摘要：背景:应用固态载体作为细胞支架,修复关节软骨缺损,已有成功经验。尝试将液态载体或凝胶态载体材料复合细胞后注入动物体内,观察该方法的可行性。目的:探讨液态载体或凝胶态载体材料氧化聚乙烯和氧化聚丙烯复合物结合重组人骨形态蛋白2负载同种异体软骨细胞修复全厚关节软骨的可行性。设计:对照实验。单位:威海市立医院骨科,山东省创伤骨科研究所。材料:实验于2001-11/2003-09在山东省创伤骨科研究所实验室进行。健康成年新西兰大白兔36只,体质量2.5～4.5kg,雌雄不限。编号后根据缺损处注入物质的成分随机数字法分成4组,即氧化聚乙烯和氧化聚丙烯复合物结合重组人骨形态蛋白2软骨细胞组、氧化聚乙烯和氧化聚丙烯复合物结合重组人骨形态蛋白2组、氧化聚乙烯和氧化聚丙烯复合物软骨细胞组、空白对照组,每组9只。方法:36只大白兔分组后造关节软骨缺损模型,取同种新西兰大白兔关节软骨细胞,体外培养扩增后与20%氧化聚乙烯和氧化聚丙烯复合物结合重组人骨形态蛋白2混合,移植到缺损处进行修复。各移植组缺损处分别注入氧化聚乙烯和氧化聚丙烯复合物结合重组人骨形态蛋白2负载软骨细胞、氧化聚乙烯和氧化聚丙烯复合物结合重组人骨形态蛋白2、氧化聚乙烯和氧化聚丙烯复合物软骨细胞组。空白对照组:缺损处不做任何处理。移植后4,8,12周对缺损的修复情况进行大体、光镜组织学评估和电镜观察。据Wakitani评分标准,采用盲法对修复质量作出评价。主要观察指标:①软骨缺损修复程度。②软骨细胞的性质形态,基质中胶原性质、数量及排列方式。结果:①移植的氧化聚乙烯和氧化聚丙烯复合物结合重组人骨形态蛋白2负载软骨细胞中的软骨细胞能很好地生长,4周时,缺损区完全填充。8,12周再生组织与周围正常软骨组织外观相似,界限模糊。组织学检查:形成透明软骨,缺损处被修复。②电镜下:8,12周,修复组织中可见多数成熟的透明软骨细胞及其周围排列不规则的、纤细的、均匀的和无周期性的Ⅱ型胶原。空白对照组仅见纤维修复,再生组织缺乏弹性,表面粗糙,不规则。③修复质量评分:氧化聚乙烯和氧化聚丙烯复合物结合重组人骨形态蛋白2负载软骨细胞组和各组相比在各个时期差异均存在显著性,氧化聚乙烯和氧化聚丙烯复合物结合重组人骨形态蛋白2组和氧化聚乙烯和氧化聚丙烯复合物软骨细胞组与对照组相比在各个时期差异均存在显著性[4周:(3.93±1.91),(4.56±1.07),(4.78±1.09),(8.44±1.13)分;8周:(2.80±1.45),(3.24±1.00),(3.33±1.00),(8.44±1.13)分;12周:(2.22±1.10),(3.01±0.69),(3.00±0.71),(9.00±0.87)分,P0.05)。结论:氧化聚乙烯和氧化聚丙烯复合物结合重组人骨形态蛋白2负载同种异体软骨细胞移植能以透明软骨的方式成功修复兔膝股骨髁软骨缺损,并优于单纯的氧化聚乙烯和氧化聚丙烯复合物负载重组人骨形态蛋白2或单纯的氧化聚乙烯和氧化聚丙烯复合物软骨细胞的移植。

摘要：背景:人转化生长因子β1基因可用于椎间盘退变的基因治疗,但有效载体的构建是实验的关键。目的:测定真核表达载体PCI-hTGF-β1转染体外培养成人退变椎间盘细胞可否表达产物人转化生长因子β1,为椎间盘退变的基因治疗提供实验基础。设计:单一样本实验。单位:山东省创伤骨科研究所,一所市立医院骨科。材料:实验于1999-10/2001-01在山东省创伤骨科研究所实验室进行。椎间盘标本均为椎间盘突出症患者手术中取材(获患者知情同意)。标本1为30岁女性的L45/椎间盘,标本2为38岁女性的L5/S1椎间盘。方法:①培养成人退变椎间盘细胞:标本离体30min内取回实验室,收集原代培养的纤维环细胞和髓核细胞。②转染:将细胞置于24孔培养板中,每孔细胞数目在5.5×105个,应用构建的PCI-hTGF-β1真核表达载体对其进行转染,并设立转染PCI组和未转染组。③用免疫组织化学方法对转染48h后的细胞进行表达产物测定。主要观察指标:两个标本中,各组原代纤维环细胞和髓核细胞中真核表达载体PCI-hTGF-β1的阳性细胞产物的吸光度值比较。结果:①标本1:原代纤维环细胞和原代髓核细胞中真核表达载体PCI-hTGF-β1的阳性细胞产物的吸光度值为PCI组的3.49,3.69倍,为未转染组的3.55倍。②标本2:原代纤维环细胞和原代髓核细胞中真核表达载体PCI-hTGF-β1的阳性细胞产物的吸光度值为PCI组的3.56,3.46倍,为未转染组的3.43,3.33倍。结论:PCI-hTGF-β1是人转化生长因子β1基因在体外培养退变椎间盘细胞转染中有效的真核表达载体,可以成功转染体外培养的成人退变椎间盘细胞,并可获得人转化生长因子β1基因产物的高表达。

