摘要：选取非洲猪瘟病毒(ASFV)结构蛋白基因VP73中保守性强的区域,人工合成该基因片段;再根据GenBank中公布的ASFV的VP73基因序列,设计特异性引物,利用PCR扩增该VP73基因片段,克隆入pET-32a(+)载体,以构建的重组质粒为模板建立了检测ASFV的PCR检测方法。优化扩增条件,并组装成PCR试剂盒。结果显示,PCR扩增出429bp的ASFV VP73基因片段;该试剂盒与猪伪狂犬病病毒、猪瘟病毒(疫苗株)、猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪乙型脑炎病毒、猪细小病毒、健康猪和蜱的基因组无交叉反应。试剂盒敏感性可达0.1fg。试剂盒批内和批间检测结果无明显差异,稳定性良好。置于4℃和-20℃条件下保存12个月,试剂盒稳定性无明显改变。结果表明,研制的ASFV PCR试剂盒为ASFV的快速检测及流行病学调查提供了技术手段。

摘要：从山东地区疑似新城疫病毒(NDV)感染鸽群中分离到两株新城疫病毒分别命名为pigeon/China/bz12和pigeon/China/bz11,经蚀斑纯化后测定其鸡胚平均死亡时间(MDT)分别为76.6h、78.8h,1日龄雏鸡脑内致病指数(ICPI)分别为1.98、1.95,符合NDV强毒特征。设计NDVF基因特异性引物,使用RT-PCR从纯化后鸡胚尿囊液中扩增获得了约1662bp基因条带,序列测定确认为NDVF基因,其氨基酸一级结构包含553位氨基酸残基,F0蛋白裂解位点含112-RRQKRF-117氨基酸序列,具有NDV强毒株分子特性。依据yellow基因序列同源性对获得2株NDV分离株和42株NDV参考毒株基因型分型,结果显示,2株鸽源NDV分离株都属于基因Ⅶ型,其与基因Ⅶ型NDV不同分离株同源性达93.5%～99.8%,与鸡源强毒NDV分离株Chicken/China/SD8/2010同源性高达99.8%,表明这两株鸽源分离毒株可能来源于感染的鸡群。

摘要：为建立一种敏感、特异、快速、高通量的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体血清学检测方法,本研究利用原核表达技术表达了PRRSV M蛋白,将纯化后的重组M蛋白作为包被抗原建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法。参照已发表的PRRSV基因组M基因序列,设计合成1对特异性引物,RT-PCR扩增了长约435bp的M基因片段,将目的片段亚克隆至pET32a(+)表达载体中,经IPTG诱导获得了以包涵体形式表达的重组M蛋白,重组蛋白纯化后,免疫印迹检测结果表明具有良好的抗原性和特异性。以重组M纯化蛋白为包被抗原,经间接ELISA反应条件的优化,建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法,该方法检测猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪圆环病毒2型(PCV2)其他6种常见猪病病原的阳性血清均为阴性;该方法批内与批间重复性试验的变异系数分别小于5%和10%;该方法与商品化ELISA试剂盒的符合率为95.3%。本研究建立的M-ELISA检测方法将为猪群免疫PRRS疫苗后抗体水平监测及PRRSV野毒感染的快速诊断与流行病学调查等提供了一种简便易行、快速、高通量的血清学抗体检测方法。

摘要：针对高职类专业教材食品微生物检验技术存在的问题,通过优化课程整体设计,结合食品检验岗位的实际要求重构教材内容,明确了食品微生物检验技术活页式教材的开发原则,研究了活页式教材内容的编写,以提高从事食品微生物检验工作的高素质技术技能型人才的培养质量。