1敲除后对肿瘤细胞迁移能力的影响。结果显示,成功构建靶向敲除AEG-1基因的sgRNA/Cas9二合一表达载体,所构建的载体与实验设计相一致,通过TA克隆测序鉴定sgRNA有活性;成功建立稳定的AEG-1敲除U251细胞系,Western blot实验结果表明敲除效率高达98%; Transwell小室实验、划痕实验结果表明AEG-1敲除U251细胞系的转移能力明显降低。

摘要：目的:利用生物信息学软件评价幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)多价表位疫苗CWAE的抗原结构,经原核表达获得高纯度CWAE蛋白,进而鉴定多价表位疫苗CWAE的免疫学性质。方法:通过生物信息学软件分析H. pylori多价表位疫苗CWAE的抗原结构;用人工合成的H. pylori多价表位肽融合基因WAE替换重组质粒pET28a-CUE中的UE基因,构建重组质粒pET28aCWAE。然后,将pET28a-CWAE转入大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,并通过Ni-NTP镍离子亲和层析纯化抗原蛋白CWAE;利用GM1-ELISA鉴定CWAE中CTB组分的黏膜免疫佐剂活性。最后,通过ELISA和小鼠脾脏淋巴细胞增殖实验检测CWAE激发BALB/c小鼠产生抗***抗体体液免疫和淋巴细胞免疫应答的能力。结果:通过生物信息学软件证实H. pylori多价表位疫苗CWAE具有科学合理的结构;重组表达质粒pET28a-CWAE经PCR、双酶切和基因测序鉴定,融合基因CWAE与设计序列完全一致;重组基因工程菌株pET28a-CWAE/BL21(DE3)经IPTG诱导表达,抗原蛋白CWAE主要以包涵体形式存在,经Ni-NTP镍离子亲和层析纯化,纯度约达93. 2%;GM1-ELISA实验证实,CWAE中CTB组分依旧保持有较好的黏膜佐剂活性;ELISA结果证实CWAE能够激发BALB/c小鼠产生H. pylori特异性抗体,而小鼠脾脏淋巴细胞增殖实验进一步证实CWAE能够激发针对H. pylori多种致病因子的淋巴细胞免疫反应。结论:H. pylori多价表位疫苗CWAE具有科学合理的抗原结构,经原核表达可获得高纯度抗原蛋白,能够激发BALB/c小鼠产生H. pylori特异性抗体体液免疫和淋巴细胞免疫应答。为研发防治H. pylori感染的多价表位疫苗奠定实验基础。

摘要：目的构建靶向甲酰肽受体(FPR)基因的shRNA慢病毒表达载体,建立稳定转染的U87细胞系。方法设计并合成FPR基因特异性的shRNA序列,构建PDS019_pL/shRNA/GFP/F-FPR慢病毒载体,通过脂质体转染293T细胞包装成FPR慢病毒颗粒,感染U87细胞。荧光显微镜观察转染效果,实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法(Western blot)法检测FPR干扰效率。结果成功构建FPR基因shRNA慢病毒表达载体。稳定转染U87细胞后,荧光显微镜下可观察到绿色荧光蛋白。实时荧光定量PCR及Western blot证实PDS019_pL/shRNA/GFP/F-FPR慢病毒载体具有良好的干扰效果。结论成功构建FPR shRNA稳定转染的U87细胞系。

摘要：为探讨刚地弓形虫Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型ROP16蛋白与NKRF互作对A549细胞凋亡、周期及增殖的影响。本研究通过构建过表达Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型ROP16蛋白和空载体对照组的慢病毒感染A549细胞,并通过实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和Western-blot对Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型ROP16的表达进行验证。利用免疫共沉淀与液相色谱-质谱联用技术获取同ROP16可能发生互作的蛋白,并利用Venn图、Score分值、Intensity分值筛选出评分较高的互作蛋白NKRF进行验证。设计并合成NKRF-siRNA,分别转染至过表达Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型ROP16细胞,并利用CCK-8法检测各组细胞增殖情况,利用RT-qPCR和Western-blot分别对凋亡相关蛋白及细胞周期相关蛋白的m RNA和蛋白表达水平进行检测。此次试验成功构建了Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型ROP16过表达A549稳转细胞株。利用IP-MS及CO-IP技术筛选并验证ROP16互作蛋白NKRF。筛选并构建NKRF沉默的过表达各型ROP16蛋白A549细胞。在过表达Ⅰ型、Ⅲ型ROP16的A549细胞中,促凋亡蛋白Bax表达水平上调,抑凋亡蛋白BCL-2、Caspase-9、p53表达水平明显下调;细胞周期抑制蛋白p21表达明显上调,而G1/S期相关蛋白CDK6和CyclinD1蛋白表达明显下调,提示Ⅰ、Ⅲ型ROP16蛋白会引起细胞凋亡和周期停滞,而在沉默NKRF组中,过表达Ⅰ型、Ⅲ型ROP16蛋白的A549细胞中Ⅰ型、Ⅲ型ROP16蛋白的促凋亡作用减弱,细胞周期无明显停滞,与Ⅱ型ROP16蛋白之间没有统计学差异。综上所述得出弓形虫Ⅰ、Ⅲ型ROP16蛋白通过与NKRF互作,诱导A549细胞凋亡、细胞周期阻滞并抑制A549细胞增殖。

