摘要：为建立高效检测牛结节性皮肤病病毒(lumpy skin disease virus, LSDV)的血清学方法,本研究设计优化LSDV RNA聚合酶30亚基(RPO30)蛋白的密码子,构建其原核表达质粒pET-25b-RPO30,并进行诱导表达和阴离子纯化。纯化后的RPO30蛋白可以被LSDV的阳性血清识别,具有良好的反应原性。用纯化的RPO30蛋白免疫BALB/c小鼠,并将免疫小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合,筛选到能够稳定分泌抗体且具有竞争效果的杂交瘤细胞株1H1。以重组RPO30蛋白为包被抗原,经反应条件的优化,建立了基于RPO30蛋白的竞争ELISA(cELISA)抗体检测方法。本研究建立的cELISA检测方法的最适抗原包被质量浓度为1 mg/L,用含5%牛血清白蛋白(BSA)的PBST作为封闭液37℃孵育2 h,待测血清的最适稀释度为1∶2,1H1抗体稀释度为1∶2 000,兔抗鼠HRP-IgG稀释度为1∶4 000,最佳显色条件是37℃反应15 min。当检测样品的1-S/P≥0.55,判定结果为阳性;当检测样品的1-S/P<0.55,判定结果为阴性。利用该方法检测了LSDV、牛传染性鼻支气管炎病毒(IBRV)、牛支原体(***)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛布鲁杆菌(***)、口蹄疫病毒(FMDV)阳性血清,结果显示除了LSDV检测结果阳性外,其他病原的检测结果都是阴性,说明本方法特异性强。利用本试验建立的cELISA检测有免疫背景的临床血清200份,结果显示,其可用于临床疫苗免疫效果的评估。本研究基于重组RPO30蛋白建立的cELISA方法操作简单、特异性强、敏感性高、重复性好,为LSDV的检测和预防提供了可靠的技术支持。

摘要：生物安全是规模化猪场的生命线,尤其是目前正处于我国非洲猪瘟严峻防控形势下,只有将猪场建设和管理中各类技术的集成应用合理设计好,才能建立稳固、高效的生物安全体系。而种公猪站是相对独立的生产场所,对其提供精液的规模化猪场及散养户有着极其重要的影响,只有公猪的健康生长才能保障整体猪群的健康水平,才能保障配种母猪的受胎率和产仔数,才能切实有效的提高生产效率,这其中涉及到厂址选择、猪场的建设及环境控制技术、员工及车辆的管理、消毒措施等。本文主要针对几个关键性环节,阐述在实际生产中有关生物安全体系建设的几点体会与建议。

摘要：按照中华人民共和国农业行业标准(NY/T 772-2004)设计合成了针对H5的引物,建立了一种对禽流感(AIV)一步法RT-PCR的快速诊断方法。结果表明,该方法具有高效,快速,特异性强,敏感性高等特点,可基本满足当前的检测需要。