摘要：目的对比分析体外抗真菌药物敏感性试验CLSIM27-A方案推荐的微量肉汤稀释法和ATBFungus3法。方法采用ATBFungus3法和CLSIM27-A方案推荐的微量肉汤稀释法测定102株临床分离鉴定的假丝酵母菌对常用抗真菌药物的MIC值。结果两种方法所测假丝酵母菌对氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑和两性霉素B的敏感性经配对设计的符号秩和检验,除伏立康唑组外,其他三组差异均无显著性(P>0.05)。结论研究结果表明ATBFungus3法具有操作简便、结果判读客观、量化等特点,对于伏立康唑组,与微量肉汤稀释法比较存在差异,其他三组无差异,但可作为临床微生物实验室抗真菌药物氟康唑的敏感性实验的筛选方法。

摘要：目的探讨颈动脉不稳定型斑块、血脂、血压与急性脑梗死之间的关系。方法行彩色多普勒超声检查了解颈动脉斑块性质,同时对比血脂、血压水平,采用病例对照研究设计比较脑梗死组与对照组之间的差异。结果与对照组比较,脑梗死组斑块检出率高于对照组(2=12.477,P<0.001);且不稳定斑块占脑梗死组检出斑块的70.2%,差异均有统计学意义(2=7.754,P=0.005)。脑梗死患者总胆固醇、甘油三酯、极低密度脂蛋白胆固醇及低密度脂蛋白胆固醇高于对照组,高密度脂蛋白胆固醇低于对照组,差异均有统计学意义(均有P<0.05)。两组检出有不稳定斑块者的高密度脂蛋白胆固醇低于无斑块者、低密度脂蛋白胆固醇高于无斑块者,差异均有统计学意义(均有P<0.05)。脑梗死组收缩压及舒张压均高于对照组,差异有统计学意义(均有P<0.05)。研究对象中既往有高血压病史者中,脑梗死组收缩压和舒张压均高于对照组(t1=3.154,P1=0.003;t2=4.384,P2<0.001),差异有统计学意义。结论急性脑梗死的发病与颈动脉不稳定型斑块、血脂、血压有相关关系,在危险因素出现早期进行积极的干预治疗,对于降低急性脑梗死发病率可能有重要意义。

摘要：目的构建并鉴定弓形虫RH株rop16_(I/III)缺陷虫株。方法利用CRISPR-Cas9技术进行构建基因缺陷虫株。运用E-CRISPR数据库设计gRNA,并使用定点突变试剂盒突变pSAG1::Cas9-U6::sgUPRT质粒上的gRNA,构建pSAG1::Cas9-U6::sgrop16质粒。此外将rop16上游序列、乙胺嘧啶抗性基因、rop16下游序列3个片段连接成donorDNA,克隆于pUC19质粒上,PCR扩增donor DNA片段。pSAG1::Cas9-U6::sgrop16质粒和donor DNA片段电穿孔转染弓形虫,电转后悬液接种于HFF-1细胞中,3μmol/L乙胺嘧啶筛选电转后的虫株。PCR和Western blotting鉴定克隆化筛选虫株。吉姆萨染色分别比较RH株和RHΔrop16株对HFF-1细胞的增殖与入侵。并比较RH株和RHΔrop16株分别感染昆明小鼠后小鼠的生存和死亡率。结果经测序比对,成功构建了pSAG1::Cas9-U6::sgrop16质粒和pUC19-donorDNA质粒。PCR鉴定结果显示,DHFR编码(编码乙胺嘧啶抗性基因)序列成功插入至靶点位置,Western blotting分析结果未见RHΔrop16株有Rop16_(I/III)蛋白表达。吉姆萨染色后计数结果表明,RH株感染的细胞内每个纳虫泡内速殖子的平均数显著高于RHΔrop16虫株。毒力试验结果显示,RH株感染的小鼠在第7d即出现死亡,而rop16_(I/III)缺陷株在第9d出现死亡,但两种弓形虫株感染动物在第10d均全部死亡,两组间无统计学差异。结论利用CRISPR-Cas9技术成功构建了rop16_(I/III)缺陷的弓形虫RH虫株,rop16_(I/III)基因敲除对弓形虫RH株毒力无明显影响。

