摘要：目的:建立基于多重PCR的基孔肯雅病毒全基因组高通量测序方法。方法:通过NCBI网站检索和下载CHIKV的各基因型序列,经序列比对筛选出备选参考序列,使用Primalscheme和Geneious Prime等软件进行引物方案的设计、筛选和人工优化,并使用7份CHIKV阳性样品对实验流程进行评估。结果:本研究所设计的引物方案可对各阳性样品进行成功扩增;在样品Ct值小于33时,可获得完整编码区序列;样品Ct值达到35时,可获得99.38%的编码区序列;使用多次迭代,逐步校正的拼接策略可将拼接成功率提高5.70%~25.43%。结论:建立的基于多重PCR的基孔肯雅病毒全基因组高通量测序方法操作简单,对多个浓度的基孔肯雅病毒阳性临床样品均表现良好。

摘要：目的分析疾病诊断相关分组(diagnosis related group,DRG)支付方式对肺癌住院患者医疗资源利用和医疗质量的影响,为我国医保支付方式改革和医疗效率及质量提升提供参考。方法回顾性分析2021年1月28日—2024年4月16日就诊于山东省某三级甲等肿瘤医院肺恶性肿瘤患者的病案首页信息,采用自身配对设计,以2021年10月26日为干预点,收集同一患者在DRG实施前(2021年1月28日—2021年10月25日)和DRG实施后(2021年10月26日—2024年4月16日)的病案首页信息,并通过间断时间序列回归模型分析DRG实施前后医疗资源利用指标(包括住院天数、住院费用、报销费用、自付费用、放化疗次数、靶向及免疫治疗次数、护理检查次数)和医疗质量指标[包括严重并发症或合并症(major complication or comorbidity,MCC)、并发症或合并症(complication or comorbidity,CC)发生次数、30 d再入院次数]的变化。结果共纳入944例患者,其中男性占比49.4%,女性占比50.6%;65岁以下患者占比67.1%,65岁及以上患者占比32.9%。DRG实施后住院天数(β_(2)=-3.235,P0.05);MCC/CC发生次数显著增加(β_(2)=3.011,P0.05)。结论DRG支付方式可有效控制医疗费用和住院时间,提高医院管理效率,但可能增加MCC/CC,影响医疗质量,需关注DRG改革对医疗质量的潜在影响。

摘要：目的建立一种多重实时荧光定量PCR法,同时检测常见蜱传病原体嗜吞噬细胞无形体、伯氏疏螺旋体及斑点热群立克次体(SFGR)。方法针对各病原体的保守区序列设计特异性引物及TaqMan探针,建立并优化多重实时荧光定量PCR反应体系,评价方法的特异性、灵敏度、重复性及对蜱样本的检测准确性。结果建立的多重实时荧光定量PCR法检测嗜吞噬细胞无形体、伯氏疏螺旋体、SFGR,与大肠埃希菌、问号钩端螺旋体、布鲁氏菌等病原体间无交叉反应,特异性良好;灵敏度均达到102拷贝/μl,重复性变异系数均<2.00%;蜱样本检测中,多重实时荧光定量PCR法与单重实时荧光定量PCR法检测结果一致性为100%。结论研究建立的3种蜱传细菌性病原体多重实时荧光定量PCR法特异性好、灵敏度高,为蜱传病原体的检测提供了技术手段。

摘要：目的研究中国脑膜炎奈瑟菌（Nm）中插入序列IS1301的分布与分子流行病学特征。方法设计IS1301引物，应用PCR方法检测2007年1月至2008年10月收集全国16个省、市、自治区219株Nm菌株的IS1301，对IS1301扩增产物进行DNA测序和序列比对，PCR扩增IS1301阳性菌株进行脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析及核酸印迹杂交，研究不同Nm菌株中IS1301的分布特征。结果219株Nm菌株中，34株携带IS1301（15．53％），A、B、C群和不可分群的Nm菌株IS1301阳性率分别为11．11％、20．75％、6．17％和28．57％；IS1301扩增产物测序结果与GenBank登记编号Z49092．1的Nm菌株序列相似度为94％～100％，进化树分析可分为两簇；C群Nm菌株与其他血清群菌株IS1301序列存在较大差别；研究的Nm菌株基因组中至少存在6～17个IS1301拷贝，相同PFGE带型Nm菌株所携带的IS1301拷贝数具有多态性特征。结论IS1301在中国Nm菌株中的分布具有遗传多态性。

