摘要：试验旨在构建一株高效表达猪CD163(pCD163)的Marc-145细胞系,为猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的临床分离和疫苗生产奠定基础。根据GenBank中序列设计引物从猪肺泡巨噬细胞(PAM)中扩增pCD163基因,将其插入真核表达载体pCI-neo构建真核表达质粒pCIpCD163,将该重组质粒转染Marc-145细胞,通过G418筛选、单克隆化并扩大培养筛选获得表达pCD163的Marc-145细胞系,IFA、Western blotting鉴定其表达情况。IFA结果显示,构建的pCD163-Marc细胞系中荧光明显亮于普通Marc-145细胞;Western blotting结果显示,pCD163-Marc细胞系中CD163蛋白表达量约为对照Marc-145细胞中CD163蛋白表达量的8.7倍。且该细胞系可稳定传至20代,各代次之间表达量无差异。证明高效表达猪CD163的Marc-145细胞系构建成功。

摘要：采用全收粪尿和回肠瘘管法研究了日粮粗纤维水平和不同杂交组合猪对氮代谢和回肠末端营养物质表观消化率的影响。采用二因子二水平有重复设计,选用4月龄莱芜猪及其杂交猪,饲喂不同粗纤维含量（3%、6%、9%、12%）的日粮。日粮纤维水平对食入氮（IN）、粪氮（FN）、消化氮（DN）、沉积氮（RN）、氮表观消化率影响极显著（P〈0.01）,对尿氮（UN）影响显著（P〈0.05）;杂交组合对IN、FN、DN、RN、ABV影响极显著（P〈0.01）。日粮纤维在较低水平（3%~6%）,CP消化率随粗纤维含量增加而提高,随粗纤维含量增加（6%~12%）,营养物质消化率显著降低（P〈0.05）;杂交组合对干物质、CP、钙（Ca）、磷（P）消化率影响极显著（P〈0.01）,莱芜猪对中性洗涤纤维（NDF）的消化率为51.44%,大约克猪为43.51%,差异显著（P〈0.05）;NDF和酸性洗涤纤维（ADF）表观消化率随试验猪含莱芜猪血统比例的降低而显著降低;日粮纤维在3%~6%范围内,除赖氨酸、蛋外的必需氨基酸（EAA）随日粮纤维水平的增加显著降低;杂交组合对EAA表观消化率除赖氨酸、苏氨酸、异亮氨酸外均不显著（P〉0.05）。日粮纤维对猪营养物质的消化吸收具有正负两方面的效应,杂交组合对氮利用率和粗纤维的消化分解率不同。

摘要：根据GenBank上发表的curli菌毛csgC基因序列,设计了一对特异性引物。从患乳腺炎的奶牛乳汁中分离出致病性大肠杆菌,经生物学鉴定后,提取全基因组DNA为模板,PCR扩增出csgC基因,连入pMD18-T克隆载体,测序。结果表明,扩增片段含有333个核苷酸,编码111个氨基酸的成熟蛋白,与已报道的大肠杆菌W3110的全基因组DNA中的csgC基因序列最相近,氨基酸序列同源性为99.7%。Curli菌毛csgC基因的克隆,为获得重组csgC蛋白及对其结构和功能的研究奠定了基础。

摘要：选用9只安装有永久性十二指肠近端瘘管,体重20～23kg的2.5周岁内蒙古白绒山羊半同胞羯羊进行试验,试验采用随机区组试验设计,3个试验处理组分别为M85+C15理想模式条件下的3种葡萄糖灌注水平,葡萄糖灌注剂量分别为0g/d(1组)、20g/d(2组)和35g/d(3组)。结果表明:十二指肠葡萄糖灌注水平对粗毛的长度有显著影响,2组、3组显著高于1组(p0.05);对粗毛的纤维体积有显著影响,3组明显高于1组(p<0.05)。

摘要：为了表达鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白A(ompA),参照其已知的全基因序列设计1对特异性引物,经PCR扩增得到目的片段约1 200 bp,然后克隆入pET-28a(+)载体中,经测序比较,与标准序列的核苷酸同源性达99.8%;同时经诱导表达后,SDS-PAGE结果显示,ompA得到高效表达,Western-blotting检测,RA1,RA2,RA 10,RA11型全菌兔血清呈阳性,而阴性兔血清不反应。说明表达蛋白具有高度免疫反应特异性。

摘要：为快速准确区分PRRS流行毒株与减毒活疫苗TJM-F92株以及对流行毒株进行定量检测,按GenBank中发表的美洲型PRRSV SX-1分离株、弱毒疫苗株NSP2基因缺失部位的不同设计了一对特异性引物,通过RT-PCR和体外转录的方法,构建了体外转录RNA作为标准品,并对反应条件和反应体系进行优化,旨在建立一种敏感性高、特异性强、重复性和稳定性良好的qPCR鉴别方法。结果表明,该方法最低能检测出1.0×101拷贝/μL的模板,敏感性比常规PCR高100倍;应用该方法对218份临床样本进行鉴别与定量,qPCR检出率较常规RT-PCR高12.9个百分点。研究表明,qPCR鉴别方法的建立实现了对PRRS流行毒株与疫苗毒株的快速区分以及对流行毒株的定量检测,为PRRS的快速诊断提供了依据。

