摘要：背景：新生神经元可诱导产生长时程增强，NMDA受体亚基NR2B的激活在成熟神经元诱导的长时程增强中有重要作用，但其对由新生神经元诱导的长时程增强的影响尚未见报道。目的：观察NR2B受体拮抗剂R025-6981在大鼠齿状回新生神经元诱导的长时程增强中的作用。设计、时间及地点：脑片电生理实验，于2007—02／06在山西医科大学神经生物实验室完成。材料：3月龄雄性Wistar大鼠26只，由山西医科大学实验动物中心提供。方法：大鼠麻醉后断头取脑，分离海马，制备400μmol／L脑片。采用细胞外微电极记录技术，于海马齿状回分子层内侧1，3处采用双极钨电极进行低频刺激，获得稳定的刺激曲线后，在高频强直刺激下诱导长时程增强。长时程增强的诱导程序为每串刺激频率100Hz，持续500ms，间隔20s，共4串刺激，记录到兴奋性突触后电位〉1mV以上的脑片用于下述两项实验。①NR2B拮抗剂Ro25—6981阻断人工脑脊液诱导的长时程增强：脑片分为2组，人工脑脊液组持续通以含有95％O2和5％CO2的人工脑脊液，人工脑脊液＋Ro25．6981组在强直刺激前应用3μmol／LNR2B拮抗剂Ro25-6981作用10min，后续步骤同上组。②NR2B拮抗剂Ro25—6981抑制荷包牡丹碱诱导的长时程增强：脑片分为2组，荷包牡丹碱组在强直刺激前给予10μmol／L荷包牡丹碱灌流10min，荷包牡丹碱＋Ro25—6981组在强直刺激前同时给予3μmol／L Ro25．6981和10μmol／L荷包牡丹碱灌流10min。主要观察指标：长时程增强记录结果。结果：①强直刺激后50-60min，人工脑脊液组长时程增强（107．85±1．34）％，人工脑脊液＋Ro25-6981组长时程增强（100．75±2．75）％，两组比较差异有显著性意义（P〈0．05）。②强直刺激后50-60min，荷包牡丹碱组长时程增强（164．67±2．40）％，荷包牡丹碱＋Ro25-6981组长时程增强（147．56±6．63）％，两组比较差异有显著性意义（P〈0．05）。结论：在大鼠海马齿状回区域，NR2B受体拮抗剂Ro25-6981阻断了人工脑脊液诱导的长时程增强，并部分抑制了荷包牡丹碱诱导的长时程增强，提示NR2B受体拮抗剂可以抑制新生神经元诱导的长时程增强。

摘要：神经管畸形(neural tube defects,NTDs)是一种由细胞增殖凋亡紊乱引起的先天缺陷性疾病。本室前期利用RNA-Seq技术,发现小鼠神经管畸形胚胎脑组织中DNA损伤诱导转录因子-4(DNA damage-inducible transcript 4,Ddit4)表达水平增加,但其在神经管畸形中的作用尚不清楚。本文拟探索Ddit4过表达对海马神经元HT-22细胞增殖和凋亡的影响及相关机制,从而为后续研究Ddit4在小鼠神经管畸形中的作用奠定基础。本研究首先根据小鼠Ddit4序列构建真核表达载体pEX-3-Ddit4,限制性酶切分析和测序结果表明pEX-3-Ddit4构建成功。qRT-PCR和Western印迹检测显示转染pEX-3-Ddit4后,HT-22细胞中DDIT4的表达水平明显增加(P<0.01)。CCK-8和Western印迹结果显示,Ddit4过表达导致HT-22细胞增殖下降(P<0.01)。流式细胞仪结果显示,转染pEX-3-Ddit4后,G0/G1期细胞比例增加、S期比例下降(P<0.01),细胞凋亡率增加(P<0.05)。Western印迹检测发现,转染pEX-3-Ddit4能够显著上调切割胱天蛋白酶3(cleaved caspase3)水平(P<0.05),表明Ddit4过表达促进HT-22细胞凋亡。细胞免疫荧光及Western印迹结果显示,过表达Ddit4显著降低细胞β-联蛋白(β-catenin)、T细胞因子4、细胞周期蛋白D1和C-myc的表达水平(P<0.05),核内β-联蛋白减少,提示Ddit4过表达抑制了Wnt/β-catenin信号通路。过表达Ddit4的同时加入Wnt/β-catenin信号通路激动剂LiCl处理细胞可逆转上述现象,表明Ddit4过表达可能通过Wnt/β-catenin信号通路对HT-22细胞发挥抗增殖和促凋亡作用。