摘要：目的探讨弓形虫先天感染与脐带血T淋巴细胞亚群构成及妊娠结局的关系。方法2009年3月至2010年5月于合肥市某医院采集784份新生儿脐带血标本，并收集所有新生儿的妊娠结局资料。应用ELISA检测血清弓形虫IgM抗体，对抗体阳性者和10名健康新生儿采用流式细胞术检测脐带血中的T淋巴细胞亚群构成。结果根据弓形虫IgM抗体检测结果，将784名新生儿中分为感染组（21例）和对照组（763名）。感染组体重及1minApgar评分分别为（3116．4±352．6）g、（8．21±1．26）分，低于对照组的（3220．1±242．3）g、（8．77±1．61）分，差异有统计学意义（P值均〈0．01）。感染组中不良妊娠结局占19，O％（4／21），高于对照组的4．8％（37／763），差异有统计学意义（P=0．004）。感染组中伴或不伴不良妊娠结局的新生儿，其脐带血CD3^＋T淋巴细胞比例分别为（64．51±5．27）％、（64．32±4．56）％，低于健康新生儿的（69．92±4．32）％（P值均〈0．01）；其脐带血CD4^＋／CD8^＋分别为1．39±0．24、1．64±0．28，低于健康新生儿的2．34±0．46（P值均〈0．01）。结论弓形虫感染可导致新生儿不良妊娠结局和细胞免疫功能紊乱，妊娠结局与T淋巴细胞亚群构成有关。

摘要：用环介导等温扩增技术(LAMP)快速、灵敏地检测铜绿假单胞菌。利用铜绿假单胞菌gbca基因,特异性设计3对LAMP引物,在反应体系中添加羟基萘酚蓝(HNB)荧光染料,通过反应前后颜色的变化肉眼观察结果,并用琼脂糖凝胶电泳加以验证。对临床标本利用LAMP和PCR法平行检测,验证该法灵敏度、特异性。针对铜绿假单胞菌DNA特异性引物的LAMP法可以扩增,其他无扩增产物。本实验建立的LAMP法具备简便、快速、特异性强和灵敏度高的特点,适于实际应用。

摘要：目的建立一种爆炸及火药燃烧致大鼠吸入性肺损伤的动物模型。方法在火灾模拟平台基础上改装并设计制作爆破箱及致伤室,在线进行烟雾分析;观察动物的临床表现、肺含水率、动脉血气分析、肺大体观及病理改变,了解肺损伤程度。结果烟雾成分包括CO、SO2、NO、NO2,致伤时烟雾中CO浓度(505±23)ppm,SO2浓度(67±4·8)ppm(1ppm=1×10-6,v/v),致伤时间为4min。多数大鼠伤后立即出现呼吸急促,随后呼吸减慢,呼吸困难。伤后早期为代谢性酸中毒,后期为代谢性酸中毒合并呼吸性酸中毒。肺含水率逐渐增加,6h达到高峰,24h仍未恢复正常。肺大体观及病理证实为肺损伤,且4h时出血明显,6h时水肿达高峰,24h仍未恢复。结论成功地建立了爆炸及火药燃烧致大鼠吸入性损伤的动物模型,该模型保证了伤情的稳定,且具有易于复制、重复性好的优点,适用于各种吸入性损伤的实验研究。

摘要：目的对日本血吸虫氧化还原蛋白(peroxiredoxin of schistosoma japonicum,SjPrx)的表达、纯化,接种小鼠和体外刺激脾细胞,研究SjPrx I在体内外诱导免疫应答的作用及可能机制。方法 Gen Bank获取SjPrx编码序列,设计合成引物进行PCR扩增;构建质粒,通过转化将构建的重组质粒转入感受态细胞,然后小量扩增菌株,电泳检测克隆成功表达。蛋白质印迹法(western blot,WB)验证融合蛋白后大量表达纯化。将重组SjPrxⅠ通过腹腔注射BALB/c小鼠,本科联免疫吸附实验和流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测脾细胞分泌细胞因子。结果成功构建了SjPrx I-p ET28a质粒,经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达后得到可溶性SjPrx I,纯化后的SjPrxⅠ免疫小鼠,其淋巴细胞高水平表达Th2细胞分泌的IL-4(t=6.69,P<0.001)、IL-10(z=3.18,P=0.001)和IL-13(t=4.21,P=0.001)。结论制备了重组SjPrx I,初步认为其具有Th2型免疫调节功能,但并不能显著抑制体内业已存在的Th1的偏移。

