摘要：目的对儿童交替性偏瘫(AHC)的家系进行基因检测,查找AHC发病的基因突变点。方法对1个患儿交替性偏瘫家族的5名成员提取DNA,根据突变区域设计引物,进行PCR扩增,将所得到的DNA产物进行基因测序。结果用正常ATP1A2基因片段序列和基因测序序列进行比对,基因测序图中在1237c碱基处未见明显双峰,其他位置波形亦无异常双峰,在5个样本中均未发现基因突变点。结论 ATP1A2基因突变与儿童交替性偏瘫发病的联系还有待进一步证实。

摘要：背景:目前关于血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在创伤及整形外科领域主要集中在骨折及组织工程化材料等方面,在软组织损伤方面报道不多。目的:构建的pcDNA3.1-VEGF165质粒,直接注射于大鼠软组织缺损局部,探讨其对软组织缺损修复的影响。设计、时间及地点:于2004-09/2006-01在山东大学动物实验中心和分子生物学实验室完成自身对照观察实验。材料:健康SD大鼠30只。方法:Trizol法提取兔组织中总RNA,反转录合成VEGF165cDNA序列,将此基因片段与pMD18-T构建真核表达载体,双酶切,在T4DNA连接酶作用下,再与pcDNA3.1载体构建成重组真核表达质粒pcDNA3.1-VEGF165;采用SD大鼠30只,于脊背后部两侧对称部位制备圆形全层皮肤(直径15mm)、肌肉(切除2mm厚肌肉)软组织缺损,两创缘相距4cm;选择一侧为实验组,直接注射0.2mL(含200ng)质粒液,对侧为对照组,以等量生理盐水同法处理。主要观察指标:创面愈合、血管生成及局部胶原表达。结果:30只均进入结果分析。①经赵冬梅等的方法鉴定,pcDNA3.1-VEGF165质粒构建成功。②质粒液局部注射后实验组创面愈合时间早于对照组,差异有显著性意义(P<0.05);实验组术后7,14d微血管密度高于对照组,差异有显著性意义(P<0.05)。③实验组3d即有Ⅲ型胶原表达,14d达高峰,30d时略有降低。对照组Ⅲ型胶原表达部位和趋势与实验组一致,只是时间延迟。结论:pcDNA3.1-VEGF165质粒局部注射可促进软组织缺损区血管生成和细胞外基质合成,加速创面愈合。

摘要：目的:构建针对人甲胎蛋白(AFP)基因siRNA表达质粒,为进一步研究AFP基因功能奠定基础?方法:选择RNA干涉靶序列,体外合成两段互补的寡核苷酸,通过与线性化的pSilencer3.0-H1连接?转化大肠杆菌,扩增?纯化得到所需质粒,通过琼脂糖凝胶电泳及基因测序鉴定其分子量及插入片段的序列?结果:纯化的质粒的分子量为2.8 Kb,插入的寡核苷酸序列与设计的序列完全相符?结论:成功构建了针对AFP基因的siRNAs表达质粒?