摘要：目的:构建一种用于检测巨细胞病毒(CMV)、风疹病毒(RV)、单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSVI)、结核分枝杆菌(TB)、EB病毒(EBV)五种病原体的寡核苷酸芯片,用于中枢神经系统疾病的常见病原体的病因学诊断,为临床治疗提供依据。方法:首先根据病原体的特异性蛋白的相关序列设计70 mer寡核苷酸长探针,选择特异性好的探针构建不同种属多种病原体的寡核苷酸芯片,用随机引物方法对靶基因进行生物素直接标记,标记产物与芯片杂交后再与avidin-cy3反应,对杂交阵列洗涤后扫描。采用该寡核苷酸芯片对临床样本进行检测并与和PCR检测方法进行检测比较。结果:通过标准菌株检测证明该检测芯片具有很高的特异性。对临床标本的检测结果表明,该芯片检测体系只需要一次就可以完成对5种常见病原体的检测。与PCR法的检测结果相比,两种检测方法没有显著性差异(>0.05),且一致性较好(Kappa值均大于0.75),其特异度均在95%左右,敏感度均在83%以上。结论:构建的寡核苷酸芯片检测体系具有快速、方便、准确的特点,可以高通量的检测临床样本而无须进行细菌培养,为中枢神经系统重要病原体检测提供了一种有效工具。

摘要：液相芯片技术由于其高通量,灵敏度高,信噪比高,液相条件下反应,操作简便,耗时短等优点,已被美国FDA批准成为临床的检测手段。主要介绍了结直肠癌血清肿瘤标记物液相芯片制备条件的优化及其在CEA抗原检测中的初步应用。首先将CEA抗原的捕获抗体与微球载体进行偶联,制备液相芯片,然后对影响反应的微球与抗原的反应时间,生物素化检测抗体的浓度及avidin-PE荧光染料的反应浓度等因素进行正交设计,确定出最优的反应条件;用该液相芯片反应体系检测55例临床样本,与ELISA试剂盒检测结果相比:在同样的样本浓度范围内,两者的检测结果基本一致,但液相芯片检测的浓度范围更大而且液相芯片可将多种肿瘤标记物在一个反应进行检测,节省检测的时间和人力。

摘要：目的探讨重组腺相关病毒介导的HDV核酶在细胞内抑制乙型肝炎病毒基因表达的作用。方法将针对HBV基因序列C区的反式HDVR z与U6启动子和绿色荧光蛋白基因EGFP及其启动子CMV共同插入腺相关病毒载体pSNAV中并取代其原有CMV启动子区域,构建为pSNAV-CR z重组载体。并将pSNAV-CR z、pSNAV及pLEGFP质粒转染HepG2.2.15培养细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光,对转染后培养细胞内蛋白进行HBeAg和HBsAg的ELISA分析。结果所构建的重组载体经双酶切及PCR验证与实验设计一致。重组载体转染培养细胞后,荧光显微计数表明,pSNAV-CR z的转染效率为30%。HBeAg和HBsAg的ELISA检测显示,pSNAV-CR z重组载体对HepG2.2.15细胞中HBV病毒的HBeAg和HBsAg表达抑制率分别为63.5%和50.07%。结论细胞水平试验证明,重组腺相关病毒载体介导的反式HDVR z在体外培养细胞水平对HBV的复制起到一定的抑制作用。

摘要：目的分别构建CMV、H1、tRNA、U2、U3和U6启动子驱动反式丁型肝炎病毒核酶(HDV核酶)的逆转录病毒表达载体。在这些载体中,HDV核酶设计为靶向HBV基因序列PreS2和C区。方法用PCR技术分别扩增CMV、U2和U3启动子,并连入pMD18-T载体。合成靶向PreS2和C区HDV核酶并利用SalⅠ和H indⅢ的酶切位点分别连入逆转录病毒表达载体pLEGFP(pLEGFP-R z)。然后利用BamHⅠ和SalⅠ的酶切位点分别把CMV、H1、tRNA、U2、U3和U6启动子连入重组载体pLEGFP-R z。所有的重组载体经PCR和酶切的方法验证。结果成功地构建了分别含有6种启动子驱动HDV核酶的逆转录病毒载体。结论这些重组载体的构建为筛选高效表达核酶的启动子奠定基础。同时这些重组载体也可用于进一步研究HDV核酶抑制HBV复制的效率。