摘要：目的观察外周血单核细胞的长非编码RNA(lncRNA)在感染人类免疫缺陷病毒(HIV)-1前后的表达差异,并研究差异表达的lncRNAs在HIV-1感染单核细胞中的作用。方法采用基因芯片从HIV-1感染的单核细胞和未感染的对照单核细胞中筛选出表达差异最大的lncRNAs,并进行qRT-PCR验证。设计siRNA并转染到单核细胞中,ELISA检测转染siRNAs前后单核细胞表达白介素(IL)-1β、IL-10和肿瘤坏死因子(TNF)-α的变化。结果基因芯片和qRTPCR结果均显示,单核细胞感染HIV-1后,lncRNA-n266623表达显著上升;在转染lncRNA-n266623的siRNA后,单核细胞分泌IL-1β、IL-10和TNF-α的能力增强。结论 HIV感染单核细胞后能促进单核细胞高表达lncRNA-n266623;lncRNA-n266623可能抑制单核细胞的IL-1β、IL-10和TNF-α的分泌,从而负向调控机体对HIV-1感染的免疫应答。

摘要：目的探讨小干扰RNA(siRNA)在弓形虫体内的对目的基因的表达调节作用。方法以弓形虫嘌呤代谢过程中的关键酶——次黄嘌呤、黄嘌呤、鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HXGPRT)编码基因为靶标,合成3对siRNA,以电穿孔的方式将不同的浓度的siRNA转染弓形虫。采用荧光定量PCR及[3H]-次黄嘌呤摄入量分别检测弓形虫HXGPRT mRNA及酶合成量。结果在针对HXGPRT编码基因设计的3对21nt的siRNA中,有1对(siRNA415)能明显降低HXGPRT mRNA水平及酶合成量。在转染后24h,4μmol/LsiRNA415电转弓形虫的HXGPRT mRNA水平及[3H]-次黄嘌呤摄入量分别降为模拟电转弓形虫的0.36±0.04及0.51±0.03倍(P<0.05)。结论21nt的siRNA在弓形虫体内能有效抑制目的基因的表达。siRNA在弓形虫体内的应用将为阐明未知基因的功能和抗弓形虫药物的筛选提供有力的工具。

摘要：目的　探讨乙型肝炎病毒 (HBV)C基因翻译起始区和C基因区硫代反义寡聚脱氧核苷酸 (ASON)对HBV表达的序列性抑制作用。方法　以 2 2 15细胞系作为实验对象 ,设计了一系列互补于HBVmRNA编码核心蛋白基因区(C区 ) 15聚硫代ASON ,通过脂质体介导将这些合成的外源基因导入 2 2 15细胞中 ,用酶联免疫吸附法 (ELISA)检测作用细胞培养上清液中乙型肝炎病毒E抗原 (HBeAg)和乙型肝炎病毒表面抗原 (HBsAg)含量。 结果　与HBVmRNAC基因起始区互补的硫代ASON序列特异性地抑制乙型肝炎病毒基因表达 ,而正义硫代寡聚脱氧核苷酸未见有抑制效应 ,与HBVmRNAC基因内部互补的序列很少或无抗病毒活性。另外 ,硫代ASON对细胞生长无毒性作用。结论　硫2 0 0 1 0 7 0 3收稿 ,2 0 0 1 10 15修回作者单位 :1 安徽医科大学第一附属医院检验科 ,合肥　 2 30 0 2 22 安徽医科大学生化教研室 ,合肥　 2 30 0 2 2作者简介 :吴　庆 ,女 ,36岁 ,主管技师 ,硕士研究生 ,主攻方向 :生物化学张在和 ,女 ,6 2岁 ,教授 ,硕士生导师 ,研究方向