摘要：为准确快速检测检疫性真菌大豆北方茎溃疡病菌,根据大豆北方茎溃疡病菌及其近似种的模式分离物ITS序列差异,设计并合成1对特异性引物和1条MGB探针,建立大豆北方茎溃疡病菌的实时荧光PCR检测方法。特异性试验结果表明:该检测方法能特异性检测大豆北方茎溃疡病菌。灵敏度试验结果表明:最低检测限量为10μL反应体系中总DNA含量1.0 pg;实时荧光PCR优化反应条件为引物终浓度0.5μmol·L^(-1),探针终浓度0.6μmol·L^(-1)。实际样品检测结果表明:该方法可用于疑似受大豆北方茎溃疡病菌侵染的进境大豆样品的检测与初筛。此方法准确、快速、灵敏,整个反应过程约1 h,检测过程完全闭管,无需PCR后续处理,可作为大豆北方茎溃疡病菌检测防控方法。

摘要：随着宠物经济的快速发展,宠物饲料产业面临着前所未有的机遇与挑战。质量安全成为行业发展的关键,而检验检测技术的应用成为保障产品质量与安全的重要手段。本文探讨构建宠物饲料产业检验检测云平台的对策,以技术创新支撑产业高质量发展。通过分析宠物饲料产业的现状与需求,本文提出了一套云平台的技术构建策略,包括平台技术架构设计、数据处理与分析技术、安全与隐私保护技术以及云服务与资源管理技术,以期为宠物饲料产业提供全面、高效的检验检测服务,促进行业的健康可持续发展。

摘要：以丙酮作为有机溶剂,采用加热回流的方法对槐米中的芦丁进行提取纯化。并对工艺条件如水浴温度、水浴时间、丙酮浓度以及料液比四个因素进行单因素试验和四因素三水平响应面试验设计的优化。通过碱溶酸沉和丙酮挥发两次重结晶析出的方法进行粗芦丁的纯化,进而采用高效液相色谱和核磁氢谱检测纯化后的芦丁样品。结果表明,响应面优化试验结果极显著,提取工艺的最佳条件为水浴时间29 min、丙酮浓度54%、料液比8.6 g/L、水浴温度70.4℃,芦丁提取率为(79.17±0.91)%。芦丁样品和标品核磁氢谱图基本一致,芦丁纯化结果为纯度为(96±0.81)%,纯品得率为(71±2.49)%。

摘要：对山茶叶杯菌(Ciborinia camelliae ***)及其近似种的β–微管蛋白(β-tubulin)基因序列进行了比较分析,设计了1对特异性引物和1条探针,建立了山茶叶杯菌实时荧光PCR检测方法。该方法能特异性检测山茶叶杯菌;体系最佳引物浓度、探针浓度分别为0.8和0.7μmol·L^(-1);在10μL反应体系中,最低检测限可达1.0 pg;该方法可用于疑似携带山茶叶杯菌样品的检测与初筛。

摘要：可可花瘿病菌是一种我国进境植物检疫性真菌。本文根据可可花瘿病菌EF1α基因的保守序列,设计并合成1对特异性的实时荧光PCR引物和1条TaqMan MGB探针,建立了可可花瘿病菌的实时荧光PCR检测方法。特异性试验结果表明,该检测方法能够特异性检出可可花瘿病菌;实时荧光PCR优化反应条件为引物终浓度0.2μmol/L,探针终浓度0.6μmol/L;灵敏度试验结果表明,20μL反应体系中可可花瘿病菌DNA含量最低检测限为10 pg;重复性试验结果表明,该检测方法的重复性和稳定性良好;接种试验样品检测结果表明,该方法可用于疑似携带可可花瘿病菌样品的检测与初筛。本文建立的方法具有良好的灵敏性、特异性和应用性,为可可花瘿病菌早期快速检测提供了一种有效手段。

摘要：长孢轮枝菌是一种在我国局部地区新近出现且危害性极大的植物病原真菌。根据长孢轮枝菌及其近似种的actin序列差异,设计并合成特异性引物和探针,建立了长孢轮枝菌的实时荧光PCR检测方法。特异性试验结果表明,该检测方法能特异性检测长孢轮枝菌;灵敏度试验结果表明,最低检测限量为10μL反应体系中总DNA含量10 pg;实时荧光PCR优化反应条件为引物终浓度0.8μmol/L,探针终浓度0.8μmol/L,优化后的整个反应过程约1 h。实际样品检测结果表明,该方法可用于疑似受长孢轮枝菌侵染的萝卜样品检测与初筛。此方法快速、灵敏,检测过程完全闭管,无需PCR后续处理,为早期快速检测长孢轮枝菌提供了重要参考。

