摘要：背景:研究表明,番茄红素能够促进成骨细胞的增殖和生长,增加其矿化能力。目的:实验拟验证抗氧化剂番茄红素影响活性氧族介导破骨细胞骨吸收功能的作用途径。设计、时间及地点:随机分组设计,对比观察,实验于2005-01/2006-12在山东省骨科研究所完成。材料:24h内出生的清洁级Wistar大鼠幼鼠30只,用于破骨细胞的培养;番茄红素由Sigma公司提供。方法:将24孔细胞培养板内细胞分为5组。空白对照组:所用培养液不含番茄红素;10-7mol/L番茄红素组、10-6mol/L番茄红素组、10-5mol/L番茄红素组和10-5mol/L维生素C组培养孔内预先置入盖玻片或薄骨片,对种植其上的破骨细胞分别用含有不同浓度番茄红素或维生素C的α-MEM培养基进行培养。主要观察指标:在分离培养的细胞玻璃爬片或骨片进行抗酒石酸酸性磷酸酶染色、四唑氮蓝染色,最后对骨片进行扫描电镜照像并用image-proplus5.0图像分析软件分析骨吸收陷窝的数目和面积。结果:①抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性多核细胞镜下胞浆酸性磷酸酶活性部位呈紫红色,细胞核染色阴性或淡染,伪足清晰。②四唑氮蓝染色结果提示,10-5mol/L的番茄红素明显抑制了破骨细胞产生活性氧族的能力。③扫描电镜结果显示,破骨细胞在骨片上形成形态不一的骨陷凹,10-7mol/L的番茄红素部分抑制了骨吸收陷凹面积的增加,而10-5mol/L的番茄红素则几乎完全抑制了骨吸收陷凹的形成。结论:番茄红素在体外可以通过抑制破骨细胞产生活性氧族来抑制其骨吸收功能。

摘要：背景:血管脱细胞组织基质作为天然生物支架材料的制备与临床应用具有一定的时差,保存条件对其影响逐渐收到人们重视。目的:拟观察不同液氮保存时间对脱细胞血管基质支架材料组织形态及力学特性的影响。设计、时间及地点:随机分组设计,对比观察,于2007-08/2008-05在青岛市市立医院心脏外科实验室完成。材料:健康新西兰兔10只,体质量550~600g,用于制备脱细胞血管基质。方法:采用胰蛋白酶、低渗溶液、化学除垢剂法处理兔胸主动脉制备脱细胞血管基质。根据液氮保存时间的不同将制取的血管随机分为液氮1月组,液氮2月组和液氮3月组;另设新鲜组:未用液氮保存而作为对照。主要观察指标:苏木精-伊红染色、扫描电镜观察各组脱细胞血管基质形态变化,并作力学测试,包括Lagrange应变、Lagrange应力、伸长比和极限应力。结果:苏木精-伊红染色可见新鲜组血管脱细胞组织基质中胶原纤维和弹性纤维保持原来的形态和结构,呈网状排列,细胞已基本去除。液氮保存组光镜下见与新鲜组无明显差异。扫描电镜见新鲜组血管脱细胞组织基质的纤维结构完整,胶原纤维无断裂,为网状和多孔状,孔径为(100~150)×(10~20)μm。液氮保存组胶原纤维结构完整,呈网状排列,胶原纤维无断裂现象,孔径与新鲜组无明显差异。各组力学指标相比,差异无显著性意义(P>0.05)。结论:不同液氮保存时间对脱细胞血管基质的形态学、组织学以及力学特性方面没有明显影响。

摘要：目的 :随着乳腺癌手术后5年生存率的不断提高 ,乳腺癌根治术后乳房再造已成为当前乳腺外科的一个重要课题。方法 :自1993年至1996年先后随机对34例Ⅰ、Ⅱ期乳腺癌患者施行保留乳头附合体的手术切口的改良根治术。结果 :在保证达到根治效果的基础上 ,保留乳头及乳晕的组织结构 ,为以后的乳房再造创造了良好的解剖条件。同期随机取43例改良根治术的乳腺癌患者作为对照。结论 :统计结果表明 ,两组病例疗效相同。随访结果证明 ,该手术切口的设计 ,不影响手术根治的效果 ,无特殊并发症 ,术后复发率及死亡率 ,与改良根治术无差异。

