摘要：目的　探讨反义寡核苷酸的体外抗病毒作用 ,为基因水平上防治乙型肝炎病毒 (HBV)感染及HBV相关肝细胞癌的基因治疗提供实验依据。方法　用PCR方法分别合成了互补于HBVX基因的翻译起始区、DR2区、ENⅡ区的反义寡核苷酸 (AsON)及无关序列 ,其中针对ENⅡ设计的AsON ,目前尚未见互补于该区段反义寡核苷酸的报道。以HBVDNA转染的HepG2 2 15细胞为靶细胞 ,ELISA法检测AsON作用前后细胞上清中的HBsAg和HBeAg分泌情况。结果　当AsON的最佳作用浓度为 10 μmol L时 ,3种反义寡核苷酸对HBsAg和HBeAg抑制率分别为 :5 7%、6 0 %、5 2 %和 5 6 %、45 %、5 6 % ,AsON对HBV抗原的抑制作用具双峰现象。无关序列无明显抑制作用 (<12 % )。利用锥虫蓝染色、四甲基偶氮唑盐比色试验观察到当AsON作用浓度为 40 μmol L时 ,对细胞代谢无明显毒副作用。结论　反义寡核苷酸封闭HBVX基因区的关键区段 ,可有效抑制HBV抗原的分泌。

摘要：目的 :从大肠杆菌中获得高活性重组人肿瘤坏死α因子 (rhTNF α) ,并探索TNF α与其它细胞因子临床治疗肝癌的合理配伍方案。方法 :CaCl2 法转化大肠杆菌JM 10 9,温度诱导rhTNF α ,收获菌体 ,裂解后 ,Westernblot检测表达产物的特异性 ,薄层分析rhTNF α表达量 ,MTT 短程法测定rhTNF α对L92 9杀伤作用。以表达的rhTNF α作用于肝癌细胞株BEL74 0 2和荷瘤鼠 (肝癌腹水瘤 ) ,验证其对肝癌细胞的体内外抑制作用。采用嵌套设计 ,MTT 短程法测定rhTNF α与变异型IL 2对BEL74 0 2的协同抑制作用。结果 :Westernblot证实 pAW 711转化JM 10 9后筛得的重组菌表达产物特异性良好 ,薄层分析表明rhTNF α表达量可达菌体蛋白的 17 8% ,MTT 短程法证实表达产物具有良好生物活性 ,并可在体外明显杀伤肝癌细胞 ,其杀瘤活性优于标准对照。体内实验证实rhTNF α可使人肝癌腹水瘤荷瘤鼠生命延长率达31 5 %。rhTNF α与变异型IL 2具有协同抑癌作用 ,其协同作用具有特殊的剂量依赖性。结论 :在大肠杆菌中可获得高活性rhTNF α ,rhTNF α在体内外均可明显抑制肝癌细胞 ,变异型IL 2对此有协同作用。

摘要：为开发新型抗HBV药物 ,设计合成针对HBVENⅡ (1713 172 7)的反义寡核苷酸 (as ENⅡ ) ,以不同浓度、不同作用方式作用于HepG2 2 15细胞 ,ELISA检测结果表明 10 μmol/L的as ENⅡ可显著抑制HBsAg、HBeAg表达 ,抑制率可达 5 2 1%和 40 1%。 10 μmol/Las ENⅡ一次性用于HepG2 2 15细胞后 ,其对HBsAg、HBeAg的抑制作用呈现双峰现象 :分别在 1d、5d和 1d、3d ,抑制作用分别为 30 4% ,5 2 1%和 34 0 % ,40 1%。同样浓度as ENⅡ每天反复加入HepG2 2 15细胞 ,其抑制作用缓慢上升 ,分别在第 7、6d达高峰 ,抑制作用分别为 73 6 9%和 73 6 4%。结果提示HBVENⅡ是设计抗HBV反义寡核苷酸片段的良好靶位 。