摘要：向日葵黑茎病菌是向日葵上的一种毁灭性真菌,是我国的植物检疫性有害生物。为了准确快速检测向日葵黑茎病菌,本研究根据向日葵黑茎病菌及其近似种的ITS序列差异,设计特异性RPA引物和CRISPR-Cas12a crRNA,建立了RPA等温扩增技术结合CRISPR-Cas12a检测的快速检测方法。通过条件优化,RPA/CRISPR-Cas12a检测体系在37℃恒温条件下,RPA反应30 min,CRISPR/Cas12a反应20 min,即可特异性检测向日葵黑茎病菌。荧光法检测灵敏度与实时荧光PCR的灵敏度相当,最低检测量为0.1 pg,试纸条法检测最低检测量为1 pg。由于试纸条检测结果可用肉眼观察,快速便携,操作简单,更适合用于田间和口岸的向日葵黑茎病菌快速早期检测;而荧光检测灵敏度高,对环境要求高,更适合用于实验室检测。

摘要：为准确鉴定骆驼肉乳制品,减少市场中用低价肉乳制品冒充高价肉乳制品的欺诈违法行为,保障食品安全,维护公平合法贸易,建立多重实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)快速高通量检测骆驼核酸的方法。利用多重实时荧光定量PCR法构建肉乳制品中骆驼成分检测方法,设计了哺乳动物18S rRNA基因与骆驼cytB基因的引物探针,对市面上常见肉乳制品进行检测。结果显示,本研究中针对肉乳制品的核酸提取方法不受食品添加剂影响,提取过程简便快捷高效,可于20 min之内完成提取;建立的多重实时荧光定量PCR法具有良好的特异性和灵敏度,在牛奶粉、羊奶粉、驼奶粉、骆驼肉制品、鲜猪肉和鲜骆驼肉6种样本中,成功特异地检测出骆驼成分,且在驼奶粉质量分数为30%、20%、10%、8%、5%、3%、1%和0.5%的条件下进行检测,全部成功检测出,准确度达100%。结果表明,建立的骆驼源性成分多重快速实时荧光定量PCR法可有效鉴别肉乳制品中的骆驼源性基因。

摘要：采用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)进行核酸扩增,凭借横向流动试纸条(lateral flow dipstick,LFD)完成扩增产物检测,建立了可快速检测孔石莼(Ulva pertusa)的LAMP-LFD方法。该方法首先在孔石莼的内转录间隔区序列(internal transcribed spacer,ITS)的8个种内保守区域设计6条特异性引物(上游内引物由生物素标记),进行由生物素标记的LAMP反应;同时,在两条外引物的有效扩增区段内设计1条异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的探针,生物素标记的LAMP产物与FITC标记的探针特异性杂交后,在LFD上完成结果显示。优化后LAMP的反应条件为63°C反应50min,加上探针杂交与LFD检测共需60min。结果表明,利用该LAMP-LFD方法可特异性地检出孔石莼,对浒苔(Ulva prolifera)等9种常见藻类的检测均呈阴性。利用该方法最低可检测到3.04×10^(–2) pg/μL的孔石莼基因组DNA,是以LAMP外引物进行的常规PCR方法的1000倍。针对一定数量的实际样本的检测结果表明,LAMP-LFD方法与传统的形态学观察的结果一致。因此,本研究建立的孔石莼LAMP-LFD快速检测方法,具有特异性强、灵敏度高、操作简便等优点,有望成为我国东部沿海孔石莼快速检测和定期监测的有效技术手段。

摘要：应用环介导等温扩增技术建立一种快速灵敏的转基因番木瓜GM YK品系检测方法。针对转基因番木瓜GM YK品系外源基因与内源基因结合处序列设计1组特异性引物,利用SYBR Green荧光PCR仪实时监测扩增过程,对反应体系进行优化。用优化后的反应体系检测LAMP方法的灵敏性、特异性,并对市售番木瓜进行检测。LAMP检测方法反应速度快,在60 min内即可完成扩增,检测结果易于观察,通过肉眼观察染色情况即可分辨,该方法灵敏度高,检测限可达到5.78 pg,并且具有良好的特异性。LAMP检测方法可快速、灵敏、特异的检测转基因番木瓜GM YK品系,并适用于基层和现场检测。