摘要：目的:利用巴斯德毕赤酵母表达系统表达猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)纤突糖蛋白S。方法:根据GenBank中猪TGEV纤突糖蛋白S全基因设计一对引物,并在5'引物和3'引物中引入EcoRⅠ、NotⅠ酶切位点,2.2kb的目的基因S经PCR扩增后克隆于pBS-T载体,再将S基因经双酶切从T载体切下并与穿梭质粒pPIC9k连接,SalⅠ线性化重组穿梭质粒pPIC9k-S,电转化于毕赤酵母GS115感受态细胞,G418筛选鉴定阳性重组子,经甲醇诱导,SDS-PAGE检测诱导后上清。结果:对pPIC9k-S重组酵母表达载体的测序证实已成功克隆了猪TGEVS基因;重组酵母菌诱导表达后,SDS-PAGE检测结果显示表达产物的相对分子质量约为82×103,且S蛋白以可溶性形式分泌表达于胞外。结论:利用巴斯德毕赤酵母真核表达系统成功表达了猪传染性胃肠炎病毒(河北分离株)纤突糖蛋白S。

摘要：本研究根据Genbank登录的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N基因和S基因保守区序列设计合成了两对引物和探针,通过对荧光定量RT-PCR反应条件的优化,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR快速检测TGEV的方法。该方法能有效地鉴别序列密切相关的猪传染性胃肠炎病毒与呼吸道冠状病毒。与常规RT-PCR试验比较表明,所建立的荧光RT-PCR检测技术快速、敏感,检测时限3个小时以内,具有很好的特异性和重复性。通过对39份临床样品进行检测,结果表明所建立的检测方法直接检测样品中猪传染性胃肠炎病毒。

摘要：从山东省某海兰褐鸡场祖代、父母代种鸡和商品代蛋鸡中获得疑似血管瘤型禽白血病(Avian leukosis,AL)病料。采用病理剖检、IFA、分子生物学检测,确定为J亚群禽白血病。从祖代、父母代病料中各分离到1株J亚群禽白血病病毒(J subgroup of avian leukosis virus,ALV-J),从商品代蛋鸡中分离到4株ALV-J。根据原型毒株HPRS103设计1对gp85基因引物,获得gp85基因序列。获得的gp85基因序列与各亚群参考毒株序列核苷酸同源性比对,结果显示:分离自商品代蛋鸡的Commercial03株、Commercial04株、Commercial06株和父母代分离株Parent02株位于同一分支,同源性在97.2%～97.9%,与HPRS103株同源性94.7%～95.2%;Commercial05株与祖代分离株Grandparent01株在同一分支,与HPRS103株同源性为98.3%,4株分离自商品代的ALV-J同源性为95.0%～99.9%。表明商品代蛋鸡中的ALV-J可能来自父母代或祖代种鸡的垂直传播,也可能来自于其他来源的水平传播。从同一鸡场祖代、父母代及商品代鸡中分离得到ALV-J,这在我国还是首次。对后续研究其基因突变、致瘤机制等奠定了良好的基础。

摘要：为了探讨不同抗生素对0 ～28日龄岭南黄肉鸡生产性能和肠道免疫水平的影响,试验选用体型均匀、体重接近的1日龄岭南黄肉鸡240只、采用单因子完全随机区组设计,分为4组,每组3个重复,每个重复20只.Ⅰ组为对照组,饲喂不含抗生素的基础日粮,Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组为试验组,分别添加4 mg/kg的盐酸林可霉素、50 mg/kg杆菌肽锌及20 mg/kg硫酸粘杆菌素.结果表明：与Ⅰ组相比,三种抗生素均能显著提高岭南黄肉鸡的日增重（P＜0.05）,对料肉比影响则不显著（P＞0.05）；仅盐酸林可霉素能显著提高岭南黄肉鸡的采食量（P＜0.05）.Ⅱ组、Ⅲ组十二指肠和回肠TLR2 mRNA表达量显著降低（P＜0.05）,Ⅳ组回肠段TLR4 mRNA表达量显著降低（P＜0.05）.Ⅱ、Ⅲ组肉鸡的肠道IL-6、TNF-α、n-10的mRNA基因水平显著降低（P＜0.05）,同时sIgA分泌量减少（P＜0.05）.Ⅳ组肉鸡肠道炎症细胞因子基因mRNA水平并未出现降低（P＞0.05）,但sIgA分泌量增加（P＜0.05）.结论：三种抗生素均可提高岭南黄肉鸡的日增重,并能降低肉鸡肠道免疫水平.