摘要：目的构建雌激素受体α配体结合域(ERα-LBD)表达载体,优化表达条件得到可溶性ERα-LBD蛋白。方法在Addgene网站检索关键词ESR(雌激素受体,estrogen receptor),选择符合条件的质粒载体pcDNA-HA-ER WT(Addgene plasmid # 49498;http://***/addgene:49498;RRID:Addgene49498),设计引物并扩增得到目的片段ERα-LBD,分别构建蛋白表达载体pET-28a-LBD和pGEX-4T1-LBD,改变诱导温度、异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)浓度以及诱导时间对表达条件优化。待细菌裂解并提取蛋白后进行凝胶电泳,可在细菌上清的泳道中观察到明显的紫色蛋白表达条带,即为可溶性ERα-LBD蛋白。结果 pET-28a-LBD重组质粒未能表达重组蛋白ERα-LBD,重组质粒pGEX-4T1-LBD在Rosetta和BL21(DE3)感受态中以1 mmol/L IPTG诱导仅能得到包涵体;以0.2 mmol/L IPTG 16 ℃过夜诱导培养,则可得到可溶性ERα-LBD蛋白。结论成功构建ERα-LBD表达载体并优化诱导表达条件,获得可溶性ERα-LBD蛋白。

摘要：目的比较5-氟尿嘧啶（5-Fu）或卡培他滨联合奥沙利铂治疗转移性结直肠癌的临床疗效和安全性。方法以转移性结直肠癌、奥沙利铂、5-Fu、卡培他滨为检索词，查阅2011年6月前发表的有关5-Fu或卡培他滨联合奥沙利铂治疗转移性结直肠癌的随机对照研究。由2名作者各自独立对入选文献中试验设计、研究对象的特征、研究结果等内容按照预先制订的数据表进行摘录。采用RevMan4．2软件进行统计分析。结果按照筛选标准，共有6篇文献入选，全部研究共计2189例转移性结直肠癌患者。两组患者基本特征均衡可比。临床疗效方面，有效率合并相对危险度（RR）为0．92[95％CI（0．82，1．02），P=0．121，中位无疾病进展生存时间、中位生存时间合并加权均数差（WMD）分别为-0．19[95％CI（-0．73，0．35），P=0．49]，-1．91[95％CI（-2．53，0．16），P：0．08]，综合分析结果两组间均无优劣。Ⅲ～Ⅳ级毒副作用的比较中，中性粒细胞减少的综合分析显示卡培他滨组的发生率显著低于5-Fu组，合并RR为0．24[95％a（0．11，0．55），P=0．0007]，而手足症状发生率高于5-Fu组，合并RR为2．83[95％a（1．66，4．82），19=0．0001]。结论5-Fu或卡培他滨联合奥沙利铂治疗转移性结直肠癌疗效无优劣。在Ⅲ～Ⅳ级毒性方面中性粒细胞减少在5-Fu组更易发生，卡培他滨组主要以手足症状为主。

摘要：目的克隆Nucleophosmin(NPM)的编码序列,构建含Nucleophosmin基因的真核细胞表达载体并在肝癌细胞系HepG2中表达,为进一步研究该基因在肝癌多药耐药中的作用奠定基础。方法根据已发表的Nucleophosmin基因的核苷酸序列设计合成一对引物,以人乳腺癌组织抽提的RNA为模板进行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR),扩增产物用BamHI和XhoI双酶酶切后定向克隆到真核细胞表达载体pEGFP-N1中,用限制性内切酶酶切重组质粒pEGFP/NPM和DNA序列测定进行鉴定。用脂质体法将pEGFP/NPM导入肝癌细胞系HepG2中,G418选择培养,经免疫组织化学法和RT-PCR鉴定其表达。结果 RT-PCR扩增出长894bp的特异性片段,经克隆至pEGFP-N1后酶切鉴定证实,并测序表明序列与GenBank报道完全一致。pEGFP/NPM在HepG2细胞中有稳定表达。结论成功克隆了NPM的编码序列,构建了其真核细胞表达载体pEGFP/NPM/1,有助于对NPM基因在肝癌多药耐药中的机制做进一步研究。