摘要：目的构建串联表达5个针对大鼠kir2·1基因shRNA的真核表达载体,观察其对该基因表达的影响。方法选择5个针对大鼠kir2·1基因的RNA干扰位点,分别设计合成相应的5对寡核苷酸链,形成双链后分别连入带有U6启动子的相应载体,反复酶切连接将表达5个kir2·1shRNA的目的基因依次连接入载体pEGFP6-1,构建成串联真核表达载体pEGFP6-1Kir2·1,将其转染培养的大鼠心肌细胞,RT-PCR和Western印迹检测其对Kir2·1mRNA转录和蛋白表达的影响。结果成功构建串联表达5个大鼠Kir2·1基因shRNA的真核表达载体,该载体对大鼠心肌细胞Kir2·1mRNA转录的抑制率为83·5%,对心肌细胞Kir2·1蛋白表达的抑制率为68·1%。结论串联表达多个大鼠心肌细胞Kir2·1基因shRNA真核表达载体介导的RNA干扰可以特异性抑制该基因的表达,可能成为制造生物起搏器的一种新方法。

摘要：目的构建抑制大鼠心肌细胞k ir2.1基因的短发夹RNA(short hairp in RNA,shRNA)真核表达质粒(pEGFP6-1k ir2.1),观察RNA i对大鼠心室肌细胞k ir2.1 mRNA和蛋白表达情况和搏动频率的影响。方法选择5个针对大鼠心肌细胞k ir2.1基因的RNA干扰位点,分别设计合成5对相应的寡核苷酸链,形成双链后依次将其连入带有U6启动子的载体,得到含5个目的基因的重组质粒pEGFP6-1k ir2.1,转染大鼠心肌细胞,转染后72 h RT-PCR和W estern-b lot检测k ir2.1 mRNA和蛋白表达情况,倒置显微镜下观察细胞的搏动情况。结果转染后72 h,实验组心肌细胞k ir2.1mRNA和蛋白表达明显低于两对照组(P<0.01),两对照组无明显差异。转染后72 h,实验组细胞搏动簇搏动频率较转染后48 h进一步增快,两对照组无明显变化。结论真核表达质粒pEGFP6-1k ir2.1能明显抑制大鼠心肌细胞k ir2.1基因的表达,提高大鼠心肌细胞的自律性。

摘要：目的构建抑制大鼠心肌细胞k ir2.1基因的真核表达质粒pEGFP 6-k ir2.1,观察对大鼠心肌细胞k ir2.1信使RNA(mRNA)、蛋白表达情况及搏动频率的影响。方法选择5个针对大鼠心肌细胞k ir2.1基因的RNA干扰(RNA in terference)位点,设计合成5对相应的寡核苷酸链,形成双链后依次将其连入带有U 6启动子的载体,得到含5个目的基因的重组质粒pEGFP 6-k ir2.1。转染大鼠心肌细胞,并将其分为3组:实验组、阴性质粒对照组和空白对照组。转染后72h,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹法(W estern-b lotting)检测k ir2.1mRNA和蛋白表达情况,并观察细胞搏动频率。结果转染后72h,实验组心肌细胞k ir2.1 mRNA和蛋白表达明显低于两对照组(P<0.01),两对照组间比较差别无统计学意义;实验组搏动频率增加,并显著高于两对照组(P<0.01),两对照组之间搏动频率差别无统计学意义。结论真核表达质粒pEGFP 6-k ir2.1能明显抑制大鼠k ir2.1基因的表达,提高大鼠心肌细胞的自律性。

摘要：背景神经心理学测评是诊断和研究术后认知障（postoperative cognitive dysfunction，POCD）的重要手段。如何规范进行POCD的神经心理学测评目前尚无一致意见。目的分析总结国内外POCD临床研究的文献资料。内容总结国内外常用的POCD神经心理学测评方法，并分析其优缺点。趋向有必要设计一种专门用于POCD的测评量表。这个量表不仅准确全面的反映患者的认知状况，而且测评过程简单，具有多套平行版本。测评结果的评价应使用特殊的统计学方法减少测验误差和练习效应。

摘要：目的探讨突发性聋分型治疗的必要性。方法采用国际通用的标准化临床研究方法，统一设计、统一方案进行前瞻性临床多中心研究。收集年龄在18～65周岁之间，病程在2周以内，未经任何相关医疗处理的突发性聋患者，按照听力曲线分为低中频下降型，中高频下降型；平坦型和全聋型四种类型。每种类型有四种不同治疗方案，根据统一设计的随机表，随机选取其中一种方案进行治疗。其中低中频下降型为银杏叶提取物（金纳多）、泼尼松、巴曲酶（东菱迪芙）及其组合；中高频下降型为利多卡因、泼尼松、金纳多及其组合；平坦型或全聋型为东菱迪芙、金纳多、泼尼松及其组合。结果2007年8月至2011年10月全国33家医院共收集符合入组条件的单侧突发性聋患者1024例，其中男性492例（48．05％），女性532例（51．95％）。年龄为19—65岁，平均（41．2±12．8）岁。按照听力曲线分型，低中频下降型205例（20．02％），高频下降型141例（13．77％），平坦型402例（39．26％），全聋型276例（26．95％）。各种类型的总有效率：低中频下降型最高，为90．73％；平坦型次之，为82．59％；全聋型为70．29％；中高频下降型为65．96％；各型之间总有效率比较，差异具有统计学意义（X2=231．58，P=0．000）。1024病例中，痊愈378例（36．91％），显效229例（22．36％），有效198例（19．34％），无效219例（21．39％）；总有效率为78．61％。糖皮质激素对各型突聋均有效，联合用药优于单独用药。结论不同听力曲线类型的突发性聋患者预后差异很大，根据听力曲线进行分型选择不同的治疗方案具有重要意义。低中频下降型疗效最好，平坦型次之，中高频下降型和全聋型效果不佳。