摘要：利用酿酒酵母表面展示系统展示柔嫩艾美耳球虫微线蛋白基因EtMIC2,为下一步研制活载体疫苗奠定基础。参照GenBank中柔嫩艾美耳球虫EtMIC2基因序列设计引物,以柔嫩艾美耳球虫的RNA为模板,利用RT-PCR扩增得到预期长度的产物,双酶切连接到酿酒酵母表面展示的载体pCTCON2,转化大肠杆菌TOP10,提取阳性质粒转化酿酒酵母菌株EBY100,诱导表达后,用抗EtMIC2蛋白质特异性抗体,做间接免疫荧光(IFA)检测EtMIC2蛋白的表达。结果显示,EtMIC2成功展示到酵母细胞表面,测得最佳诱导时间为48h。

摘要：本试验旨在研究饲粮中添加水解单宁酸对肉鸡生长性能及肠道健康的影响。试验采用单因素完全随机设计,选取42000只1日龄、体况相近的健康爱拔益加(AA)肉仔鸡,随机分为3组,每组4个重复,每个重复3500只鸡。预试期10 d,正试期32 d。预试期各组统一饲喂基础饲粮(无抗生素)。正试期对照组饲喂基础饲粮,试验组分别饲喂在基础饲粮中添加200和400 mg/kg水解单宁酸的试验饲粮。结果表明:与对照组相比,1)饲粮中添加水解单宁酸对肉鸡的末重、平均日增重、平均日采食量、死淘率及欧洲效益指数无显著影响(P>0.05),但400 mg/kg水解单宁酸组的料重比显著降低(P<0.05);2)饲粮中添加水解单宁酸极显著降低肉鸡的十二指肠pH(P<0.01),极显著提高十二指肠、空肠胰蛋白酶活性、绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度(P<0.01),显著提高盲肠乳酸杆菌数量(P<0.05);3)饲粮中添加400 mg/kg水解单宁酸极显著提高肉鸡的十二指肠淀粉酶活性(P<0.01),显著提高空肠淀粉酶活性(P<0.05),显著降低空肠隐窝深度(P<0.05);4)饲粮中添加200 mg/kg水解单宁酸显著提高肉鸡的空肠脂肪酶活性(P<0.05)。综上所述,饲粮中添加水解单宁酸可降低肉鸡的料重比和死淘率,提高欧洲效益指数、肠道消化酶活性和乳酸杆菌数量,促进肠道发育并保护肉鸡肠道健康。在本试验条件下,肉鸡饲粮中添加400 mg/kg水解单宁酸效果最佳。

摘要：本研究基于生长性能和肉品质,评价胍基乙酸(GAA)对肉鸡的适用阶段和饲粮蛋氨酸(Met)配套强化效果。选取1日龄雄性爱拔益加肉仔鸡1920只,随机分为16组,每组设6个重复,每个重复20只鸡。试验分前期(1~21日龄)和后期(22~42日龄)2个饲养阶段,1组为对照组,饲喂常规饲粮(Met水平前期为0.50%,后期为0.40%)。2~6组仅在前期设置Met或GAA处理,其中,2组只把饲粮Met的水平提高至0.65%;3~6组采用双因素完全随机设计,2个饲粮Met水平分别为0.50%和0.65%,2个GAA添加量分别为300和600 mg/kg。7~11组仅在后期设置Met或GAA处理,其中,7组只把饲粮Met水平提高至0.55%;8~11组采用双因素完全随机设计,2个饲粮Met水平分别为0.40%和0.55%,2个GAA添加量分别为400和800 mg/kg。12~16组在全期(1~42日龄)设置Met或GAA处理,前期和后期饲粮设置分别同2~6组和7~11组。试验期42 d。结果发现:1)与对照组相比,只在前期饲喂高剂量GAA并强化Met供应能够显著提高1~21日龄平均日增重和21日龄体重(P0.05)。由此可见,当全程饲喂高剂量GAA时,无需额外补充Met就可使肉鸡终末体重和胴体质量达到最佳;若要阶段性使用GAA,宜在后期高剂量添加且同时补充Met。

摘要：为建立检测鸡TRIM25蛋白表达的免疫组化方法,根据发表的鸡TRIM25基因序列,设计引物,从海兰褐鸡脾中扩增TRIM25基因,构建重组原核表达质粒,通过诱导表达获得重组TRIM25蛋白,经纯化后免疫接种兔和小鼠,获得高效价血清抗体,用该抗体建立免疫组化方法,对鸡肺、脾、肝组织中TRIM25蛋白进行检测。结果显示,克隆的鸡TRIM25抗原基因大小为1 012bp,构建的重组表达质粒能够在大肠杆菌中稳定表达,经纯化后的重组蛋白质能够诱导兔和小鼠产生效价为1∶106以上的血清抗体,该血清抗体免疫组化检测发现鸡肺、脾和肝组织中均有不同程度的TRIM25蛋白表达,在肺组织中主要存在肺泡周围的内皮细胞、淋巴细胞等的细胞质内;脾组织主要出现在脾淋巴细胞和血管内皮细胞等的细胞质中;肝组织中主要出现在肝小叶肝细胞、淋巴细胞以及血管内皮细胞细胞质中。该研究为深入研究鸡TRIM25蛋白的组织分布、动态表达和生物学活性提供物质基础和方法依据。

