摘要：SARS-CoV-2是一种高致病性且传播迅速的病原体,通过刺突糖蛋白(Spike glycoprotein,S蛋白)识别宿主细胞表面的受体来实现入侵和感染。对S蛋白进行系统的生物信息学分析和原核表达,有助于深入理解S蛋白的功能和阐明该蛋白介导病毒感染的分子机制。本文采用Protparam、Pfam、TMHMM、ExPASy-ProtScale、PSORTⅡ、SignalP、UniProt、NetPhos 3.1、NetNGlyc 1.0、NetOGlyc 4.0和BLAST等生物信息学软件和数据库对S蛋白的理化性质、亚细胞定位、翻译后修饰及相互作用网络等生物学特性进行了系统分析。利用Clustal X2和MEGA7.0软件对该蛋白进行了基于氨基酸序列的同源性分析和系统进化分析。最后,通过分子克隆技术构建重组表达载体pET-22b-S并进行原核表达。结果显示,S蛋白由1273个氨基酸组成,分子量141.2 kD,等电点6.24,有两个卷曲螺旋结构,一个跨膜螺旋区,疏水性较强。S蛋白包含刺突受体结合结构域和S2糖蛋白结构域,主要分布于宿主细胞的内质网膜和细胞膜,含有136个潜在的磷酸化位点和20个可能的糖基化位点。与SARS-CoV-2 S蛋白序列一致性最高的是SARS冠状病毒、SARS冠状病毒WH20和蝙蝠冠状病毒HKU3,均为76%。SARS-CoV-2与SARS冠状病毒和蝙蝠冠状病毒聚为一大支,提示它们可能具有共同的祖先。S蛋白主要在细菌裂解液离心之后的沉淀中表达,这为后续的结构分析和疫苗研发奠定了基础。S蛋白在SARS冠状病毒和蝙蝠冠状病毒之间保守性较高,提示其在病毒入侵过程中具有重要功能。SARS-CoV-2与SARS冠状病毒和蝙蝠冠状病毒可能具有共同的祖先。本研究为SARS-CoV-2 S蛋白的表达纯化、结构与功能研究提供了重要的数据基础,有助于全面揭示S蛋白的生物学功能,同时为设计和筛选靶向S蛋白的新型抗病毒药物提供了科学依据。

摘要：目的构建大肠埃希菌严谨反应蛋白编码基因relA的原核表达载体,通过生物信息学方法分析RelA蛋白的结构和功能,为阐明RelA介导细菌严谨反应的分子机制奠定基础。方法利用分子克隆技术得到relA的CDS序列,利用基因工程手段将CDS序列连接到原核表达载体pET-22b中,通过抗性基因筛选和双向测序验证,得到重组表达载体pET-22b-relA。采用Protparam、TMHMM、ProtScale ExPASy、PSORTⅡ、SignalP、InterPro、UniProt、NetPhos 3.1、NetNGlyc 1.0、NetOGlyc 4.0、Blast等生物信息学软件和数据库对大肠埃希菌RelA蛋白的理化性质、功能位点、翻译后修饰、三维结构及蛋白相互作用网络等生物学特性进行系统分析;利用Clustal X2和MEGA7.0软件对RelA蛋白进行基于氨基酸序列的同源性分析和系统进化分析。结果成功构建relA基因的原核表达载体pET-22b-relA。生物信息学分析RelA蛋白由744个氨基酸组成,相对分子质量84×103 Da,等电点6.29,有两个卷曲螺旋结构,无跨膜螺旋区,为亲水性蛋白。RelA的N-末端结构域包括PH和SYNTH,C-末端结构域包括TGS、α螺旋区、CC及ACT亚结构域;该蛋白主要在细胞质发挥功能,含有10个NTP结合位点,2个金属离子结合位点,16个合成酶活性位点,53个潜在的磷酸化位点和8个可能的糖基化位点;RelA在细菌之间高度保守,与大肠埃希菌RelA亲缘关系最近的是福氏志贺菌,其次是柯氏柠檬酸杆菌。结论RelA在细菌之间高度保守,提示其在细胞生命活动中具有重要功能,RelA通过与核糖体和tRNA的相互作用介导细菌的严谨反应,因此RelA是一种重要的翻译因子。本研究为全面揭示RelA分子的生物学功能,设计和筛选靶向RelA的新型抗菌药物提供了线索和依据。