摘要：背景:目前脱细胞血管基质的制备方法有酶消化法和去污剂法。十二烷基硫酸钠为离子型去垢剂,脱细胞效果强,但易引起较多蛋白纤维损伤,影响血管的结构和力学特性。Triton X-100为柔和的非离子型去垢剂,两者联合应用可减少纤维损伤。目的:采用酶、非离子型和离子型去垢剂联合法制备猪脱细胞血管基质,并检测其生物学性状。设计、时间及地点:对比观察的细胞学实验,于2007-08/2008-05青岛市市立医院心脏中心实验室完成。材料:雄性幼猪1只,取其胸主动脉用于制备脱细胞血管基质。方法:采用含双抗的0.125%胰蛋白酶、1%Triton X-100、1%十二烷基硫酸钠逐步处理猪胸主动脉。主要观察指标:苏木精-伊红染色观察细胞脱除情况。扫描电镜、透射电镜观察细胞脱除情况及胶原纤维和弹性纤维情况。测定脱细胞血管基质中胶原蛋白含量,检测血管脱细胞血管基质的伸长比、极限应力。结果:经该法处理的猪血管内细胞全部脱除,胶原纤维、弹性纤维无断裂,细胞外基质保持完好,其胶原蛋白含量和力学性状与新鲜组织无明显差别。结论:酶、非离子型和离子型去垢剂联合法是制备脱细胞血管基质的较好方法,制备获得的脱细胞血管基质生物学性状保持良好。

摘要：背景:单光子放射型计算机断层显像检查能够准确发现脑的超早期循环障碍程度、确定时间窗及缺血后不同时间恢复脑功能的可逆程度。目的:制作猪缺血性脑卒中模型,观察其可逆时相窗,并了解单光子发射型计算机断层脑缺血灌注显像在超早期时相窗评估中的价值。设计:随机对照验证性实验。单位:一所市级医院的神经内科。材料:实验于2002-01/08在青岛市市立医院动物实验基地完成,选择4月龄普通家猪12头,雌雄不拘,体质量8～10kg,按常规普通喂养。干预:将12头猪随机分为阻断组和再灌注组,每组6头,均用动脉夹夹断单侧颈总动脉。阻断组动物在第2,4,5,6,8,10小时处死,再灌注组在相应时间去除颈总动脉夹形成再灌注脑缺血模型,24h后处死。所有动物在处死前分别行单光子放射型计算机断层显像检查,局部脑血流量测定,并行CT扫描。处死后取两侧大脑各叶组织1mm3数块,用苏木精-伊红染色后采用光镜和电镜观察脑组织学变化。主要观察指标:单光子放射型计算机断层显像和脑CT检查观察阻断不同时间动物脑组织细胞学变化。结果:12头猪全部进入结果分析。光镜、电镜显示阻断5h阻断侧神经元略有肿胀,出现线粒体肿胀,线粒体脊变少,胞质减少,少数出现核固缩等病理性改变,并随阻断时间延长而逐渐加重,而阻断4h以内去除动脉夹者,脑组织结构基本恢复。结论:单光子放射型计算机断层显像可在脑缺血损伤即刻发现脑损伤表现,并经组织学验证脑缺血5h后神经元即就进入不可逆的状态。

