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针对丝聚合蛋白基因RNA干扰重组慢病毒载体的构建及筛选: 收藏
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引用; 《中国现代医学杂志》2014年第8期24卷 8-11页; 作者：党宁宁逄曙光宋海燕张敏王彦边胜男山东大学附属济南市中心医院皮肤科山东济南250013; 目的构建丝聚合蛋白（FLG）基因RNA干扰（RNA interference,RNAi）慢病毒表达载体。方法设计针对人FLG基因的mRNA干扰靶序列,合成相应双链DNA,通过BamH I和EcoRI酶切后的PGLV/H1/GFP载体连接产生shRNA载体,并与pHelper 1.0、pHelper 2....; 目的构建丝聚合蛋白（FLG）基因RNA干扰（RNA interference,RNAi）慢病毒表达载体。方法设计针对人FLG基因的mRNA干扰靶序列,合成相应双链DNA,通过BamH I和EcoRI酶切后的PGLV/H1/GFP载体连接产生shRNA载体,并与pHelper 1.0、pHelper 2.0两种载体共转染293T细胞培养,获得重组慢病毒载体后,转染目的细胞,实现针对FLG基因的RNA干扰。结果经鉴定该实验的慢病毒载体,对人正常皮肤细胞HACAT干扰效果达75%-95%,以RNAi3的沉默效应最佳。结论重组的慢病毒载体为有关FLG基因的进一步研究奠定良好实验基础,并能广泛用于体内基因治疗及基因功能研究。; 来源：详细信息评论

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