摘要：目的建立适于规模化生产的贻贝多糖制备工艺。方法以厚壳贻贝为对象,对贻贝多糖制备过程中原料筛选、浸提条件、除蛋白质、醇沉等技术环节进行改进和优化。最后利用改进的工艺进行了贻贝多糖的中试制备。结果厚壳贻贝多糖为白色粉末,多糖平均得率为贻贝干质量的14.1%。MP-A为厚壳贻贝多糖的主要成分,占比约为89.42%,相对分子质量为1268.15 kD。结论建立了流程简单、绿色环保、易于放大的贻贝多糖工业化制备工艺,能获得纯度90%左右的贻贝多糖样品。

摘要：目的优化灰色链霉菌海藻糖合成酶(Trehalose synthase,TreS)基因密码子,提高海藻糖合成酶大肠杆菌基因工程菌株表达水平。方法基于大肠杆菌基因组密码子偏好数据表对tres基因进行密码子优化得基因tres1。基因工程法构建分别含tres及tres1基因的表达载体pET-26b(+)-tres和pET-26b(+)-tres1,CaCl2法转入大肠杆菌BL21(DE3)获得表达海藻糖合成酶的大肠杆菌基因工程菌株,采用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,对摇瓶发酵粗酶液进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析及酶活性测定以确定表达水平。结果 1707 bp海藻糖合成酶tres基因共优化碱基序列268 bp,优化后序列的GC含量由65.8%降低至54.4%,密码子适应指数(CAI)由0.37提升至0.97,SDS-PAGE及酶活性分析表明,含pet-26b(+)-tres1表达载体的大肠杆菌基因工程菌株海藻糖合成酶蛋白表达量高,酶活性比含pet-26b(+)-tres工程菌提高60.3%以上。结论密码子优化可有效提高海藻糖合成酶TreS蛋白在大肠杆菌中的表达,为海藻糖合成酶的异源高效表达提供了重要参考。

摘要：普鲁兰糖是由出芽短梗霉产生的一种胞外多糖,在食品、药物、化妆品等领域有广泛应用,但其具体的分子合成机制和分子量调控机制尚不明确。本文回顾了近年普鲁兰糖生物合成途径及分子量调控机制研究,并绘制了可能的普鲁兰糖合成途径,总结了影响普鲁兰糖产量和分子量的因素。

摘要：目的构建一株高效表达人骨形成蛋白2(hBMP-2)的基因工程菌株,并通过复性、纯化获得有生物活性的rhBMP-2。方法采用基因工程法将hBMP-2基因片段与pET-28a(+)质粒载体相连,构建大肠杆菌表达系统。工程菌发酵后,超声破碎收集包涵体,包涵体经裂解后通过稀释复性法进行复性,SDS-PAGE检测复性情况,并采用HiTrapHeparinHP纯化,C2C12细胞检测活性。结果rhBMP-2在大肠杆菌中以无活性的包涵体形式表达,1L发酵罐高密度发酵rhBMP-2包涵体湿重可达20g/L。采用稀释法复性,蛋白复性率大于40%,亲和层析纯化后,二聚体蛋白纯度达95%以上,且能诱导C2C12细胞碱性磷酸酶的表达,具有同市售产品相同的细胞活性。结论成功构建了高效表达rhBMP-2的基因工程菌株,复性方法简单且无需对包涵体进行纯化,蛋白复性浓度高,纯化方法简便,大大降低了工业化生产成本。

摘要：益生元因安全有效,无毒副作用的特点,其降血脂功效受到越来越多的关注。本文综述了近年益生元在降血脂功效和作用机制方面的研究进展,并对益生元在降血脂方面的应用前景进行了展望。

摘要：目的 探讨玻璃酸二甲基硅烷醇复合物(DSHA)的细胞毒性,及其对苯并芘(BAP)引起的兔鼻黏膜上皮细胞损伤的修复作用.方法 采用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度的DSHA原料药及鼻喷剂对鼻黏膜上皮细胞的细胞毒性,评价其对鼻黏膜上皮细胞增殖的影响;采用BAP刺激离体培养的兔鼻黏膜上皮细胞模拟雾霾对鼻黏膜的损伤,用MTT法检测DSHA对BAP引起的鼻黏膜上皮细胞损伤的保护作用,采用ELISA法检测DSHA对炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1(IL-1)、IL-8表达水平的影响.结果 0.002%-0.05%的DSHA原料和0.001%-0.005%的鼻喷剂处理细胞24 h,细胞存活率均在99%以上,无细胞毒性;此外,DSHA可显著抑制BAP引起的鼻黏膜细胞存活力的下降,并能降低TNF-α、IL-1、IL-8的表达.结论 DSHA对鼻黏膜上皮细胞无细胞毒性且对大气污染物BAP引起的细胞损伤有修复作用.