摘要：目的比较成年人乙型肝炎（乙肝）疫苗（HepB）初次免疫低应答者使用4种HepB进行1剂次加强免疫后乙肝表面抗体（抗-HBs）应答情况及其影响因素。方法于2009年7月选取山东省济南章丘市3个乡镇18～49岁、居住半年以上、无HepB免疫史和乙肝病毒（HBV）感染史，同时，乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝表面抗体（抗-HBs）及乙肝核心抗体（抗-HBc）全部阴性者作为研究对象，共11590名，应用自行设计的问卷调查其基本情况。将研究对象按整群抽样法分为4组，按0—1—6免疫程序分别接种3剂次10μg重组酿酒酵母HepB（HepB—SC）、10μg重组汉逊酵母HepB（HepB—HP）、20μg HepB—SC和20μg重组中国仓鼠卵巢细胞HepB（HepB—CHO）进行初次免疫。将初免低应答者（10mU／ml≤抗-HBs〈100mU／ml）按整群抽样法分为4组，分别用以上4种HepB进行1剂次加强免疫。加强免疫后1个月采集研究对象静脉血3～5ml，采用化学发光微粒子免疫分析法检测其抗-HBs水平，比较各组抗体应答情况，并分析其影响因素。结果11590名研究对象中，共8592名完成初免并采集血液标本，其中低应答者1306名，低应答率为15．20％。低应答者中1034名完成1剂次加强免疫及免疫后采血，总抗体阳转率（抗-HBs≥100mU／ml）为55．13％（570／1034）；10μgHepB—SC组、10μgHepB—HP组、20μgHepB—SC组和20μgHepB—CHO组抗体阳转率分别为44．54％（106／238）、57．14％（156／273）、56．08％（143／255）和61．57％（165／268），各组差异有统计学意义（χ^2=17．14，P〈0．01）。经两两比较，10μgHepB—HP组和20μgHepB—CHO组抗体阳转率均高于10μgHepB，SC组（χ^2值分别为8．09、14．70，P值均〈0．01）。初免低应答者加强免疫后抗-HBs几何平均浓度（GMC）为178．24mU／ml；10μg HepB—SC组、10μgHepB—HP组、20μgHepB—SC组、20μgHepB—CHO组分别为109．77、243．50、144．98、242．83mU／ml，各组差异有统计学意义（F=9．52，P〈0．01）。结论HepB低应答成年人1剂次加强免疫可以有效提高抗体应答率；抗体应答与加强免疫疫苗种类等多因素有关，20μgHepB—CHO和10μgHepB—HP效果较好。

摘要：目的分析诺如病毒山东株SD20191568全基因组序列,了解其基因组结构特点。方法取诺如病毒阳性者粪便,提取核酸。根据诺如病毒参考株序列设计引物,用RT-PCR分段扩增病毒全基因组,经测序后进行核苷酸、氨基酸序列比对和系统进化分析。结果通过扩增获得SD20191568株接近完整的基因组序列,由7470个核苷酸(nt)组成,在ORF1和ORF2分别属于GII.P15和GIX.1基因型,SD20191568株在ORF1、ORF2和ORF3与GIX.1[GII.P15]基因型参考株的核苷酸同源性分别是90.1%~98.8%、92.7%~98.8%和92.2%~97.3%。根据完整VP1核苷酸系统进化分析,来自GenBank的GIX.1型参考株分为6个基因群(ClusterA-F),SD20191568株与2016-2018年的毒株共同划分在F群,核苷酸同源性为97.2%~98.8%。通过衣壳区氨基酸比对,SD20191568株与F群参考株氨基酸序列相同,未发生变异。结论诺如病毒山东株SD20191568属于GIX.1[GII.P15]型毒株,VP1区核苷酸与原型株差异较大,全长序列可为病毒的遗传进化研究、快速诊断试剂的研制及疫苗的设计提供参考。

摘要：目的分析乙型肝炎疫苗(HepB)初次免疫正常及高应答婴儿初次免疫后10年的抗体持久性及其影响因素。方法于2009年8—9月,以山东省济南、潍坊、烟台和威海市为研究现场,按照随机整群抽样方法,抽取1838名按照"0-1-6"程序完成5μg重组酵母HepB初次免疫的正常应答及高应答[乙型肝炎表面抗体(抗-HBs)≥100 mIU/ml]的7~12月龄婴儿为研究对象。基线调查时(T_(0)),采集研究对象静脉血3 ml,采用化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)检测乙肝表面抗体(抗-HBs)、乙肝表面抗原(HBsAg)和乙肝核心抗体(抗-HBc),同时采用自行设计的调查问卷收集婴儿的月龄、性别、出生体重、是否早产、出生胎次、分娩地点以及母亲HBV感染状况等信息。分别于2014年6—7月(随访5年)、2019年6—7月(随访10年)(T_(1)),采集对象静脉血2 ml,采用CMIA方法检测抗-HBs、抗HBc,对抗-HBs<10 mIU/ml者采用CMIA法检测HBsAg。采用多因素非条件logistic和线性回归模型分析T_(1)时抗-HBs阳性率和几何平均浓度(GMC)的影响因素。结果1838名研究对象进行10年随访,共随访到1359名对象,随访率为73.94%(1359/1838);其中,男童占51.15%(625名)。研究对象抗-HBs阳性率由T_(0)时的100.00%降为T_(1)时的53.44%(95%CI:50.59%~56.26%),降幅为46.56%,年均递减率为6.07%;研究对象抗-HBs GMC由T_(0)时的607.89(95%CI:579.01~642.62)mIU/ml降为T_(1)时的16.44(95%CI:15.06~18.00)mIU/ml,降幅达97.29%,年均递减率为30.30%。多因素logistic回归模型分析结果显示,与及时接种首针HepB者相比,未及时接种首针HepB者的T_(1)时抗-HBs阳性率较低,OR(95%CI)值为0.25(0.07~0.71);与T_(0)时GMC<1000 mIU/ml者相比,GMC≥1000 mIU/ml者的T_(1)时抗-HBs阳性率较高,OR(95%CI)值为2.29(1.76~2.97)。多因素线性回归模型分析结果显示,与及时接种首针HepB者相比,未及时接种首针HepB者的T_(1)时抗-HBs GMC较低,β(95%CI)值为-0.50(-1.24~0.24);与T_(0)时GMC<1000 mIU/ml者相比,GMC≥1000 mIU/ml者的T_(1)时抗-HBs GMC较高,β(95%CI)值为0.81(0.62~1.05)。结论5μg重组酵母HepB初次免疫正常及高应答婴儿免疫后10年抗体水平有所下降;抗体持久性主要与是否及时接种首针疫苗、初次免疫结束时抗-HBs水平有关联。

