摘要：本研究旨在探讨日粮中不同钼铜水平对肉牛血液生化指标的影响。选用性别一致、年龄、体重相近(340±10)kg的3头健康未去势公牛作为试验动物。试验采用3×3拉丁方设计,分2期进行,第一期日粮钼的水平为0.27 mg/kg DM,第二期钼的水平为5.27 mg/kg DM。每期日粮铜的添加量分别为:10 mg/kg(低铜组),25 mg/kg(中铜组),50 mg/kg(高铜组)3个水平。颈静脉采血测定血铜、血清铜蓝蛋白(ceruloplasmin,Cp)和血浆中过氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活性。试验结果表明:在同一钼水平下,随铜水平的增加,牛体内血铜含量、血浆中SOD活性和血清Cp的活性逐渐增加。其中钼水平为0.27 mg/kg时,这种变化不显著(P>0.05)。钼水平为5.27 mg/kg时,添加10 mg/kg铜,血铜含量和血浆中SOD活性显著小于其他2个铜水平(P<0.05),Cp活性小于其他2个铜水平,且差异极显著(P<0.01)。在同一铜水平下,低钼组2种酶的活性普遍高于高钼组。日粮钼水平为0.27 mg/kg时,添加10 mg/kg铜可满足机体需要;日粮钼水平为5.27 mg/kg时,添加25 mg/kg铜较适宜:牛在缺铜时,与血浆SOD的活性比较,血清Cp更宜作为评价铜营养缺乏的指标;铜满足机体需要后,血铜、血清Cp和血浆SOD均对铜和钼的变化不敏感。血铜和血清铜蓝蛋白与日粮铜水平呈强相关。

摘要：本试验旨在研究全混合日粮粗饲料水平对奶牛挑食行为、瘤胃内环境及血清指标的影响。选用12头泌乳中期[泌乳天数(119±26)d]经产荷斯坦奶牛[体重(629±46)kg],随机分为4组,每组中1头安装瘤胃瘘管,按4×4拉丁方设计,饲喂粗饲料水平分别为40%、50%、60%和70%(干物质基础)的4种全混合日粮。共进行4期动物试验,每期试验21 d。结果表明:饲粮粗饲料水平对奶牛挑食行为有显著(P40%时,奶牛喜食粒度0.05)。随饲粮粗饲料水平的增加,瘤胃液外流速度和瘤胃固相外流速度呈显著线性增加(P0.05);血清胰岛素样生长因子-1(IGF-1)含量呈显著线性增加(P<0.01),瘦素(LEP)和非酯化脂肪酸(NEFA)含量有线性增加趋势(0.05≤P<0.10),血清生长激素(GH)和胰岛素(INS)含量有线性降低的趋势(0.05≤P<0.10)。综上所述,饲粮粗饲料水平是影响奶牛挑食行为、瘤胃内容物及血清指标的重要因素。

摘要：建立适于基层实验室快速检测新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)的一步反转录环介导等温扩增(RT-LAMP)方法。基于新型鸭呼肠孤病毒S3基因的6个保守区域设计了4条LAMP引物,利用Bst DNA聚合酶在63℃恒温保持45 min即可完成反转录和扩增反应,由此建立了RT-LAMP检测方法。该方法具有良好的特异性,除NDRV外对其他6种常见鸭病的检测结果均为阴性。该方法对病毒RNA的最低检出量为0.1 pg,是常规RT-PCR方法的100倍。临床应用结果表明,该方法与病毒分离鉴定方法的符合率为98%,而且对仪器的要求低,适于基层实验室和现场检测。

摘要：本试验旨在研究不同加工工艺小麦对肉牛养分消化率、小肠消化酶活性及血清代谢产物含量的影响。试验采用4×4拉丁方设计,选取4头30月龄平均体重为(400±10)kg的利鲁杂交(利木赞牛×鲁西黄牛)阉牛,安装永久性瘤胃、十二指肠近端和回肠末端瘘管。4种饲粮分别为:粉碎小麦饲粮、破碎小麦饲粮、压片小麦饲粮和膨化小麦饲粮。共进行4期试验,每期预试期13 d,正试期3 d。结果表明:1)膨化小麦饲粮干物质、有机物、粗蛋白质、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维的消化率均显著高于其他处理小麦饲粮(P0.05)。综合以上结果,对小麦进行不同加工处理,能影响肉牛养分利用率和小肠中消化酶的活性,但没有影响肉牛血清代谢产物及全血指标。

摘要：为建立针对猪瘟病毒(CSFV)的快速诊断方法,根据猪瘟病毒石门强毒株(GenBank ID:AF092448.2)已公布的Erns基因序列设计并合成特异性引物及探针,建立针对Erns基因的TaqMan荧光定量PCR检测方法,验证其特异性、敏感性、重复性,并进行临床样品及重组病毒的检测。结果显示,建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法的Ct值与标准品在1×10^(9)~1×10^(2)copies/μL范围内具有很好的线性关系,相关系数为0.99,斜率为-3.661 5,检测下限为1.0×10^(1)copies/μL,与其他能引起相似临床症状的猪源病毒无交叉反应。重复性试验结果显示,组间与组内变异系数均小于2.925 02%,证实该方法重复性好。本方法适用于临床样品中CSFV抗原核酸的检测,同时也可以用于CSFV在细胞上增殖情况的检测和本实验室构建的表达CSFV Erns基因的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的鉴定及检测,对于临床上CSFV抗原检测、CSF诊断及CSFV的实验室研究有重要意义。

