摘要：2010年,辽宁铁岭某种鸡孵化场出现孵化率低、死淘率高的现象。通过对送检病死鸡胚进行病原检测,最终检测出5株革兰阴性杆菌和3种病毒,其中禽波氏杆菌和奇异变形杆菌的检出率分别为76.44%、61.36%,两者混合感染率达51.83%,而其他病原菌(大肠杆菌、沙门菌、绿脓杆菌)和病毒(ALV、REV、CIAV)的检出率均较低。采用1对根据病原菌23SrRNA基因的共同保守序列设计的引物,以及根据临床常见致病菌16S～23SrRNA基因间隔序列(ISR)两端的16S及23SrRNA保守序列而设计的通用引物分别对分离菌进行PCR扩增。并分别测定所得片段的DNA序列。结果显示,所得DNA片段分别与GenBank中收录的登录号为HM545299的禽波氏杆菌和登录号为AY993943的奇异变形杆菌的相应核苷酸序列同源性达99.5%和98.7%。本研究最终确定禽波氏杆菌和奇异变形杆菌的混合感染是引起该场疫情发生的主要原因。

摘要：本文旨在克隆禽波氏杆菌外膜蛋白OmpA的编码基因,并预测OmpA蛋白二级结构和B细胞抗原表位,从而探讨禽波氏杆菌外膜蛋白OmpA在免疫保护中所起的作用。作者对禽波氏杆菌的外膜蛋白ompA基因进行PCR扩增、克隆及序列测定。应用生物信息学相关软件和方法,对禽波氏杆菌OmpA蛋白的二级结构和B细胞抗原表位进行预测。禽波氏杆菌ompA基因全长597bp,编码199个氨基酸。二级结构以无规卷曲为主,有少量的α-螺旋和β-片层,少见β-转角;推测OmpA蛋白有5个B细胞优势抗原表位区域、2个糖基化位点。本研究为进一步分析禽波氏杆菌免疫机理、制备单克隆抗体和设计表位疫苗等奠定理论基础。

摘要：2012年初,山东菏泽某羊场的羊群发病,从发病羊器官分离到2株病原细菌。对病原细菌进行鉴定,并对其与已知同种异源菌株相似性差异进行分析。从患病山羊内脏器官分离细菌,经形态特征、培养特性、生化试验、血清学试验及致病性试验进行鉴定;再通过设计通用引物扩增16S-23SrRNA ISR(intergenic spacer region)序列,将PCR产物经HinfⅠ单酶切获得3条可视条带,同时对扩增条带中的主带测序并进行系统发育分析。结果表明,分离菌株为奇异变形杆菌;分离菌株同本实验室保存的兔源与鸡源奇异变形杆菌PCR-RFLP结果一致;分离菌株PCR产物同GenBank收录的HI4320株奇异变形杆菌及本实验室保存的兔源与鸡源奇异变形杆菌进行序列比较,分离羊源菌株与兔源菌株相似性为94.8%、与鸡源菌株相似性为96.0%～98.2%,与人源HI4320株相似性为96.9%。研究证实发病羊致病病原为奇异变形杆菌,其与鸡源、兔源和人源奇异变形杆菌的亲缘关系较近。

摘要：选择B亚型禽白血病病毒(ALV-B)感染雏鸡造成免疫机能低下,建立免疫抑制模型,以探索免疫抑制条件下共感染禽波氏杆菌后对雏鸡致病性的影响。设计了ALV-B单独感染组,***单独感染组,ALV-B和***共感染组,空白对照组,并且比较相互之间的差异。通过对雏鸡免疫学指标、生长性能及病毒血症和排毒状况的检测,对二者混合感染雏鸡的影响进行了研究。结果显示,ALV-B和***共感染能引起雏鸡的免疫力低下,表现为免疫器官的发育、抗体的产生、淋巴细胞的转化、IL-2和IFN-γ的合成和分泌等受到明显抑制;混合感染组延长了***的病程,增强其对雏鸡的致病性;同时机体出现明显的生长迟滞现象,尤其是第5周龄,共感染组平均体质量仅相当于对照组的40%。结果表明,ALV-B和***在雏鸡体内的增殖方面起协同作用,从而促进了病原在鸡群间的散播;而***对ALV-B导致的病毒血症有一定的抑制作用。在ALV-B免疫抑制作用下,***对雏鸡的致病性显著增强。

