摘要：为了解析蒙古黄芪[Astragalus membranaceus(Fisch.)***(Bge.)Hsiao]的遗传多样性及遗传结构,本研究基于蒙古黄芪全基因组数据进行了SSR分子标记的开发及引物的设计。结果显示全基因组内共检索到1349个SSR位点,从单核苷酸重复至六核苷酸重复共有43种重复类型,其中二、三核苷酸重复最多,分别为6.45%和85.69%。通过对SSR分子标记有效性和多态性的筛选,得到15对引物多态信息含量变化范围为0.076~0.462,具有良好的多态性。利用筛选出的引物对来自7个不同居群共120份蒙古黄芪样本进行遗传多样性的分析,得到Shannon’s信息指数平均值为0.535,Nei’s基因多样性指数平均值为0.422,浑源居群蒙古黄芪的遗传多样性最高,五寨居群蒙古黄芪的遗传多样性最低;居群间分化系数平均值为0.164,与AMOVA结果一致,蒙古黄芪的遗传分化主要发生在居群内;UPGMA聚类分析将不同居群的蒙古黄芪分别聚为一支,具有一定的地域性。通过蒙古黄芪遗传多样性分析结果验证了本研究开发的SSR分子标记可用于核心种质构建、良种选育与不同物种分子鉴定等研究。

摘要：本试验旨在探究添加不同剂量枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)对黄曲霉毒素B_(1)(AFB_(1))致羊人工瘤胃异常发酵的影响。试验以全混合日粮(TMR)为发酵底物,采用单因素试验设计,分为7个组,包括对照组(NC组)、AFB_(1)组和5个试验组,其中NC组添加1 mL甲醇,AFB_(1)组添加1 mL 10μg/mL的AFB_(1),试验组分别同时添加1 mL 10μg/mL的AFB_(1)和0.01%、0.03%、0.06%、0.12%、0.24%的枯草芽孢杆菌制剂,每组3个重复。试验当天随机收集3只屠宰羊的新鲜瘤胃液,按照试验设计在39℃条件下培养4、8、12、24和48 h,记录pH和产气量,测定氨态氮(NH_(3)-N)、微生物蛋白(MCP)和挥发性脂肪酸(VFA)含量,并利用荧光定量PCR检测微生物区系。结果表明:1)发酵24 h时,AFB_(1)组产气量与NC组相比显著降低(P0.05)。AFB_(1)组NH_(3)-N和MCP含量低于NC组,但无显著差异(P>0.05);0.03%组NH_(3)-N和MCP含量与AFB_(1)组相比极显著升高(P<0.01)。3)发酵24 h时,AFB_(1)组发酵液各VFA含量在数值上均低于NC组,其中异丁酸含量与NC组相比显著降低(P<0.05);0.03%组乙酸、丁酸和总挥发性脂肪酸(TVFA)与AFB_(1)组相比极显著提高(P<0.01),丙酸和异丁酸含量与AFB_(1)组相比显著提高(P<0.05)。4)与NC组相比,AFB_(1)组产琥珀酸丝状杆菌(Fibrobacter succinogenes)、嗜淀粉瘤胃杆菌(Ruminobacter amylophilus)和原虫相对丰度极显著降低(P<0.01),溶纤维丁酸弧菌(Butyrivibrio fibrisolvens)和栖瘤胃普雷沃氏菌(Prevotella ruminicola)相对丰度显著降低(P<0.05)。与AFB_(1)组相比,0.03%组白色瘤胃球菌(Ruminococcus albus)、黄色瘤胃球菌(Ruminococcus flavefaciens)、栖瘤胃普雷沃氏菌和产甲烷菌相对丰度显著提高(P<0.05),溶纤维丁酸弧菌、嗜淀粉瘤胃杆菌和原虫相对丰度极显著提高(P<0.01)。综上所述,AFB_(1)会降低体外发酵瘤胃产气量以及NH_(3)-N、MCP和VFA含量,同时抑制瘤胃微生物活性;饲粮中添加0.03%枯草芽孢杆菌可以有效缓解AFB_(1)致羊人工瘤胃发酵的抑制作用,促进瘤胃发酵。

