摘要：目的观察葡萄糖神经酰胺合成酶（glucosylceramide synthase，GCS）靶向的微小RNA（microRNA）表达载体对乳腺癌细胞GCS表达的抑制作用及乳腺癌细胞药物敏感性的作用。方法以GCS为靶基因，设计并构建2个针对GCS不同位点的microRNA表达载体，脂质体转染MCF-7／ADR细胞，RT-PCR和Western印迹检测转染前后GCSmRNA和GCS蛋白的表达，MTT法检测细胞对阿霉素和长春新碱的药物敏感性。结果2个microRNA重组载体转染后，MCF-7／ADR细胞中GCSmRNA的表达水平分别为0．098±0．005和0．143±0．007，与对照组（0．875±0．008）相比，差异有统计学意义（P〈0．01）。GCS蛋白的表达水平（0．127±0．004、0．165±0．008）较对照组细胞（0．765±0．007）明显降低（P〈0．01）。另外，转染后的MCF-7／ADR细胞对阿霉素的耐药倍数分别为4．06、6．06。对于长春新碱的耐药倍数分别为8．30、12．67。与对照组相比耐药倍数显著下降（P〈0．01）。结论GCS靶向的外源性microRNA能明显抑制GCS基因表达，并显著提高乳腺癌细胞对化疗药物的敏感性，为提高乳腺癌的化疗效果提供了新的途径。

摘要：背景:许多研究结果证明电针可以引起内源性阿片肽系统的变化。目的:观察电针治疗后糖尿病大鼠模型血糖及脂蛋白(a)的变化,探讨阿片系统在电针治疗糖尿病中的作用。设计:以实验动物为观察对象的随机对照实验。单位:山东大学医学院病理生理学教研室。材料:实验于2004-07/12在山东大学医学院病理生理学教研室完成。选用140只雄性Wistar大鼠。方法:随机选取10只Wistar大鼠做空白对照组。剩余130只大鼠腹腔注射20g/L链脲霉素溶液50mg/kg,空白对照组腹腔注射等量生理盐水。3周后,断尾取血测餐后2h血糖,有明显糖耐量减退者给予高热量饲料饲养28d,为模型大鼠。造模成功64只。随机分为3组,即模型对照组(20只),电针治疗组(22只),电针加纳络酮组(22只)。治疗后,检测血糖及血脂蛋白(a)。主要观察指标:经治疗后各组大鼠的血糖和脂蛋白(a)变化。结果:74只大鼠进入结果分析。电针能够明显降低链脲霉素所致糖尿病大鼠血糖及血脂蛋白(a)水平。而注射纳络酮的大鼠对电针反应不敏感犤治疗后模型对照组、电针治疗组、电针加纳络酮组的血糖值分别为(13.91±3.79),(10.33±2.36),(12.96±2.23)mmol/L;脂蛋白(a)值分别为(13.75±2.69),(10.81±2.96),(13.01±3.23)mg/L犦。结论:电针治疗可以有效的降低糖尿病大鼠血糖水平和降低糖尿病大鼠的动脉硬化危险因子血脂蛋白(a)。虽然无法从经络的角度明确解释其机制,但根据纳络酮干预后电针治疗时大鼠血糖及脂蛋白(a)已不产生干预作用的实验结果,可以推测针刺是通过阿片肽系统而发挥对血糖和血脂蛋白(a)的干预效果。

摘要：目的探讨乳腺癌耐药蛋白(BCRP)在卵巢癌中的作用和逆转其介导的MDR,建立表达BCRP的耐药细胞系3AO/BCRP。方法提取MCF-7细胞的总RNA,设计BCRP基因上下游引物,RT-PCR克隆出BCRP基因全长并连接到pcDNA3.1(-)上,转染3AO细胞后以G418筛选存活细胞。采用米托蒽醌外排实验、细胞毒性实验、细胞群体倍增时间、定量PCR、Western blot等方法鉴定构建的耐药细胞系。结果3AO/BCRP对米托蒽醌耐药指数增加至11.58;耐药细胞外排米托蒽醌的作用增强;细胞中BCRPmRNA的水平升高,细胞能表达一定量的BCRP。结论3AO/BCRP细胞具有BCRP的耐药表型,可作为进一步研究BCRP的生物学特性以及建立其介导的耐药逆转模型。

摘要：目的:构建人鸟氨酸脱羧酶(ODC)基因的RNAi慢病毒载体。方法:根据ODC mRNA序列, 选择3个19nts的靶序列,设计并合成包含各正反义靶序列的互补DNA链,退火后插入pSuper载体的H1RNA启动子后产生pRiODC,将其中的ODC shRNA表达结构酶切插入慢病毒转移质粒pHR' CMVGFP,产生pHRiODC/GFP。与△R8.2和pCMVVSVG共转染HEK293T细胞,包装产生慢病毒,分别采用转导HEK293T细胞和Real-Time RT-PCR的方法测定慢病毒的功能滴度和病毒RNA分子拷贝数。结果:酶切和测序证实,pRiODC质粒构建正确,产生能同时表达GFP和转录产生ODC shRNA的慢病毒转移质粒PHRiODC/GFP,未浓缩及浓缩病毒悬液的功能滴度分别为6.3×104 TU/ml和7×106TU/ml, RNA拷贝数分别为3.4×108copies/ml和3.6×1010copies/ml。结论:成功构建人ODC基因RNAi慢病毒载体,为通过阻断ODC基因表达治疗恶性肿瘤奠定了基础。

摘要：目的:建立表达乳腺癌耐药蛋白(BCRP)的耐药细胞系MCF-7/BCRP。方法:提取MCF-7细胞的总RNA,设计BCRP基因上下游引物,用RT-PCR法克隆出BCRP基因全长并连接到真核表达载体pcDNA3.1穴-雪上,转染MCF-7细胞后以G418筛选细胞。采用米托蒽醌外排实验、细胞毒性实验、细胞群体倍增时间、免疫荧光法鉴定构建的耐药细胞系。结果:MCF-7/BCRP对米托蒽醌耐药指数增加至14.72;外排米托蒽醌的作用增强;细胞群体倍增时间较亲代细胞延长;MCF-7/BCRP细胞能表达一定量的BCRP。结论:MCF-7/BCRP细胞能够表达BCRP并具有BCRP的耐药表型。

摘要：目的探讨针对多药耐药基因(MDR-1)的小分子干扰RNA(siRNAs)和反义脱氧寡核苷酸(asODNs)联合应用逆转人乳腺癌细胞MCF-7/ADR的作用效果。方法设计并合成针对MDR-1基因同一序列的siRNAs和asODNs及阴性对照siRNAs,采用转染试剂lipofectamineTM2000分别转染人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR;利用RT-PCR检测MDR-1mRNA和Western blot检测MDR-1蛋白质的表达;采用罗丹明123外排实验检测P-gp的转运功能,MTT法检测MCF-7/ADR细胞对阿霉素的耐药逆转效果。结果siRNAs、asODNs、asODNs和siRNAs联合应用均能降低MDR-1mRNA及其蛋白质表达,提高P-gp的转运功能,使细胞对阿霉素的敏感性明显恢复;asODNs和siRNAs联合应用效果明显提高;低浓度siRNAs(200nmol/L)比高浓度asODNs(5μmol/L)的效果强。结论siRNAs、asODNs能有效逆转人乳腺癌细胞MCF-7/ADR的多药耐药,asODNs和siRNAs联合应用效果明显加强。