摘要：目的构建H-2Kb限制性WT1蛋白CTL表位肽的真核表达载体并检测其在293T细胞中的表达,并鉴定疫苗抗肿瘤效应。方法筛选鉴定H-2Kb限制性WT1蛋白CTL表位9肽,设计并合成肽疫苗核酸序列,插入p UC57载体,经酶切和测序鉴定,亚克隆至真核表达载体pc DNA3.1(+)及p EGFP-N1载体,转染293T细胞,RT-PCR鉴定目的基因的转录,共聚焦显微镜鉴定目的基因的表达。构建pc DNA3.1(+)-WT1免疫小鼠,取小鼠脾细胞进行体外特异CTL杀伤FBL3细胞试验。结果构建的基因疫苗经测序、双酶切及PCR鉴定确认无误;其携带的目的基因可在293T细胞中表达。免疫小鼠后特异CTL对FBL3杀伤结果高于对照组(P<0.05)。结论成功构建了H-2Kb限制性WT1蛋白CTL表位肽基因疫苗,载体疫苗能在真核细胞中成功表达,疫苗特异CTL具有体外杀伤肿瘤细胞功能,为提高WT1肽疫苗的抗肿瘤效应提供了新思路。

摘要：免疫学教学在硕士研究生教育中对培养学生更高层次的创新思维和实践能力发挥重要的作用。改革现有的免疫学教学模式,以适应新形势下本门课程对硕士研究生培养的需求是当前医学硕士研究生教学亟待解决的问题。我们尝试进行了专业基础知识学习模块、前沿动态的研究性学习模块和实践性学习模块等模块化教学设计,引入翻转课堂、案例讨论教学等多元化手段并举的教学方式,经总结分析,学生们普遍对此种教学模式感到满意。

摘要：虚拟仿真实验是推进高等教育信息化建设的重要手段之一。本文旨在结合本校微生物教学内容构建病毒鸡胚接种医学虚拟仿真实验,弥补因生物安全性不能开展的实验教学。面对面“线下”教学过程中借鉴jigsaw拼图教学法,呈现以“学生为中心”的师生互动模式;同时设计考核细则,完善过程评价,以评促学。探索线上有资源、线下有活动、过程有评价的混合式教学模式,有效地提高学生基础实验技能和学习效果。同时融入课程思政理念,培育医学生职业使命感。

摘要：目的 PCBP1是真核细胞内的一种桥梁蛋白,具有多种生物学功能。本研究以慢病毒质粒构建PCBP1基因小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)表达载体,并筛选其稳定感染的神经细胞系,为进一步通过该载体系统探讨PCBP1的具体功能提供有力手段。方法设计合成针对人及小鼠的PCBP1基因的siRNA茎环结构的正反义序列,退火形成双链,与pLenti-Lox3.7载体的双酶切产物连接,以质粒PCR、酶切和DNA测序等方法,对重组克隆进行鉴定以确认目的片段的插入。之后,采用脂质体转染,将慢病毒载体系统的核心载体pLentiLox3.7和包装质粒共转染293T细胞,收获病毒颗粒,分别感染SH-SY5Y细胞,再通过流式分选获得感染不同病毒颗粒的细胞,提取RNA检测PCBP1 mRNA水平。结果检测结果显示PCBP1 siRNA茎环结构序列正确插入pLentiLox3.7载体,并且成功构建PCBP1基因敲低的神经细胞系。结论 PCBP1基因siRNA表达载体及其基因敲低稳定细胞系的成功构建,为进一步研究该基因在相应细胞中的功能奠定了基础。

摘要：目的　探讨Helicobacterpylori(Hp)相关性胃炎中Hp密度、cagA基因对胃黏膜iNOS表达的影响。 方法　免疫组化技术对iNOS进行定位、定量测定 ,用双因素设计分析。结果　iNOS的表达主要见于浸润在固有层的炎性细胞的胞浆中。Hp密度对iNOS表达有影响 (P <0 .0 0 0 1) ,cagA+ 和cagA-组iNOS表达有差别 (P =0 .0 0 0 4 ) ,且二者对iNOS的表达有交互作用 (P =0 .0 0 4 6 )。在cagA+ 层内 ,各密度组间iNOS的表达有差别 (P <0 .0 0 0 1) ,随着密度的增高 ,iNOS表达水平增高 :3级较 2级组iNOS表达水平明显增高 [(16 1.35± 6 5 .13)vs(119.5 3± 2 8.12 ) ,P =0 .0 0 13],2级较 1级组iNOS表达水平高 ,且有统计学意义 [(119.5 3± 2 8.12 )vs (78.4 0± 2 7.18) ,P =0 .0 2 36 ];而在cagA-层内 ,随着密度的增高 ,各密度组间iNOS的表达水平有增高趋势 ,无统计学差异 [(6 0 .70± 13.0 7)vs(75 .75± 5 .32 )vs (76 .5 0± 19.17) ,P =0 .2 10 8]。在同一密度层内 ,cagA+ 与cagA-组iNOS表达有差异 :1级层内二者差别无显著性 [(78.4 0± 2 7.18)vs (6 0 .70± 13.0 7) ,P =0 .894 8],2级层内cagA+ 组较cagA-组iNOS表达增高 [(119.5 3± 2 8.12 )vs (75 .75± 5 .32 ) ,P =0 .0 0 0 1],3级层内cagA+

摘要：目的建立环介导等温扩增技术(LAMP)检测肺结核患者痰液中的结核分枝杆菌(MTB)基因。方法以结核分枝杆菌高度保守的16S r DNA为靶基因设计3对特异性引物,收集2017年1~12月临床确诊的肺结核患者痰液89份,非肺结核患者痰液20份以及MTB标准菌株(H37RV),建立LAMP方法,并检测其特异性、灵敏性,以MTB培养结果为金标准,用SPSS13.0数据处理并进行统计学分析。结果成功建立LAMP检测痰液中MTB的方法,其特异性为100%,灵敏性为50 copies。在临床患者痰液检测中,特异性和灵敏性分别为85.00%、96.63%,与MTB培养结果比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 LAMP检测MTB特异性和灵敏度高,适用于基层医疗单位MTB的快速检测。