摘要：根据新型鸭呼肠孤病毒（novel duck reovirus,NDRV）S1基因序列设计1对特异性引物,建立了基于SYBR GreenⅠ的实时荧光定量RT-PCR检测方法。根据含目的基因的质粒拷贝数与定量反应Ct值的关系,绘制了标准曲线。敏感性试验显示,该方法最低可检出15个拷贝的病毒c DNA,其病毒最低检出量为0.5TCID50。该方法具有良好的特异性,对鸭坦布苏病毒（DTMUV）、A型鸭甲肝病毒（DHV-1）、C型鸭甲肝病毒（DHV-3）、番鸭呼肠孤病毒（MDRV）、减蛋综合征病毒（EDSV）、鸭新城疫病毒（NDV）、鸭瘟病毒（DPV）、鸭疫里默氏杆菌（RA）的检测结果均为阴性。该方法重复性好,组内变异系数为0.32%~0.91%,组间变异系数为1.03%~1.51%。利用该方法对人工感染雏鸭的粪便排毒情况进行检测,结果发现,攻毒后2~12 d是粪便排毒期,其中3~6 d是排毒高峰期。临床样品检测结果表明,该方法比常规RT-PCR具有更高的敏感性,而且从收到样品到得出检测结果只需4 h。

摘要：从以产蛋下降为主的樱桃谷种鸭以及出现神经症状的雏鸭各分离出1株病毒,分别命名为BZ株和LC株。该2株病毒对SPF鸡胚和健康鸭胚均能产生相同的病变,分离病毒不能凝集鸡、鸭、鹅、鸽等的红细胞,在鸭胚成纤维细胞(DEF)能够产生典型的细胞病变(CPE),电镜下观察到约50nm的病毒粒子。病理组织学研究表明,二者在临床上均可导致脑组织危害,表现为脑膜水肿、血管充血和皮质层神经胶质细胞增生等。血清学检测表明,分离病毒与禽流感病毒(AIV)、鸭瘟病毒(DEV)、新城疫病毒(NDV)等病原无交叉。生物学特性鉴定该病原为有囊膜单股RNA病毒。利用不同禽病的特异性引物分别进行PCR或RT-PCR,均未扩增出特异条带。设计随机引物进行RT-PCR,扩增出基因片段,利用GenBank进行Blast同源比较,结果发现,分离病毒与以色列火鸡脑膜脑炎病毒(Israel turkey meningo-encephalitis virus,TMEV)和在马来西亚发现的Tembumu病毒至少在2段基因上具有较高的同源性,属于黄病毒属。测序表明,分离病毒与Tembumu病毒的非结构蛋白(NS5基因)和囊膜蛋白(E基因)的核苷酸同源性为86.7%～90.2%和87.0%～91.8%,与TMEV的NS5基因和E基因的同源性为72.4%～73.2%和72.7%～72.8%。2分离株之间E基因和NS5基因的核苷酸同源性均为99.5%。血清中和试验表明,BZ株阳性血清可以中和LC病毒,因此证实二者可能是同一种病毒。综合以上研究,建议将该病命名为"鸭病毒性脑炎"(Duck viral encephalitis disease)。

摘要：从山东省一起疑似禽肺病毒感染的病例中分离到1株H9亚型禽流感病毒(H9 subtype Avian influenza virus,AIV-H9),未分离到禽肺病毒(Avian metapneumovirus,APV),但血清学检测发现APV-ELISA抗体参差不齐。根据已公布的APV的G基因和AIV-H9的HA基因序列分别设计合成引物,进行RT-PCR扩增,结果得到大小为692 bp和1683 bp的目的条带;测序分析发现,该发病鸡场感染的APV(SD/RZ/15)G基因片段与Genbank中登录的B型APV核苷酸序列同源性最高(92.1%^-94.5%)且遗传距离最近,处于同一个分支。分离到的AIV-H9毒株(CK/SD/RZ/H9/15)的HA基因与参考毒株的核苷酸序列同源性为87.3%~98.9%,遗传进化关系分析表明该分离毒株与近几年分离的H9处于同一个分支上。综合上述试验结果,确定该病例为B型APV与AIV-H9的混合感染引起。

摘要：为建立一种鸭冠状病毒(Duck coronaviruses,DuCoV)的临床快速诊断方法,根据鸭冠状病毒1b基因保守区域设计特异性引物,成功建立了用于检测鸭冠状病毒的特异性SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法。该方法特异性强、敏感性高、重复性好,对鸭冠状病毒有特异性扩增,最低检测限为8.04×100拷贝/μL,比普通PCR方法敏感10倍,批内变异系数与批间变异系数分别为0.28%~0.34%、0.25%~0.36%,均小于1%。对临床可疑鸭泄殖腔拭子进行检测,本方法与常规PCR方法的检测结果阳性符合率为100%,阴性符合率为96.43%,样本总符合率为97.62%。本研究建立的鸭冠状病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,可用于鸭冠状病毒的临床快速诊断及流行病学监测。

摘要：本研究针对病毒基因组5'端非编码区的保守区域设计引物,建立了用于检测鸡传染性腺胃炎相关的圆圈病毒3型(Gyv3)的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法。该方法具有较好的特异性,敏感性和重复性,对于鸡Gyv3以外的其他常见鸡病毒性病原的DNA或cDNA均无特异性扩增,灵敏度能达到30.76 copies/μL,组内和组间变异系数均不超过2%。对临床样品的检测结果显示,本研究建立的荧光定量PCR方法对鸡Gyv3检出率为12.28%。

摘要：本研究根据鸭乙型肝炎病毒(DHBV)基因组C基因序列设计一对特异性引物,建立一种快速检测DHBV的SYBR Green荧光定量PCR方法。该方法在7.8×10^(2)copies/μL~7.8×10^(8)copies/μL模板量时,呈现良好的线性关系,相关系数R 2为0.999。利用该方法对来自山东不同地区的95份临床样品进行检测。结果显示,该方法特异性好,临床样品检测阳性率与常规PCR方法的符合率为97.9%,且灵敏度高于普通PCR约100倍。将该方法应用于DHBV感染雏鸭的动力学研究,结果表明,DHBV感染雏鸭11 d时病毒含量达到高峰,随后逐渐下降。该方法的建立不仅为临床提供一种对DHBV的快速准确的检测方法,也为药物有效评价时间点的选择提供了理论依据。