摘要：【目的】旨在探究丁酸梭菌影响肠炎沙门氏菌(CVCC3377)对SPF小鼠的致病性及对小鼠的保护作用。【方法】选用72只6周龄SPF级雌性C57BL/6小鼠,按照完全随机区组设计分为阴性对照(CON)、饲喂丁酸梭菌组(CB)、沙门氏菌感染组(SE)和丁酸梭菌保护组(CB+SE)4组,每组18只。CON组和SE组饲喂基础日粮和饮水,CB组和CB+SE组饲喂基础日粮和每天更换添加丁酸梭菌(1×10^7 CFU/mL)的饮水,连续饲喂一周;第8天进行肠炎沙门氏菌感染实验,分别对SE组和CB+SE组灌服0.2 mL 1.1×10^4 CFU/只的肠炎沙门氏菌,同时对阴性对照组和丁酸梭菌组灌服0.2 mL生理盐水。在感染后第6天处死小鼠并采集肝脏、脾脏和盲肠及内容物样品。采用H.E染色检测肝脏和脾脏组织的病理学变化,免疫组化检测脾脏组织中TLR4、MyD88蛋白的表达水平,荧光定量PCR检测盲肠组织中TNF-α和IL-6的表达水平,并通过高通量测序方法分析其对肠道菌群的影响。【结果】结果显示,丁酸梭菌能够缓解肠炎沙门氏菌感染引起的小鼠体重下降;H.E染色结果显示,丁酸梭菌可以缓解肠炎沙门氏菌感染造成的组织损伤;免疫组化结果显示,丁酸梭菌可降低脾脏组织细胞中TLR4、MyD88蛋白的表达水平,荧光定量PCR结果显示肠炎沙门氏菌能够显著升高盲肠组织中TNF-α(P0.05),丁酸梭菌可显著降低放线菌门(Actinobacteria)和疣微菌门(Verrucomicrobia)在肠道微生物中的比例(P0.05)。【结论】结果表明,丁酸梭菌可以提高小鼠免疫力,缓解由于沙门氏菌感染引起的炎症反应,增加肠道微生物多样性,调节肠道菌群结构。

摘要：试验旨在构建一株高效表达猪CD163(pCD163)的Marc-145细胞系,为猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的临床分离和疫苗生产奠定基础。根据GenBank中序列设计引物从猪肺泡巨噬细胞(PAM)中扩增pCD163基因,将其插入真核表达载体pCI-neo构建真核表达质粒pCIpCD163,将该重组质粒转染Marc-145细胞,通过G418筛选、单克隆化并扩大培养筛选获得表达pCD163的Marc-145细胞系,IFA、Western blotting鉴定其表达情况。IFA结果显示,构建的pCD163-Marc细胞系中荧光明显亮于普通Marc-145细胞;Western blotting结果显示,pCD163-Marc细胞系中CD163蛋白表达量约为对照Marc-145细胞中CD163蛋白表达量的8.7倍。且该细胞系可稳定传至20代,各代次之间表达量无差异。证明高效表达猪CD163的Marc-145细胞系构建成功。

摘要：为研究养殖废水中产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠杆菌的分布及其多重耐药性与耐药基因携带情况,本研究对泰安市污水处理厂污水中分离的50株产ESBLs大肠杆菌阳性菌株采用纸片扩散法测定其对19种常见药物的耐药表型。针对产ESBLs菌株的耐药基因设计6对特异性引物,对ESBLs阳性菌株采用PCR方法检测其耐药基因。结果显示,50株产ESBLs大肠杆菌对β-内酰胺类抗生素表现出较强的耐药性,其中对氨苄西林、头孢噻吩、头孢噻肟呈100%的耐药性;对非β-内酰胺类抗生素同样呈一定耐药性;并且呈多重耐药性。PCR扩增结果显示,分离菌株均含有bla_(TEM)、bla_(CTX-M)基因,有5株含有qrB基因,32株含有qrS基因,有2株不含blaSHV基因,50株菌株均不含qrA基因。本研究表明:养殖场排放的污水已被产ESBL大肠杆菌严重污染,污水是这些耐药基因重要的存储库。且养殖污水中耐药菌通过污水排放最终进入到水环境中,其耐药基因可能在水环境的细菌之间进一步扩散,导致产ESBLs大肠杆菌表现出多重耐药性,同时这些产ESBL大肠杆菌会反过来再次感染动物,造成耐药菌在动物间的传播,甚至造成严重的感染。本研究对水是这些耐药基因重要的存储库这一结论提供了实验佐证。

