摘要：目的 探寻微小RNA Let-7b（Let-7b）在大鼠垂体腺瘤GH3细胞中的靶基因,并观察其对GH3细胞侵袭性生长的影响.方法 利用TargetScan、PicTar、MiRanda 3种不同的生物信息学方法对靶基因进行筛选;设计Let-7b模拟物（Let-7b mimic）及反义寡核苷酸链序列（AMO）,采用慢病毒转染,分别外源性导入Let-7b mimic以增加Let-7b的表达量、AMO互补结合以阻碍Let-7b功能实现,转染不含有大鼠同源序列的空白病毒为对照组.实时荧光定量核酸扩增检测系统（FQ-PCR）检测各转染组Let-7b表达量的改变;Westen blot检测转染后各组GH3细胞中细胞外基质金属蛋白酶诱导剂（CD147）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）蛋白表达量的改变;Transwell细胞小室侵袭实验研究各组细胞侵袭能力的改变.结果 大鼠GH3细胞中,Let-7b与CD147存在直接的靶向关系,并对CD147、MMP-9蛋白表达及细胞的侵袭能力有明确的抑制作用.转染mimic组的GH3细胞Let-7b的表达量是空白对照组的（9.56±0.51）倍,CD147、MMP-9蛋白表达降低,细胞的侵袭性生长受到抑制,差异有统计学意义（P＜0.05）;转染AMO组的GH3细胞Let-7b的表达为对照组的（0.31±0.01）倍,CD147、MMP-9蛋白表达量增高,细胞的侵袭能力增强,差异有统计学意义（P＜0.05）;对照组与自然生长组Let-7b的表达量、CD147、MMP-9蛋白表达量及细胞侵袭能力差异均无统计学意义（P＞0.05）.结论 Let-7b靶向CD147对GH3细胞的侵袭性有抑制作用.

摘要：目的构建并筛选能高效沉默大鼠垂体瘤转化基因(rPTTG)的shRNA慢病毒重组载体。方法设计并合成4组特异性针对大鼠PTTG基因的shRNA序列将其构建到慢病毒载体pGCL-GFP中;评估慢病毒重组载体在大鼠肾细胞中的转染效率并运用real time PCR技术检测各组重组载体对目的基因的沉默效果。结果PCR及测序结果显示,目的片段插入正确,重组载体构建成功,慢病毒重组载体转染效率达70%以上;4组shRNA序列均有基因敲减效果,并且第4组shRNA(4#shRNA)序列效果最为明显(>80%)。结论成功构建了高效沉默rPTTG基因的慢病毒载体;验证了慢病毒载体作为RNAi载体工具转染效率的可靠性;实验显示4#shRNA能高效抑制内源性rPT-TG基因表达。

摘要：目的研究纹状体蛋白质酪氨酸磷酸酶(STEP)pY-loop结构上第330位的苏氨酸(T330)和Q-loop结构上第541位的苏氨酸(T541)参与催化反应的作用机制。方法构建STEP野生型(STEP-WT)及其突变体(STEPT330D/T541A)的表达质粒;表达并纯化STEP-WT及其突变体蛋白,体外检测这些蛋白对小分子底物4-硝基苯磷酸二钠(pNPP)的催化活力,分析NaVO3对STEP-WT及其突变体酶活性的抑制作用;检测STEP-WT及其突变体催化反应的pH依赖性和对解离基团pK a的依赖性。结果体外催化pNPP水解的过程中,STEP-T330D的催化性质较STEP-WT无明显变化,STEP-T541A的K m略有增加,k cat下降至STEP-WT的1/3以下。NaVO3对于STEP-WT及其突变体的抑制常数K i无明显变化。在STEP的pH依赖性研究中,STEP-T541A的pK2app显著增加且它的(k cat)lim下降至野生型1/10以下。在STEP催化底物反应过程对底物解离基团pK a依赖性的研究中,STEP-T541A的β1g(k cat)较STEP-WT明显增大。结论 T541参与了STEP催化反应中从产物生成到磷酸根释放这一过程,靶向STEP治疗神经系统疾病的药物可以考虑通过与T541相互作用进行设计。

摘要：目的比较前颞叶切除术(ATL)与选择性海马杏仁核切除术(SAH)治疗海马硬化性颞叶内侧癫痫的疗效。方法收集已公开发表的关于ATL和SAH治疗海马硬化性颞叶内侧癫痫的临床对照研究文献,按照Meta分析和设计要求进行筛选,对筛选合格者进行Meta对比分析,计算ATL相对SAH术后EngleⅠ级患者人数的优势比(OR),比较ATL和SAH对海马硬化性颞叶内侧癫痫的控制效果。结果符合纳入标准的文献共5篇,总样本量为499例,其中行ATL治疗200例(ATL组),术后EngleⅠ级者156例;行SAH治疗299例(SAH组),术后EngleⅠ级者222例,合并优势比(OR)值为1.09,95%可信区间为0.69～1.73,Z=0.37,P=0.71。结论 ATL与SAH治疗海马硬化性颞叶内侧癫痫疗效相近。