摘要：目的通过研究各类宫颈病变中ETS1的表达,探讨ETS1与宫颈癌发生、发展的相关性。方法①采用总RNA的提取,设计合成引物进行反转录聚合酶链反应(RT-PCR),选用已知的干扰磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)作为内参照,对不同宫颈组织:健康宫颈组织、宫颈上皮内瘤样病变(CIN)Ⅲ、未发生淋巴结转移的宫颈癌、发生淋巴结转移的宫颈癌,研究ETS1的表达。②进行核蛋白的提取,应用蛋白质印迹法(Western-blot-ting),分析蛋白水平上ETS1在不同宫颈组织中的表达。结果RT-PCR结果显示:ETS1在健康宫颈组织中表达较低,随着向CINⅢ、宫颈癌演变,ETS1的表达量逐渐增加(P<0.05)。在发生淋巴结转移的宫颈癌中表达比未发生淋巴结转移的宫颈癌中的表达高(P<0.01)。Western-blotting结果显示与mRNA水平表达一致。结论ETS1与宫颈癌发生、发展有相关性,而且与肿瘤浸润和转移有密切的关系。

摘要：目的:通过构建针对STAT3的siRNA真核表达载体,研究STAT3对卵巢癌SKOV3细胞侵袭转移能力的影响。方法:使用软件Primer Premier 5设计siRNA靶序列,在合成修饰靶序列之后,构建siRNA-STAT3-脂质体复合物,并转染卵巢癌SKOV3细胞;通过Western blot检测细胞STAT3的表达,通过Transwell小室及对卵巢癌SKOV3细胞侵袭相关蛋白MMP-2的检测,探讨siRNA-STAT3对卵巢癌细胞侵袭力的影响。结果:构建干扰STAT3的siRNA真核表达载体转染SKOV3细胞可显著抑制细胞中STAT3的蛋白表达;与SKOV3细胞对照组和SKOV3细胞阴性对照组相比,SKOV3细胞siRNA-STAT3组中细胞侵袭转移能力明显下降。结论:构建干扰STAT3的siRNA真核表达载体可有效抑制STAT3的表达及卵巢癌SKOV3细胞的侵袭转移能力。

摘要：目的:克隆血管内皮生长因子C(VascularEndothelialGrowthFactorC)功能片段的cDNA,构建人VEGF-C基因的真核表达载体,以便进一步研究VEGF-C在宫颈癌中表达的意义及在淋巴管生长及转移中的作用。方法:根据人VEGF-CcDNA序列,设计合成二对特异性引物,第一对5'端含有EcoRⅠ及第二对3'端含有XhoⅠ酶切位点。运用RT-PCR法克隆人MDA-MB231中的VEGF-CcDNA部分编码序列(CDS);经双酶切后将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),重组质粒在处于感受态的大肠杆菌DH5α中扩增,纯化。通过PCR和双酶切鉴定阳性重组子及进行基因序列的测定。结果:用RT-PCR克隆到VEGF-CcDNA部分CDS;PCR和双酶切鉴定阳性重组子,显示有人VEGF-CcDNA编码序列,基因序列测定显示重组质粒上插入的人VEGF-C序列正确。结论:从富含VEGF-C的人MDA-MB231细胞系中克隆得到的VEGF-C基因功能片段cDNA,成功构建了人真核表达载体pcDNA3.1(+)/VEGF-C。