摘要：本试验旨在评估胆汁酸(BAs)对饲喂不同能量水平日粮的肉鸡生长性能和脂质代谢的影响。将480只1日龄AA肉鸡(45.01±0.26g)分配到2×2的析因设计,具有2个能量水平(基础或高能水平)和2个水平的BAs(有或没有BAs补充),产生4组,每组8个重复,试验共42天。高能量日粮降低1-21d的料/重比(F/G)(P<0.05),增加42天时肝脏指数和腹脂率(P<0.05)。高能量日粮提高42d时血清总甘油三酯(TG)和高密度脂蛋白胆固醇(P<0.05),降低21和42d时肝脏脂蛋白脂酶(LPL)活性(P<0.05)。添加BAs增加了21天时体重并降低了整个期间F/G(P<0.05),并且通过在42天时降低的腹部脂肪百分比和增加21和42d(P<0.05)的胸肌肌肉百分比来改善胴体质量。BAs降低了21和42天的血清TG(P<0.05),增加了42天时肝脏LPL活性(P<0.05)。此外,高能量日粮增加了甾醇调节元件结合转录因子1,乙酰辅酶A羧化酶和脂肪酸合成酶的表达(P<0.05),而Bas日粮降低了这些基因的表达(P<0.05)。而且,BAs的添加也增加肉碱棕榈酰转移酶1的表达(P<0.05),这在高能量组增加(P<0.05)。总之,BAs补充可以提高生长性能,提高胴体品质,改善肉鸡的脂质代谢。

摘要：本试验旨在评估不同能量和乳化剂(脂质,活性成分:溶血磷脂;LPL)水平日粮对肉鸡生长性能,养分消化率,体成分和血清特征的影响。在28天的试验中使用864只1日龄雄性Ross308肉鸡(45.30±0.6g)。根据其初始体重将肉鸡分配到2×3析因设计中,包含2个能量水平的(开口料:ME=2,950kcal/kg用于能量减少的日粮,以及3,050kcal/kg用于基础日粮;育成料:ME=3,100kcal/kg用于能量减少的日粮,以及3,200kcal/kg用于基础饮食)3个乳化剂补充水平(0,0.05%和0.10%)。每个处理8个重复,每个重复18只鸡。相比于低能组,饲喂基础日粮的肉鸡体增重(BWG,d0-14)显著升高(P<0.05),饲料转化率(FCR,d0-14,d0-28)显著降低。添加LPL日粮相比于未添加的日粮,肉鸡有较高的BWG(d0-14,P<0.05),较低的FCR(d0-14,d0-28,P<0.05)。添加LPL,第14天时DM,氮(N)和总能量(GE)的表观道消化率(ATTD)增加(P<0.05),同时低密度脂蛋白,总胆固醇和甘油三酯含量也显著降低(P<0.05)。基础日粮组中腹脂相对重量较高(P<0.05),而LPL补充组则较低(P<0.05)。结论,添加LPL可显著提高肉鸡育成期生长性能和养分消化率,降低胆固醇和甘油三酯含量,降低肉鸡腹脂率。

摘要：本研究的目的是研究能量、粗蛋白和选定氨基酸降低的日粮中添加溶血磷脂(LPL)对肉鸡生产性能、肠道形态、血液代谢物、炎症反应和胴体性状的影响。试验采用完全随机设计,将300只1日龄雄性雏鸡(Ross308)分配到5次处理,每个处理6次重复,每个重复10只鸡。5种处理为:阳性对照(PC)不含LPL补充剂,各养分充足;阴性对照(NC)不含LPL,相对于PC组代谢能降低150kcal/kg,粗蛋白和所选定的氨基酸:Lys、Met、Thr和Trp降低5%~6%;以及NC+0.05%LPL(LPL05),NC+0.10%LPL(LPL10)和NC+0.15%LPL(LPL15)处理组。饲喂LPL可以线性改善生产性能、饲料转化率、乙醚提取物和蛋白质消化率。低能量、低氮日粮中添加LPL显著提高血糖和蛋白质利用,改善免疫系统功能。这些改善影响了胴体组成,尤其是胰腺和胸肌的相对重量。相比之下,LPL添加对免疫器官、肌胃和腹部脂肪的相对重量没有显著影响。通过调节白细胞介素-1(IL-1)的分泌和增加空肠和十二指肠节段的隐窝深度,NC组肉鸡对炎症更敏感。然而,NC日粮中添加0.05%LPL可以减轻炎症,增加空肠绒毛高度,绒毛高度与隐窝深度的比率,以及降低IL-1水平。综上所述,低能、低蛋和低氨基酸日粮中添加LPL能够提高肉仔鸡生产性能、养分利用率,改善肠道健康,抗炎,提高鸡肉产量。