摘要：背景：神经干细胞增殖分化受体内外微环境的影响,不同细胞培养液对细胞的增殖分化有不同的作用。目的：改进传统上应用无血清培养液培养原代神经干细胞的方法,寻找一种快速便捷的培养方式。设计、时间和地点：随机对照细胞实验,于2005-11/2006-09在青岛大学医学院脑科研究所完成。材料：选用孕后12-16d的Wistar大鼠10只,取胎鼠脑组织制成细胞悬液。方法：将配置的细胞密度约1×10^9个/mL滤液接种入4个50mL细胞培养瓶,分为2组：对照组和实验组,每组2个培养瓶。对照组加入DMEM/F12、2%B27型人类白细胞抗原、20mg/L的碱性成纤维细胞生长因子,20mg/L的表皮生长因子无血清培养液,实验组加入DMEM/F12、5%胎牛血清,两三天后换为与对照组相同的无血清培养液。主要观察指标：应用倒置显微镜和免疫细胞化学法观察两组神经干细胞的增殖生长状况。结果：神经干细胞生长状态：①两组大多数细胞表达神经干细胞的特征性标志抗原神经巢蛋白,免疫染色呈阳性反应。②实验组神经干细胞的聚球速度明显快于对照组,可提前三四天观察到神经干细胞球。③两组细胞数量基本无差异,实验组细胞球体较对照组大。经血清培养液诱导分化后部分呈神经元特异性烯醇酶阳性,部分呈神经胶质酸性蛋白阳性,表明神经干细胞已分化为神经元样细胞和神经胶质细胞。结论：含血清培养液预先培养可以加快神经干细胞增殖生长速度。

摘要：背景：内皮祖细胞在贴壁分化过程中其干细胞标记以及内皮细胞表型的变化过程将有助于了解内皮祖细胞的分化特性。但目前还未找到区别于成熟内皮细胞特异性的细胞标记。目的：观察大鼠外周血单个核细胞外分化为内皮细胞的过程中干细胞标志物以及内皮细胞表型的变化。设计、时间及地点：细胞观察实验,于2004-06/2008-12在青岛市市立医院心脏外科实验室完成。材料：抽取雄性SD大鼠外周血,应用Ficoll密度梯度离心的方法获得单个核细胞。方法：单个核细胞体外培养于纤连蛋白处理的培养皿中,同时应用血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子诱导,使之向内皮细胞转化。主要观察指标：以免疫组织化学方法检测细胞CD31、CD34、Flk-1、vWF在第1-7天的表达。结果：贴壁细胞的CD31、CD34、Flk-1、vWF在不同时段呈不同程度的表达。干细胞标志物CD31、CD34在培养的第2天开始表达,第4天最强,以后逐渐减弱,第6天消失。而Flk-1在第3天开始表达,以后逐渐增强,第7天时最强。vWF表达是逐步出现的,第7天时表达为100%。结论：大鼠外周血干细胞向内皮祖细胞分化的过程中,干细胞标志物逐渐消失,内皮细胞的表型逐步出现。

摘要：背景:循环中内皮前体细胞在一定的条件下可向内皮细胞转化,而且可进一步形成血管。目的:探讨从外周血中获取的内皮前体细胞自体移植后促进心肌缺血区域血管新生的可行性和有效性,为冠状动脉硬化性心脏病患者的治疗提供新的细胞移植学方法。设计:完全随机对照实验。单位:青岛儿童医院心脏中心。材料:选用雄性SD大鼠60只,清洁级,体质量(340±20)g,由青岛实验动物中心提供。实验动物随机分为两组:实验组和对照组,每组30只。两组又按内皮前体细胞注入后2,4,8周3个时间点进行观察,每个时间点10只。实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。方法:实验于2003-05/2004-09在青岛医药生物科技重点实验室完成。将实验组动物麻醉后,抽取动物的外周动脉血,应用密度梯度离心法获取单个核细胞。应用加入血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的特定培养基培养后,获得CD31、CD34、FIk-1和血管性血友病因子免疫荧光染色阳性的内皮前体细胞。结扎SD大鼠冠状动脉左前降支,建立急性心肌梗死动物模型,然后将得到的自体细胞重新植入缺血心肌局部区域。对照组注入细胞培养液,其余步骤与实验组相同。分别于结扎后2,4,8周过量麻醉处死所有动物,制作心脏组织切片。主要观察指标:①进行HE染色后光镜下观察心肌基本结构变化情况。②组织切片经Ⅷ因子免疫组化染色后,应用德国ZEISS(蔡司) Axiotron图像分析仪分析视野内Ⅷ因子阳性内皮细胞数量和微血管密度。结果:纳入的60只SD大鼠全部进入结果分析。①对照组心肌组织结构较为杂乱,心肌细胞多为被胶原组织和成纤维细胞所替代,梗死边缘区心肌细胞呈现不规则形状,部分细胞明显肥大。与对照组比较,移植组心肌胶原纤维融合较少,组织排列结构更为有序;移植区域微血管密度明显增高。②内皮前体细胞注入后第2,4和8周组心肌缺血区域微血管密度明显高于对照组的相应时间点,差异有显著性意义(P0.05)。结论:通过一定的体外分离、定向分化、培养、扩增途径,可以从外周血获得较为纯化的内皮前体细胞;内皮前体细胞移植对局部梗死心肌组织结构有一定的保护作用,并可促进血管新生。