摘要：当pH=5.2时茜素红与过量的Al^(3+)反应生成发射橙黄色荧光的络合物,该络合物的最佳激发和发射波长分别为469 nm和585 nm,Cu^(2+)能够使茜素红-铝体系荧光猝灭,且荧光猝灭程度与Cu^(2+)的浓度在一定范围内呈线性关系,据此建立了一种灵敏的“开关式”测定Cu^(2+)的方法.探究了茜素红-铝-铜体系的最佳用量比、反应温度、反应时间、pH、缓冲溶液等因素对反应体系的影响.结果表明:测定Cu^(2+)的工作曲线为ΔF=19.7c+101.2,R^(2)=0.9995,线性为0.2~30μmol/L,检出限0.022μmol/L.该方法准确度高,灵敏度高,选择性好,可用于水中微量铜的检测.

摘要：目的:通过RNA干扰技术沉默宫颈癌Hela细胞中的Survivin基因,观察干扰后核酸表达及细胞凋亡情况发生的变化,为进行宫颈癌的基因治疗提供理论依据。方法:设定空白组、阴性对照组及实验组,空白组Hela细胞未进行基因干扰,阴性对照组为非特异序列干扰,实验组为针对Survivin基因设计的干扰RNA(siRNA)干扰,每组均设三个平行标本。转染后48h收集细胞,RT-PCR技术检测Survivin mRNA表达,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:转染siRNA 48h后,Hela细胞中Survivin mRNA拷贝数明显减少,实验组mRNA表达量为空白组的23.4%,存在显著性差别(P<0.01);为阴性对照组的23.3%,存在显著性差别(P<0.01)。流式细胞术检测结果表明,实验组Hela细胞凋亡率是空白组的3.08倍(P<0.01);是阴性对照组的2.69倍(P<0.01),均有显著性差异。结论:通过RNA干扰沉默宫颈癌Hela细胞Survivin基因能够促进细胞凋亡的发生,Survivin可能成为基因治疗宫颈癌的理想靶基因。

摘要：以糖类物质旋光度的测定为例,探索了翻转教学在医学院校基础有机化学实验教学中的应用。包括设计任务书、制作教学视频及文档、查找相关文献、课堂活动、教学总结及反思等多个环节。实践表明,翻转课堂在实验教学中的应用,改善了课前预习流于形式的状况,培养了学生主动学习的能力,激发了医学专业学生对基础有机化学实验的学习兴趣。

摘要：目的:对SARS-CoV-2核衣壳(N)蛋白进行系统生物信息学分析和原核表达,阐明其功能和病毒RNA复制机制。方法:采用UniProt、NetPhos 3.1、IEDB和Blast等生物信息学软件对N蛋白的理化性质、蛋白互作网络、翻译后修饰、同源性及系统进化关系等生物学特性进行系统分析。构建原核表达质粒pET-22b-N并表达蛋白。结果:N蛋白是由419个氨基酸组成的碱性蛋白,分子量为45.62 kD,等电点为10.07,其N端有1个RNA结合结构域,C端有1个二聚体界面,有57个可能的磷酸化修饰和25个潜在糖基化修饰,15个T细胞抗原表位和11个线性B细胞抗原表位,无信号肽和跨膜螺旋,是一种亲水性蛋白。N蛋白中无规则卷曲占比最高(54.42%),其次为α-螺旋(22.20%)。与N蛋白序列一致性最高的是BtRs-β-冠状病毒/HuB2013和蝙蝠冠状病毒Rp/Shaanxi2011,进化分析显示SARS-CoV-2与蝙蝠非典型冠状病毒YNLF_31C聚为一支。原核表达后发现,细菌裂解液离心后的沉淀中有大量N蛋白表达,为后续蛋白纯化和结构分析提供了依据。结论:N蛋白在SARS冠状病毒和蝙蝠冠状病毒间高度保守,为SARS-CoV-2 N蛋白结构与功能研究提供了基础,为靶向N蛋白的抗病毒药物设计提供了依据。