摘要：目的:分析S100-A8蛋白在脊柱结核患者外周血中的表达与临床诊断的相关性,评价其作为脊柱结核诊断标志物的价值.方法:收集2018年9月~2021年6月宁夏医科大学总医院脊柱骨科收治的脊柱结核患者100例作为观察组,健康体检者30例作为对照组.观察组男性50例,女性50例,年龄49.5±16.3岁;对照组男性12例,女性18例,年龄53.4±9.7岁.两组各选取3例样本进行蛋白质组学检测并筛选差异蛋白,结合脊柱结核信号通路,确认目标蛋白.选取50例观察组与30例对照组,运用酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定并比较两组血清目标蛋白表达水平.收集观察组临床病历资料,包括:年龄、性别、病程、实验室检查、细菌培养、T-SPOT、抗酸染色、病理学及影像学资料,收集对照组实验室检查并与观察组进行比较;采用T-test分析目标蛋白在观察组各项临床资料之中的表达差异;通过线性回归及双变量斯皮尔曼相关性分析目标蛋白与观察组临床资料的相关性;受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析目标蛋白联合STB常用诊断指标的价值.结果:S100-A8蛋白具有诊断脊柱结核的价值(AUC=0.931,P0.05).观察组中、细菌学培养阳性16例,阴性84例;T-SPOT阳性80例,阴性20例;抗酸染色阳性19例,阴性81例;病理学阳性73例,阴性27例;影像学诊断阳性76例,阴性24例.S100-A8蛋白在观察组的临床分组(年龄、性别、病程、白细胞、淋巴细胞、中性粒细胞)无统计学意义(P>0.05),在影像学诊断中差异显著(P0.05).ROC曲线分析显示其联合细菌学检测、T-SPOT结果、影像学诊断、抗酸染色结果、病理学具有诊断价值(AUC>0.6,P<0.05).结论:S100-A8蛋白在脊柱结核患者与健康人外周血中存在表达差异,可能成为诊断脊柱结核的新型候选生物标志物.

摘要：星形胶质细胞上调基因-1(AEG-1)是近年来研究较多的癌基因,但在神经系统疾病方面研究尚少。AEG-1与神经退行性疾病有关,然而其具体作用机制尚不明确。本研究通过设计靶向AEG-1 sgRNA序列并合成相应寡核苷酸,将其克隆到GV392质粒中,构建sgRNA/Cas9二合一表达载体,并进行慢病毒包装纯化。用慢病毒感染小鼠海马神经元HT22细胞,进行药物筛选和sgRNA活性鉴定,建立稳定的AEG-1基因敲除的细胞系;并进一步观察神经元HT22细胞的增殖与凋亡能力。结果显示,成功构建了3种靶向AEG-1基因的sgRNA/Cas9二合一表达载体。所设计的sgRNA的插入序列和开放阅读框架完全正确,成功建立了AEG-1基因敲除的稳转神经细胞系。进一步研究表明,AEG-1敲除后的神经HT22细胞与正常神经HT22细胞相比,细胞突起数目减少,细胞周期阻滞,细胞凋亡率减少。以上结果为后续进一步研究AEG-1与神经系统疾病关系奠定了基础。

摘要：目的:很多大学生的学习负担重、业余活动种类与次数少、缺乏同兴趣爱好的圈子。为了丰富大学生的生活,增加大学生交友圈子和活动范围,我们建立了大学生网络交流平台“搭瓣”,让大学生找到志趣相同的人与他们一起学习、旅游、活动,丰富其大学生活。方法:基于用户兴趣和社交信任的聚类推荐,基于位置设计网络的地点推荐和基于双边兴趣的社交网络好友推荐。结果:成功登陆搭瓣系统之后,系统根据大学生所填的真实信息用匹配算法对数据库中已有的大学生进行信息的匹配,将推荐与该大学生志趣相投的人、活动、地点等。结论:大学生网络交往系统“搭瓣”通过好友推荐、地点推荐、兴趣推荐等方式匹配到同一时间去做同一件事的同学,使用简便、便于维护和扩展。