摘要：为了获得具有良好免疫活性的基因工程抗原蛋白,利用毕赤酵母真核表达系统,表达猪传染性胃肠炎(河北分离株)的纤突糖蛋白。根据Gen Bank TGEV S基因设计一对引物,经PCR扩增出长2.2 kb的目的基因S,将S基因亚克隆于p PIC9k载体,转化TOP10感受态,PCR、酶切鉴定阳性克隆,SalⅠ线性化重组穿梭质粒pPIC9k-S,然后电转GS115感受态,利用G418抗性进行多拷贝整合子初步筛选,提取基因组并做PCR鉴定,得到阳性菌株,经诱导发酵后,上清发酵液经SDS-PAGE电泳检测,显示获得分子量为82 kDa左右的目的蛋白,同时用Western-Blotting检测到一条特异的目的条带;用目的蛋白免疫小鼠,ELISA检测免疫S蛋白小鼠血清抗体效价为1∶100,表达蛋白具有免疫活性。

摘要：为建立检测鸡天然免疫相关受体(Ch-MDA5、Ch-TLR3和Ch-TLR7)及其相应配体(MAVS、TRIF和MyD88)的荧光定量PCR方法并评价其应用效果,设计和筛选特异性PCR引物,制备各基因的质粒标准品,绘制荧光定量PCR的标准曲线,并对方法的灵敏度、重复性和特异性进行检验。结果表明,所建立的检测方法敏感度高、特异性强、检测线性范围广、重复性好。应用建立的方法检测新城疫油乳剂灭活苗免疫SPF鸡后上述基因表达的变化,发现免疫后6h各基因的表达水平达到峰值,表明疫苗免疫迅速有效地激活了机体的天然免疫应答。建立了与鸡抗病毒感染天然免疫相关的3种细胞受体和相应配体的定量检测方法,可应用于病毒致病机制、鸡用新型疫苗、免疫增强剂以及抗病毒药物的研究与开发。

摘要：参考禽流感病毒(AIV)基质蛋白(M)基因设计了两对引物,特异性识别其6个不同位点,建立了基于颜色判定的环介导等温扩增反应(LAMP)方法。试验对不同禽源病毒进行了测试,结果发现该方法仅特异性地检出禽流感病毒(H9和H5亚型)核酸,对AIV病毒的检测极限为10 EID50。人工感染病料检测结果与鸡胚病毒分离法的符合率为96.7%。数据表明,建立的LAMP方法特异、敏感、简便,在禽流感的诊断中具有很大的临床应用潜力。

摘要：为了分析猪流行腹泻病毒(PEDV)在山东地区的流行和遗传变异情况,对2013—2015年收集的临床腹泻样品,参照GenBank中已经发表的PEDV毒株的N基因序列,设计1对特异性引物,利用RT-PCR技术检测PEDV抗原,并对其中的16份阳性样品进行病毒分离与S1基因测序分析。将含有PEDV流行株S1基因其中1个抗原表位(83~276aa)的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞融合技术,筛选获得2株针对PEDV S蛋白抗原表位的杂交瘤细胞,其中1株(1E5)可以区分PEDV经典毒株和流行毒株。临床检测结果表明:PEDV临床检出率由2013年的57.8%提高到2015年的75.68%,PEDV在山东地区的发病季节除春冬季节,近年夏季也呈高发趋势,且各地区均有不同程度的感染。PEDV S1基因序列分析结果表明:分离到的16株PEDV毒株间的S1基因的核苷酸序列同源性为91%~99.8%,氨基酸序列同源性为87.8%~99.7%;山东分离毒株与15个国内外参考毒株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为90.5%~100%和88.4%~99.9%。对S基因分子流行病学分析发现,7个国外参考毒株、8个国内参考毒株与本次分离到的16个PEDV毒株被分为2个不同的进化分支G1和G2。在2013-2015年分离到的16株毒株中,有3株位于G1中,且距离CV777经典毒株较近;剩余的13株位于G2中,G2则以近年流行毒株为主,而山东分离株主要在G2分支中,这也解释了现有CV777疫苗毒株在山东地区的免疫保护力不佳的原因。本研究结果不仅从分子流行病学角度分析了山东地区PEDV的流行和变异情况,为指导该地区PEDV疫病防制提供了新的参考,并且制备了能够区分PEDV经典毒株和流行毒株的S蛋白单克隆抗体,为本病的实验室鉴别诊断提供了有效的检测工具和重要的理论基础。

摘要：为了筛选出对猪体有免疫刺激活性的CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN),设计了9种未甲基化CpG-ODN不同序列,通过人工合成,分别作用于猪外周血淋巴细胞和脾细胞,进行健康猪外周血淋巴细胞和脾脏免疫细胞体外转化试验。用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测外周血淋巴细胞转化效果和脾细胞的增殖能力和代谢能力,通过测得的OD490值,计算出淋巴细胞增殖指数(SI),筛选CpG-ODN的免疫刺激作用。结果显示:9种不同序列的CpG-ODN对猪外周血淋巴细胞和脾脏免疫细胞均具有不同程度的刺激效果,其中CpG-ODN6、CpG-ODN7刺激强度极显著。为研制DNA疫苗有效的CpG-ODN免疫佐剂奠定基础。