摘要：SMU1是一个与细胞基因组复制和RNA剪切过程相关的新基因。该研究为进一步调查SMU1对细胞增殖及DNA双链断裂(DNA double-strand breaks,DNA DSBs)损伤应答的影响,设计合成针对SMU1基因的小分子siRNA,并与对照siRNA(scramble)分别转染HEK 293T或U2OS细胞。通过免疫印迹(Western blot)检测证实,siSMU1转染细胞中SMU1的表达显著下降,采用台盼蓝染色细胞计数检测显示,SMU1表达下调显著降低细胞增殖能力。免疫荧光和免疫印迹法检测结果表明,SMU1表达下调显著增加细胞内源性DSBs损伤(γH2AX foci和蛋白水平均升高);而进一步用X-ray处理细胞造成外源性DSBs损伤后,SMU1沉默细胞显示出延长的DSBs损伤修复动力学(减缓的γH2AX foci和蛋白水平消退)。以上结果提示,SMU1在细胞DSBs损伤修复反应中扮演重要角色,积极参与细胞基因组完整性的维持。

摘要：目的在同一体系中对布鲁氏菌6个种进行鉴定。方法根据布鲁氏菌6个种的差异基因设计5对引物,应用多重聚合酶链反应(PCR)方法对布鲁氏菌进行鉴定。先用标准菌株建立方法,优化实验条件,然后扩增地方株进行验证。结果除绵羊附睾种外多重引物PCR方法能将其余5个布鲁氏菌种全部鉴定出来。结论这种方法快速准确,且对实验操作人员安全,是布鲁氏菌鉴定的辅助方法。

摘要：课程思政建设是目前高校教育改革的重要方向。医学免疫学作为医学院校的医学基础课程,也需对课程思政建设进行相应实践与探索。本团队在免疫学“1233”课程理念下进行了3个“八”的课程思政设计,并在山西医科大学汾阳学院临床与影像两个专业两届本科学生践行两年,积累了一定经验,为医学免疫学课程思政教学改革提供了参考。

摘要：目的:探讨厚朴酚与吉非替尼协同影响非小细胞肺癌A549细胞的作用。方法:以浓度为6.25~500μmol/L厚朴酚、0.625~100μmol/L吉非替尼分别处理A549细胞24 h,CCK-8实验检测细胞活力(n=3),选24 h及100μmol/L厚朴酚与5μmol/L吉非替尼作后续处理(n=3);采用对照组、厚朴酚组、吉非替尼组和厚朴酚+吉非替尼组的析因分析设计;克隆形成检测细胞增殖;蛋白印迹测蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡及分选CD44^(+)和CD133^(+)细胞。结果:与对照组比,厚朴酚和吉非替尼组的克隆形成率显著降低(P<0.05);凋亡率显著升高(P<0.05);CD44^(+)和CD133^(+)细胞数量显著减少(P<0.05);Ki67和PCNA及干细胞标记蛋白SOX2和OCT4表达显著下调(P<0.05);Bax/Bcl-2表达比例显著上调(P<0.05)。与厚朴酚组或吉非替尼组比较,厚朴酚+吉非替尼组进一步促进了上述改变(P<0.05),且凋亡率、Bax/Bcl-2、SOX2和OCT4等指标都存在厚朴酚和吉非替尼的交互作用(P<0.05)。结论:厚朴酚与吉非替尼促进A549细胞凋亡和抑制其干细胞样特性,且联合用药效果优于单一给药。二者对A549细胞的抑癌作用有交互影响。