摘要：目的：探讨儿童青少年专用眼镜架的设计方案。方法：依照《人体测量方法》中有关规定，对青岛地区5～17岁青少年2692人进行了瞳孔距离、耳根上点眶距测量。结果：以瞳孔距离为主要参考指标，设计出5种眼镜架，再按5种不同瞳距分别计算出镜圈和镜腿尺寸，以适合儿童少年配戴。结论：要设计出适合我国青少年配戴的，科学合理的眼镜架时保护青少年视力有重要意义。

摘要：背景:氧化损伤可诱发晶状体上皮细胞凋亡。研究已经发现,全身补充维生素C,可以使房水维生素C浓度随之增高,以避免上述氧化损伤发生。目的:观察维生素C对氧化损伤所诱发的晶状体上皮细胞凋亡的抑制作用。设计:以动物晶状体为观察对象,随机对照实验。单位:青岛大学医学院附属医院眼科。材料:选用成年新西兰标准兔120只,雌雄不拘,体质量3～5kg。维生素C及300g/L过氧化氢(上海光达化工试剂厂)。方法:实验于2002-01/2004-01在青岛大学医学院附属医院中心实验室完成。①晶状体培养:处死动物,取晶状体240只,培养后,将其中透明晶状体192只按随机抽签法分为3组,每组晶状体64只。对照组采用无血清无酚红的MEM培养基。过氧化氢组采用含1mmol/L过氧化氢的无血清无酚红的MEM培养基;每6h另加30g/L过氧化氢62μL,调整浓度至1mmol/L。过氧化氢+维生素C组采用含1mmol/L过氧化氢和1mmol/L维生素C的无血清无酚红的MEM培养基。每组在同等培养条件下,在培养6,12,18,24,36,48,72和108h8个时间点进行观察。②晶状体混浊情况观察方法:在白色背景下设计一宽0.5mm,间距10mm的垂直交叉的黑色线条,将被检晶状体置于“+”字交叉的黑色线条之上,观察透过晶状体所能看到的清晰度。③晶状体上皮细胞凋亡情况检测:用原位末端标记法及DNA片段分析检测各组各时间点晶状体上皮细胞凋亡情况。光镜下观察原位末端标记法染色标本,记录各组晶状体上皮细胞凋亡的发生率。计算凋亡细胞所占百分比即为上皮细胞凋亡率。主要观察指标:①各组晶状体混浊情况。②各组晶状体上皮细胞凋亡情况。结果:①晶状体混浊情况:培养108h后过氧化氢+维生素C组晶状体混浊情况明显轻于过氧化氢组。②晶状体上皮细胞凋亡情况:过氧化氢组各培养时间点和过氧化氢+维生素C组培养24,48,72h后晶体上皮细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05～0.01);过氧化氢+维生素C组各培养时间点晶体上皮细胞凋亡率明显低于过氧化氢组(P<0.01)。③DNA片段分析结果:过氧化氢组24,36,48及72h各时限均呈现凋亡细胞典型梯状条带,而培养24h的对照组和维生素C组均未出现此变化而仅呈现正常电泳条带。结论:维生素C可抑制过氧化氢氧化损伤所诱导的晶状体上皮细胞凋亡和白内障形成。