摘要：本试验通过逐步递增饲粮精粗比诱导绵羊发生亚急性瘤胃酸中毒(SARA),探究其对瘤胃异常代谢产物、瘤胃菌群、血气和血清生化指标的影响,为防治绵羊SARA提供理论依据。选取50只2月龄同期断奶健康的杜泊羊()×湖羊(♀)F1代,随机分为2组。对照组(CK组,n=15)饲喂精粗比为50∶50的基础饲粮;SARA诱导组通过饲粮精粗比递增诱导绵羊发生SARA,饲粮精粗比依次为50∶50、70∶30、80∶20、90∶10和100∶0,各精粗比饲粮均饲喂7 d,瘤胃液pH在5.2~5.6持续3 h以上的绵羊构成SARA模型组。分别于各精粗比饲粮第7天晨饲后1、2、3、4、5、6和8 h采集瘤胃液,测定瘤胃异常代谢产物含量和瘤胃菌群结构。SARA诱导成功后,采集CK组和SARA模型组颈静脉血液,测定血气和血清生化指标。结果显示:1)在饲粮精粗比为100:0时,SARA诱导组中有27只绵羊瘤胃液pH在5.2~5.6持续3 h以上,部分羊腹泻,瘤胃液偏黄恶臭黏稠,符合SARA标准,构成SARA模型组。2)SARA模型组Chao1指数显著低于CK组(P<0.05),瘤胃菌群结构发生变化,乳酸产生菌相对丰度增加,瘤胃菌群碳水化合物代谢相关基因富集程度增加。3)SARA模型组瘤胃液和血液中乳酸、组胺和内毒素含量均显著高于CK组(P<0.05)。4)SARA模型组血液二氧化碳总量、实际碳酸氢盐和全血碱剩余含量显著低于CK组(P<0.05)。5)SARA模型组血清谷丙转氨酶活性显著低于CK组(P<0.05),血清生化指标处于正常范围。综上所述,绵羊SARA发生过程中,瘤胃菌群丰富度降低,菌群结构改变,乳酸产生菌相对丰度增加,血液和瘤胃液乳酸、内毒素和组胺含量升高,机体发生代谢性酸中毒。

摘要：本试验旨在利用主成分分析评价精料、构树和全株玉米青贮以不同比例组合后的组合效应,筛选最佳组合比例。试验设计3个精粗比(40∶60,50∶50,60∶40),15种日粮组合比例,利用体外模拟瘤胃发酵测定15个组合的瘤胃发酵指标,通过主成分分析法对其进行综合评价。精粗比40∶60时,40∶60∶0和40∶45∶15组的氨态氮(NH3-N)含量较高;精粗比50∶50时,50∶0∶50,50∶12.5∶37.5和50∶25∶25组的72 h产气量(GP72)较高(P>0.05),50∶25∶25组的NH3-N含量最高;精粗比60∶40时,60∶10∶30组的乙酸(AA)、丙酸(PA)和总挥发性脂肪酸(TVFA)浓度显著高于其他各组(P<0.05)。精料∶构树∶全株玉米青贮比例为60∶10∶30,综合主成分值最大。在本试验条件下,日粮中添加构树可以改善肉牛体外瘤胃发酵性能,当精料∶构树∶全株玉米青贮比例为60∶10∶30时,组合效果最佳。

摘要：将重组酶介导的扩增技术(RAA)、CRISPR/Cas12a的切割反应及酶标仪或试纸条相结合,建立设备依赖度低的鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)核酸检测方法。以MG基因mgc2为靶标,设计CRISPR RNA及RAA引物,并优化检测体系、评价新建核酸检测方法性能。结果表明,该方法特异性和灵敏性均较好,对除MG外其他常见病原体检测结果均为阴性,检测下限可达10 copies·μL^(-1)。与商业化荧光定量PCR试剂盒对比检测45份临床样品符合率超过93%。综上,通过将RAA与CRISPR/Cas12a相结合,建立一种不依赖昂贵仪器的MG核酸检测方法,具有良好应用前景。