摘要：目的探讨E型沙眼衣原体（Q）主要外膜蛋白（MOMP）DNA疫苗和重组腺病毒联合免疫小鼠诱导的免疫效应。方法构建、纯化重组腺病毒Ad-MOMP及重组真核表达质粒pVAX1-MOMP。设计4种免疫方案，分别为DNA免疫（DNA组）、重组腺病毒免疫（Ad组）、DNA初次免疫一重组腺病毒加强免疫（DNA／Ad组）、重组腺病毒初次免疫-DNA加强免疫（Ad／DNA组）。末次免疫后2周检测小鼠血清特异IgG、IgG1、IgG2a、IgA抗体，阴道分泌物SIgA抗体及脾淋巴细胞分泌IFN-γ、IL-10水平。结果DNA组诱导较弱免疫应答，未产生sIgA抗体及Th1反应。Ad组诱导出Th1反应及sIgA抗体，且血清抗体显著高于DNA组。联合免疫均能诱导明显强于单独免疫的黏膜sIgA、血清抗体及Th1反应。Ad／DNA组的Th1反应强于DNA／Ad组；而DNA／Ad组的血清抗体和黏膜抗体水平强于Ad／DNA组。结论Ad—MOMP能诱导黏膜免疫及Th1细胞免疫应答，DNA／Ad及Ad／DNA联合免疫产生的特异性免疫应答明显强于单独免疫。其中Ad／DNA的Th1反应优势更明显，DNA／Ad的血清抗体和黏膜抗体反应更强。接种顺序会影响联合免疫的强弱及类型，这为Ct疫苗的设计研究提供新的思路和实验依据。

摘要：目的建立基于蚊媒甲病毒属病毒通用引物的半巢式PCR(RT-hemi-nested PCR)检测方法,用于甲病毒属病毒的实验室检测。方法根据GenBank中的甲病毒属病毒全基因组序列,在其保守区设计3条甲病毒属病毒通用引物,以辛德毕斯病毒(SINV)cDNA、基孔肯雅病毒(CHIKV)cDNA为模板优化条件建立半巢式PCR方法,验证该方法的敏感性及特异性,并对野外采集的蚊虫标本进行检测。结果敏感性检测结果显示,SINV、CHIKV的检测下限值分别为3×103和3×104拷贝/μl。特异性检测结果显示,该体系仅能扩增蚊媒甲病毒属病毒目的基因而不能扩增其他病毒。用该方法对野外采集的蚊虫标本进行检测,结果显示未扩增出阳性条带。结论建立的半巢式PCR检测方法特异性强、灵敏度高,可用于甲病毒属病毒感染的流行病学调查研究。

摘要：目的分析缩短的葡萄球菌类肠毒素X(truncated Staphylococcal enterotoxin-like toxin X,tSElX)氨基酸多态性,对其进行克隆表达纯化并对催吐活性进行评价。方法将tselx序列与本课题组前期完成测序的145株CC398菌株基因组序列及NCBI数据库进行比对分析。设计引物扩增tselx目的基因,将该片段重组于pMD18-T载体中并进行测序鉴定。经限制性内切酶BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后将目的片段构建于质粒pGEX-6P-1及pET-28a(+)中,重组质粒鉴定后,IPTG诱导蛋白表达。将以包涵体形式表达的蛋白进行变性和复性,用亲和层析法和超滤法对表达产物进行纯化。将纯化的tSElX蛋白以250μg/kg喂饲普通狨猴,观察呕吐反应。结果tselx基因在我国不同来源(患者、健康人群和动物)的145株CC398菌株均存在。我国菌株编码蛋白的氨基酸序列同源性为100.0%,与4株美国菌株的同源性分别为97.8%(1株)和98.9%(3株)。通过两套表达系统及不同诱导条件,tSElX均以包涵体形式表达。通过变性及复性,获得高纯度的可溶性重组蛋白tSElX。在250μg/kg剂量下tSElX蛋白不能引起普通狨猴的呕吐反应。结论tSElX氨基酸序列在CC398菌株中普遍存在,且具有一定保守性。高纯度的可溶性tSElX重组蛋白在250μg/kg剂量下不具有普通狨猴催吐活性。