摘要：根据临床常见致病菌16S-23SrRNA基因间隔序列(ISR)两端的16S及23SrRNA保守序列设计PCR扩增的通用引物,对9株奇异变形杆菌和6株相近菌株应用通用引物PCR扩增16S-23SrRNA ISR序列。通过PCR长度多态性比较、RFLP分析以及部分序列测序比较,分析鉴别奇异变形杆菌。结果显示,PCR长度多态性可以将奇异变形杆菌同其余菌种进行区分;RFLP分析可以将所有试验菌种进行区分;部分序列测序可以对奇异变形杆菌进行分型。由此表明,16S-23SrRNA ISR序列PCR及RFLP分析可以简单、快速、准确的鉴定奇异变形杆菌。

摘要：为建立同时检测禽波氏杆菌(Bordetella avium)、沙门氏菌(Salmonella)、大肠杆菌(Escherichia coli)和绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)4种导致鸡胚死亡病原菌的多重PCR方法,本研究根据***的ompA基因、Salmonella的invA基因、***的phoA基因和***的toxR基因序列,各设计一对特异性引物进行多重PCR反应,并对反应体系和条件进行优化。结果显示,4对引物分别扩增出597bp、724bp、372bp和278bp的目的条带;并且特异性强不与其他非目的菌发生反应。经优化***、***和***多重PCR检测灵敏度达到104cfu/mL,而Salmonella为103cfu/mL。本研究建立的多重PCR方法为相关病原菌的快速检测提供方法。

摘要：根据GenBank中肺炎克雷伯菌Ⅲ型菌毛结构基因A(MrkA)JF759921的序列设计1对引物,对8株毛皮动物肺炎克雷伯菌进行克隆测序,并应用生物信息学相关软件和方法,预测MrkA蛋白二级结构和B细胞抗原表位。PCR扩增出了609bp的目的基因片段,生物信息分析结果显示其开放阅读框架为609bp,编码202个氨基酸;二级结构以无规卷曲为主,有少量的α-螺旋和β-片层,少见β-转角,推测MrkA蛋白有8个B细胞优势抗原表位区域。结果表明,MrkA基因较稳定,其在进化过程中并未发生明显变异,为进一步分析肺炎克雷伯菌免疫机理、制备单克隆抗体和设计表位疫苗等奠定理论基础。

摘要：CLOCK基因是一种与生物节律相关的基因,对维持正常的近日节律起重要作用。本研究旨在分析鸡CLOCK基因在不同组织间的表达以及在同一组织中的节律性表达情况。根据鸡CLOCK基因mRNA序列(登录号:NM_204174)设计特异性引物,利用QRT-PCR方法,检测早上(06:00)、中午(12:00)、傍晚(18:00)3个时间点CLOCK基因在下丘脑、心脏、肝脏、脾脏等17种组织中的表达。结果表明:鸡CLOCK基因在各组织中均有表达,在胸肌中的表达量极显著高于其他各组织(P<0.01),为心脏表达量的1.99倍;在同一种组织不同时间点的表达呈现出一定的节律性,心脏、肝脏、肌胃中表达量持续升高,下丘脑、回肠、空肠、盲肠、腺胃等先升高后降低,且在空肠、盲肠、腺胃中表现出显著的节律性,脂肪中先降低后升高,脾脏、卵巢中持续下降。结果显示,鸡CLOCK基因表达存在时空特异性,并呈现较强的节律性。

摘要：2013年初,山东潍坊某羊场的羊群发病,从发病羊器官分离到2株病原细菌。对病原细菌进行鉴定,并对其与已知同种异源菌株相似性差异进行分析。对分离的菌株经形态特征、培养特性、生化试验及致病性试验进行鉴定,再通过设计通用引物扩增分离菌株16S rRNA基因,测序后进行序列比较和系统发育分析。结果显示:分离菌株为鲍曼不动杆菌,耐药性强,仅对舒巴坦和强力霉素敏感,对小白鼠具有较强致病作用,2株分离菌株核苷酸序列之间同源性为100%,与GenBank中收录的NC009085株(人源)鲍曼不动杆菌标准菌株核苷酸序列同源性为100%,与绵羊源、牛源、鹅源鲍曼不动杆菌参考菌株核苷酸序列同源性分别为100%、99.9%、99.9%。可见该分离株与人源、绵羊源、牛源和鹅源鲍曼不动杆菌的亲缘关系较近,可能为人畜共患病病原体。