摘要：目的构建人结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)和基质金属蛋白酶组织抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinases1,TI MP1)基因腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)表达质粒,并观察其在HEK293细胞中的表达,检测目的蛋白的生物学活性。方法采用PCR技术,分别设计引物扩增所需序列并进行PCR鉴定。再采用分子克隆的方法,以内部核糖体进入位点(internal ribosome entry sites,IRES)序列连接CTGF和TI MP1并克隆到AAV表达质粒pSNAV2.0构建重组质粒pSNAV2-CTGF-IRES-TI MP1。把重组质粒转染HEK293细胞,用双重免疫荧光和Western blot的方法对重组质粒的表达进行研究,MTT法检测细胞培养上清液中CTGF蛋白的生物学活性,ELISA法检测细胞培养上清液中TI MP1蛋白的含量。结果PCR、酶切、DNA测序等方法均证实成功构建了含有完全正确的CTGF和TI MP1基因序列的AAV表达质粒。双重免疫荧光和Western blot检测到目的蛋白的表达,转染后的细胞上清具有促使成纤维细胞增殖的生物学活性,ELISA法结果证实重组载体能够高表达TI MP1蛋白。结论成功构建了双表达质粒pSNAV2-CTGF-IRES-TI MP1,转染HEK293细胞后能够表达具有生物学活性的目的蛋白,为基因治疗椎间盘退变的研究工作奠定了基础。

摘要：目的通过研究股后侧区的穿支动脉解剖特点和分布规律，设计切取以该区域穿支血管为蒂的游离皮瓣。方法利用新鲜尸体8具乳胶加铅灌注标本对股后侧区域内血管解剖结构尤其是穿支血管走行及分布进行研究，筛选口径、长度及走行适合做吻合血管蒂的穿支。临床上实际应用7例，均为穿支游离皮瓣，皮瓣大小：3am×8cm-8cm×16cm，第一穿动脉皮瓣3例，第二穿动脉皮瓣2例，第三穿动脉皮瓣1例，第一穿动脉上无名穿支皮瓣1例。结果解剖研究发现，该区域适合做游离皮瓣的穿支有4～5条，平均外径0．4～2．8mn；平均长度2．2～9．0cm。7例穿支皮瓣均成活，随访5～11个月，穿支皮瓣修复创面后皮肤弹性好，皮瓣薄，外形美观。结论股后侧区的穿动脉分布较多、口径长度适宜，以该区域设计切取穿支血管游离皮瓣部位隐蔽、可直接缝合供区，临床应用效果满意。

摘要：目的观察膝上外侧皮瓣游离移植修复肢体远端中、小面积皮肤缺损的临床效果。方法根据膝上外侧皮瓣的皮支解剖特点设计以膝上外侧血管或膝最上血管为蒂的皮瓣，面积20cm×10cm～9cm×5cm，移植修复手背、腕关节、前臂远端、足背、踝关节、小腿下端等软组织较薄区域等于或小于一只手面积（即体表面积1％）的皮肤缺损。临床应用18例，观察术后皮瓣成活情况、外形、色泽、弹性，以及有无瘢痕挛缩、功能障碍等。结果术后皮瓣全部成活，无血运障碍。随访2-15个月，肢体远端皮瓣修复区皮肤色泽及弹性较好，外形不臃肿，未行二期皮瓣修整，无瘢痕挛缩，功能恢复良好。结论膝上外侧皮瓣游离移植是修复肢体远端中、小面积皮肤缺损的理想方法。

摘要：目的报道应用足部分叶皮瓣修复手足软组织缺损的临床效果。方法依据足背动脉在足背部发出各分支的解剖特点，结合手足多个创面的形状、大小、相隔距离的远近，以足背动脉各分支为血管蒂，将足部皮肤分解成分叶皮瓣，根据受区创面的不同，同时修复2个或2个以上的创面，或将各分叶皮瓣拼凑成不同的形状，修复不规则创面，临床应用15例，局部转移修复同侧足部创面1例，游离移植修复手部创面14例。结果皮瓣全部成活，12例获得随访6～10个月，受区外形满意。两点分辨觉5～7mm。结论依据足背动脉在足背部发出分支的解剖特点。以其各分支设计分叶皮瓣，修复不规则创面或同时修复互不相连的创面。皮瓣血供可靠，手术简便、实用，足部是修复多个创面或不规则创面软组织缺损的良好供区。