摘要：为了确定鸡球虫病三价四株活疫苗的免疫效果,对鸡球虫病三价四株活疫苗进行了最小免疫剂量、最小首免日龄、最小二免间隔期、免疫产生期和持续期以及网上平养和地面平养试验。结果显示,当鸡球虫病三价四株活疫苗一免/二免剂量分别≥1600和3200个孢子化卵囊/只时,可达到良好免疫效果,符合疫苗效力检验标准;首免日龄≥4日龄的免疫攻毒组鸡至少9只雏鸡3个肠段的病变记分均≤1.0,死亡率≤10.0%,符合效力检验标准;二免间隔在7~11 d时均能够获得良好的免疫效果;鸡只在二免后第6~56天可产生足够免疫保护;网上和地面平养对免疫鸡群的生长性能与疫苗的免疫效果并无显著差异,均符合疫苗效力检验标准。表明鸡球虫病三价四株活疫苗的最小免疫剂量:一免剂量为1600个孢子化卵囊/只,二免剂量为3200孢子化卵囊/只;最小首免日龄为4日龄;最小二免间隔为7 d;免疫产生期为二免后的第6天,免疫持续期可至二免后第56天;该疫苗可用于网上和地面平养鸡的免疫。

摘要：【目的】获得抗信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)蛋白的特异性纳米抗体,通过验证该纳米抗体在免疫组织化学和Western blotting检测中的应用及对黑色素瘤细胞B16生长的作用,对其功能进行鉴定。【方法】通过噬菌体展示淘筛技术从羊驼B16纳米抗体文库中筛选抗STAT3纳米抗体,获得阳性克隆并测序;根据序列信息设计和构建pColdⅠ原核表达质粒,并通过大肠杆菌进行纳米抗体表达;通过镍柱、分子筛和超滤管进行纯化和浓缩;利用免疫组织化学和Western blotting验证纳米抗体是否结合脑组织中STAT3蛋白;采用CCK8法分析该纳米抗体对B16细胞增殖的影响,并用Western blotting检测其对其分子路径相关基因表达的影响。【结果】经过噬菌体展示淘筛及阳性克隆测序后,成功获得1株特异性结合STAT3蛋白的纳米抗体单克隆菌株,命名为STAT3-VHH-10B;将构建的该纳米抗体的pColdⅠ原核表达载体进行诱导表达和纯化,SDS-PAGE结果显示,成功得到大小约为15 ku的抗STAT3纳米抗体;免疫组织化学和Western blotting结果显示,纯化制备的纳米抗体可成功检测到大脑组织中STAT3的表达;细胞增殖检测结果显示,该纳米抗体对B16细胞增殖具有明显的抑制作用,并下调细胞增殖路径的主要基因CycD 1、Bcl2、cMyc编码蛋白的表达。【结论】本研究成功筛选到1株抗STAT3蛋白的特异性纳米抗体,且该纳米抗体可用于免疫组织化学和Western blotting法检测组织中STAT3的表达,此外,通过与抗原结合后,抑制主要基因CycD 1、Bcl 2、cMyc的表达,从而抑制B16细胞增殖。本研究结果将为STAT3及其纳米抗体的功能研究提供新工具。

摘要：本试验旨在探讨PRRSV/LPS共刺激对小鼠雌二醇(E2)分泌的影响,以及探究苦参碱对共刺激引起E2变化的影响。试验分为空白组,PRRSV与LPS共刺激组和苦参碱治疗组。给药7 d后采集血液,ELISA法测定血清E2水平;冻存卵巢组织,qRT-PCR检测StaR、CYP11a1、CYP19a1、3β-HSD、17β-HSD、Caspase-3、Bax和Bcl-2 mRNA的表达。结果表明,与空白组相比,PRRSV与LPS共刺激组中血清E2含量降低(P0.05)。苦参碱可以明显升高由PRRSV/LPS共刺激诱导的E2含量降低,显著升高CYP11a1 mRNA的表达(P<0.05)。结果提示,PRRSV/LPS共刺激降低小鼠E2分泌,而苦参碱可以抑制共刺激诱导的E2分泌降低。

