摘要：菜豆荚斑驳病毒（Beanpodmottlevirus，BPMV）是我国对外公布的检疫性有害生物，本研究采用环介导等温扩增技术（100p-mediatedisothermal amplification，LAMP），建立了一种快速、灵敏和特异的BPMV检测方法。根据BPMV外壳蛋白编码基因上的8个位点，共设计了6条引物，通过RT-LAMP扩增得到特征性的瀑布状条带。特异性试验表明，引物对BPMV的检测具有良好的特异性；灵敏度试验显示RT-LAMP比RTPCR灵敏度高1000倍。该方法无需特殊的试剂和设备，只需在水浴锅中60℃等温扩增，整个检测周期约2～2．5h，适合BPMV的快速、准确检测。

摘要：根据菜豆荚斑驳病毒(Bean pod mottle virus,BPMV)不同分离株外壳蛋白基因(coat protein,CP)的保守序列,设计了特异性引物与TaqMan MGB荧光探针,建立了BPMV的实时荧光RT-PCR检测方法。该方法与酶联免疫检测方法相比,灵敏度提高了100倍,具有快速、灵敏和高特异性的优点,适于对BPMV的快速检测。应用该方法,对来自美国不同地区的携带有BPMV的大豆样品进行检测,均能够得到BPMV的典型扩增曲线,表明引物与探针对BPMV不同分离株具有良好的简并性。

摘要：齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)与建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)是严重危害兰科植物的2种主要病毒。本研究根据病毒不同分离株外壳蛋白基因的保守序列,分别设计了ORSV与CymMV各自的特异性引物与荧光探针,建立了基于TaqMan探针的实时荧光RT-PCR检测方法。该方法与酶联免疫检测方法相比,灵敏度提高104倍,具有快速、灵敏和高特异性的优点,适合对ORSV和CymMV的快速检测。应用该方法,从来自台湾的蝴蝶兰样品中检出齿兰环斑病毒。

摘要：花生矮化病毒(Peanut stunt virus,PSV)是我国进境检疫性有害生物。本研究根据该病毒不同分离株外壳蛋白基因(coat protein,CP)的保守序列,设计了特异性引物与TaqMan MGB荧光探针,建立了PSV的实时荧光RT-PCR检测方法。方法特异性研究表明,针对PSV的2个不同株系PSV-E和PSV-W,均能够得到典型扩增曲线,Ct值分别为20.10和21.22;而对于黄瓜花叶病毒、番茄不孕病毒、马铃薯Y病毒、菜豆荚斑驳病毒以及烟草环斑病毒等其他毒株则没有典型扩增曲线,也无Ct值。灵敏度比较发现,该方法比普通RT-PCR检测方法的灵敏度提高100倍,具有快速、灵敏和高特异性的优点,适合对PSV的检测。

摘要：齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)与建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,Cy MV)是严重危害兰科植物的两种主要病毒。本研究根据病毒外壳蛋白基因设计特异性引物,应用ELISA、普通RT-PCR、巢式RT-PCR和免疫捕获RT-PCR4种方法进行了检测研究与比较。结果表明:普通RT-PCR与ELISA方法检测灵敏度相当;巢式RT-PCR检测灵敏度要比普通RT-PCR与ELISA方法高出104倍以上;免疫捕获RT-PCR检测灵敏度介于普通RT-PCR和巢式RT-PCR之间。采用巢式RT-PCR方法对我国台湾进境的蝴蝶兰植株样本检测,1号样本出现与阳性对照一致的特异条带。双向测序分析,扩增产物序列与ORSV外壳蛋白基因具有100%的同源性,表明1号蝴蝶兰样本携带ORSV。

摘要：香蕉苞片花叶病毒(Banana bract mosaic virus,BBrMV)是我国对外检疫性有害生物。为防止该有害生物传入我国,根据BBrMV不同分离株外壳蛋白基因(coat protein,CP)的保守序列,设计特异性引物与TaqMan荧光探针,建立了BBrMV的实时荧光RT-PCR检测方法。结果表明,该方法检测BBrMV的2个不同来源毒株,均能够得到典型扩增曲线,Ct值分别为26.65和27.52;而马铃薯Y病毒、李属坏死环斑病毒以及桃丛簇花叶病毒等其它毒株则没有典型扩增曲线,也无Ct值。灵敏度比较发现,该方法比普通RT-PCR检测方法的灵敏度提高1000倍,具有快速、灵敏和高特异性的优点,适合对BBrMV的检测。

摘要：菜豆荚斑驳病毒（Bean pod mottle virus，BPMV）在美国东部和南部的大豆产区广泛分布。该病毒能够造成3％～52％的产量损失并使大豆品质降低，目前我国未见其分布。针对进口大豆种子的植物病毒检测，本文建立了半巢式RTPCR技术检测BPMV的方法。该方法采用Trizol快速提取大豆种子病毒总RNA，并根据BPMV的外壳蛋白编码基因设计特异性引物，经第一轮RT—PCR和第二轮半巢式PCR扩增．分别得到275bp和196bp大小的特异性基因片段。半巢式RT—PCR扩增产物的测序表明，该产物序列与BPMV的外壳蛋白编码基因存在91％～95％的高度同源性。检测灵敏度比较研究显示，DAS—ELISA与RT—PCR的检测灵敏度相近，半巢式RT—PCR的检测灵敏度比这2种方法高出10^3倍以上。

摘要：阐述了化学实验设计与优化方法中的正交试验设计方法,重点介绍了此方法的优点,特点及其对实验研究的科学指导作用,正交试验设计方法可以用少数几个代表性的实验代表全部实验,节约资源与劳动力,起到事半功倍的效果。确定在所有影响因素中哪个因素的影响最显著,为进一步提高试验设计提供理论基础。

摘要：根据啤酒花潜隐类病毒(HpLVd)各分离物基因序列,设计并合成1对特异性引物和1条TaqMan-MGB探针,建立了对HpLVd的实时荧光RT-PCR检测方法。通过对反应体系的优化,确定了HpLVd的实时荧光RT-PCR最佳反应条件:Mg2+终浓度为5.5 mmol/L,引物终浓度为0.7μmol/L,探针终浓度为0.5μmol/L。灵敏度对比试验结果显示,实时荧光RT-PCR的灵敏度较普通RT-PCR通过琼脂糖凝胶电泳高10倍,在25μL反应体系中,总RNA含量达到20 pg就能通过实时荧光RT-PCR检测出来。此方法也能成功检测田间样品上的啤酒花潜隐类病毒。

摘要：根据烟草环斑病毒(TRSV)外壳蛋白基因序列设计并合成了1组RT-LAMP引物,利用实时浊度仪监测反应过程,初步建立了烟草环斑病毒的RT-LAMP检测方法,并进行了特异性与灵敏度检测。结果显示,RT-LAMP灵敏度与普通RT-PCR法相当,但检测时间明显缩短,1 h即可完成反应。此外,体系中加入钙黄绿素,反应结束后,可通过裸眼观察荧光的有无来判断是否有扩增。对大豆种子中携带的烟草环斑病毒进行了RT-LAMP检测,裸眼判定与仪器监测结果一致。结果证明所建立的TRSV RT-LAMP方法具有快速、特异、灵敏,操作简单的特点,不需复杂仪器设备,适合于TRSV的现场快速检测。