摘要：目的 探讨“双翼”穿支皮瓣在踝周皮肤软组织缺损显微外科修复的方法和临床疗效. 方法 对7例小腿下1/3至内、外踝及足跟周围慢性创面采用小腿局部2个带蒂穿支皮瓣组合成“双翼”状覆盖多个创面的方法修复,其中4例为胫腓、骨中下段开放骨折（GustiloⅢb或GustiloⅢc型）,2例踝关节开放性骨折并脱位,1例闭合Pilon骨折术后皮肤坏死导致的创面.7例均为多个不规则较小创面,2个创面3例,3个以上创面4例,平均5.7 cm× 2.4 cm.采用小腿后内侧（PM）与前外侧（AL）组合穿支皮瓣组合（PM加AL）2例、后外侧（PL）与后内侧组合（PL加PM）3例;后侧（P）与内侧（M）或外侧（L）组合（P加M或L）2例. 结果 术后7例全部成活,3例术后1周内皮瓣肿胀达2级,5～7d后恢复到正常张力,2例出现皮瓣远端水泡、皮缘瘀紫,10 ～ 14 d逐渐消退.1例术后遗留窦道渗出延迟30余天愈合.随访7～26个月,平均11.5个月.皮瓣外观无臃肿,色泽质地良好.术后6个月,皮瓣两点辨别觉为7～ 14 mm,平均12 mm;按美国AOFAS标准评价：优5例,良2例.功能恢复满意. 结论 组合应用“双翼”皮瓣修复足踝部2个以上小创面或单一较大创面,解决了多个缺损同时覆盖的难题且成功率高,是踝周多创面覆盖修复较理想的方法。

摘要：目的探讨带感觉神经的骨间背侧游离皮瓣修复手指皮肤缺损的可行性。方法在12例前臂标本远1/3背侧设计游离皮瓣,记录骨间后血管皮支数、最粗穿支距尺骨小头上缘距离;记录营养皮瓣皮神经数目、直径;测血管蒂长度,记录血管蒂近端动脉及伴行静脉大小。临床应用带感觉神经的骨间背侧游离皮瓣修复手指皮肤缺损6例结果骨间背侧动脉在前臂远1/3有1～5条皮穿支,最粗穿支距离尺骨小头上缘(43±17)mm。皮神经直径(0.40±0.13)mm,血管蒂长(105±21)mm,动脉直径大小(1.2±0.1)mm,静脉直径大小(1.1±0.2)mm。6例游离皮瓣全部存活,恢复了保护性感觉。结论前臂远1/3血供及神经解剖特点可使其成为带感觉神经游离皮瓣的供区,修复手指皮肤缺损。

摘要：目的探讨双叶式腹壁下动脉穿支皮瓣（DIEP）修复全手套脱伤的方法和临床效果。方法以腹壁下动脉与腹壁上动脉和肋间后动脉之间血管吻合的解剖学研究为基础，自2013年6月至2015年1月，对6例全手套脱伤患者设计切取双叶式DIEP移植修复，其中较小一叶皮瓣（副叶）单独修复拇指创面，较大一叶皮瓣（主叶）修复第2～5指及掌背创面。结果皮瓣主叶切取最大面积35cm×12cm，副叶10cm×7cm，术后6例皮瓣全部成活，1例出现皮瓣远端部分表皮坏死，经换药后愈合。所有病例随访6～20个月，平均12个月，皮瓣外观及患手功能恢复较满意。皮瓣基本完全恢复保护性感觉，拇指对掌功能及关节自主活动度恢复较好。按中华医学会手外学会上肢部分功能评定标准评定：优3例、良2例、1例。供区创面一期闭合，外观良好。结论双叶式DIEP血供可靠，可切取面积大，供区创伤小，是修复全手套状撕脱伤的较好选择。

摘要：目的 探讨前臂肘窝部穿支皮瓣修复手指创面的临床应用,并评价修复效果. 方法 自2012年7月至2013年12月,对8例手指皮肤缺损的病例设计切取以桡动脉肘下穿支点为中心的肘窝部穿支皮瓣移植修复创面,其中合并指骨骨折6例,神经、血管损伤7例,肌腱损伤4例,缺损面积2.5 cm ×4.0 cm～5.5 cm×7.0cm,术后随访其疗效. 结果 8例皮瓣全部成活,1例皮瓣远端部分表皮坏死并伤口裂开约1 cm,经换药后愈合.所有病例随访6～20个月,平均11个月,皮瓣两点辨别觉7.5～9.8mm,平均8.5 mm,皮瓣感觉为S3＋.皮瓣外形良好,质地、色泽满意.供区外观、功能恢复良好. 结论 前臂肘窝部穿支皮瓣其穿支位置恒定,易于解剖分离,切取后供区损伤小,是一种修复手指等部位小面积皮肤缺损的良好选择.