摘要：为了筛选不同产羔数辽宁绒山羊母羊各组织中稳定表达的内参基因,试验随机选取同期发情后的4岁产单羔和双羔母羊各3只,采集心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、下丘脑、垂体、子宫角、卵巢,取各器官部分组织提取总RNA,检测总RNA浓度和纯度后合成cDNA,设计U6、ACTβ、B2M、18S rRNA、GAPDH、RPLPO内参基因引物,检测各引物的特异性和扩增效率,采用实时荧光定量PCR方法检测6个常见内参基因在以上组织中的表达情况,通过geNorm、NormFinder、BestKeeper和RefFin-der软件综合筛选出稳定表达的内参基因,并用geNorm软件分析最佳内参基因个数。结果表明:提取到的总RNA浓度和纯度较高,设计的引物特异性和扩增效率(96.53%~107.23%)较好,各内参基因在不同产羔数辽宁绒山羊母羊全部组织中均大量表达,且表达水平存在差异,Ct值在8.18~17.61之间。经geNorm、NormFinder、BestKeeper软件筛选发现不同产羔数辽宁绒山羊母羊性腺轴组织和全部组织中最稳定的内参基因不同,可能是软件算法不同造成的;经geNorm软件分析,最佳内参基因个数均为2个。经RefFinder软件分析在下丘脑中最稳定的内参基因组合是RPLPO和B2M基因,垂体中最稳定的内参基因组合是RPLPO和U6基因,卵巢中最稳定的内参基因组合是RPLPO和GAPDH基因,子宫角中最稳定的内参基因组合是GAPDH和18S rRNA基因。说明在不同产羔数辽宁绒山羊母羊全部组织中及性腺轴下丘脑、垂体、卵巢、子宫角各组织中最稳定的内参基因的组合分别为是U6和RPLPO,RPLPO和B2M,RPLPO和U6,RPLPO和GAPDH,GAPDH和18S rRNA。

摘要：旨在探究一株酿酒酵母和两株瘤胃源褶皱假丝酵母对亚急性瘤胃酸中毒(subacute ruminal acidosis,SARA)绵羊的缓解作用及其机制,为研制防治SARA微生态制剂提供优良菌株和理论依据。选取60只2月龄同期断奶的杜泊羊(♂)×湖羊(♀)F_(1)代作为试验动物。通过逐步递增饲粮精粗比成功诱导40只绵羊发生SARA,将SARA绵羊随机分为4组,每组10只,分别为:SARA组、酿酒酵母组(Saccharomyces cerevisiae,SC)、褶皱假丝酵母一组(Diutina rugosa 1,DR1)、褶皱假丝酵母二组(Diutina rugosa 2,DR2),各组均饲喂精粗比为90∶10的日粮,酵母组于每天晨饲后分别灌服100 mL酿酒酵母ACCC 21162、褶皱假丝酵母N09、褶皱假丝酵母N07。对照组(Control,CON)饲喂50∶50饲粮。分别于第1、3、7、10天测定各组瘤胃液pH,第10天测定瘤胃与血液异常代谢产物、血气指标、瘤胃菌群。结果显示:1)灌服酵母组第3天后瘤胃液pH显著高于SARA组(P<0.05),灌服酵母可使SARA得有效缓解。2)瘤胃菌群相对丰度发生变化,SC组最优菌属为乳杆菌属,CON组最优菌属为普雷沃氏菌科未确定菌属,SARA、DR1、DR2组最优菌属为瘤胃菌科未确定属;灌服酵母组中,SC组丰富度指数最高,DR2组多样性指数最高。3)灌服酵母组瘤胃液和血液乳酸、瘤胃液组胺显著低于SARA组(P<0.05)。4)SC、DR2组血液pH、全血碱剩余极显著高于SARA组(P<0.01),灌服酵母组血液二氧化碳分压、二氧化碳总量、实际碳酸氢盐显著高于SARA组(P<0.05)。5)瘤胃液pH与血液实际碳酸氢盐呈现显著正相关(P<0.05),瘤胃液乳酸与瘤胃菌群Chao 1指标呈现显著负相关(P<0.05)。结果提示,3株酵母均可提升瘤胃菌群丰富度、降低瘤胃液和血液乳酸、减轻瘤胃炎症、缓解机体酸中毒。