摘要：目的构建对人乙酰肝素酶(HPA)基因有特异性抑制作用的短发夹状RNA表达载体。方法根据GenBank数据库提供的人HPA基因核苷酸序列,按照shRNA设计原则设计5对特异性的寡核苷酸序列及阴性对照,分别克隆到pGPU6/GFP/Neo载体中,酶切鉴定和测序验证阳性克隆。用脂质体转染入MDA-MB-231细胞,分别以荧光定量PCR、Western blot分析其对HPA在mRNA水平和蛋白质水平上表达的影响。结果经酶切、测序鉴定均证实重组质粒构建成功。在构建的5个载体中,HPSE-1组及HPSE-5组中MDA-MB-231细胞HPA基因mRNA和蛋白质表达水平明显下降,而对照组未发生明显改变。结论成功构建了2个靶向人HPA的shRNA表达载体,转染MDA-MB-231细胞后可高效抑制HPA基因表达,为进一步研究HPA的表达与乳腺癌迁移和侵袭的机制奠定了基础。

摘要：目的构建对人乙酰肝素酶(hpa)基因有特异性抑制作用的短发夹RNA(shRNA)表达载体。方法根据GenBank数据库提供的hpa基因核苷酸序列,按照shRNA设计原则设计5对特异性的寡核苷酸序列及阴性对照,分别克隆到pGPU6/GFP/Neo载体中,酶切鉴定和测序验证阳性克隆。结果经酶切、测序鉴定均证实重组质粒构建成功。结论成功构建了5个靶向人hpa的shRNA表达载体,为进一步研究该载体转染MDA-MB-231细胞后对hpa基因的沉默效果奠定基础。