摘要：目的建立一种快速、特异的可同时检测血中多种病毒性肝炎相关病毒的多重PCR方法。方法参照各病毒特异性核酸序列,按多重PCR引物设计的特殊要求设计引物,以核酸测序确证扩增产物,用标准病毒株及临床阳性血清样本DNA、RNA为模板优化PCR反应体系和反应条件,建立病毒性肝炎相关病毒多重PCR检测方法。应用建立的多重检测方法对120例ALT升高的血清标本进行多重检测,并将检测结果与单一PCR检测结果进行比较。结果采用多重PCR技术可同时对EBV、TTV、HBV、HSV 4种DNA病毒进行扩增;采用多重RT-PCR技术可同时对Cox-V、HEV、HCV 3种RNA病毒进行扩增。各病原体单一及多重扩增条带均清晰、均一,无非特异性扩增条带,片段长度与理论值一致;核酸测序证实各扩增产物属各病原体特异性基因片段。临床标本检测多重感染率为19.2%,与单一检测结果一致。结论建立的多重PCR检测方法稳定可靠,敏感度、特异度好,适用于病毒性肝炎相关病毒的实验室诊断与临床筛查。

摘要：目的为了对广东地区流行的人类博卡病毒生物学特性有更加全面的认识,克隆得到人类博卡病毒全基因,并与国际流行株进行比对。方法采用半巢式PCR分子生物学技术直接从临床呼吸道标本筛查确认人类博卡病毒感染阳性标本中,结合博卡病毒的全基因的生物信息学特点,设计6条特异性引物可配对成5对,通过3轮半巢式PCR方法特异性扩增人类博卡病毒的全基因序列。再将其定向连接到克隆载体中后进行测序,然后向GenBank提交克隆的人类博卡病毒的全基因序列,最后并对人类博卡病毒全基因的生物信息学分析。结果成功克隆并向GenBank提交了3株人类博卡病毒全基因序列,登录号分别为GQ926981、GQ926982和GQ926983。3株人类博卡病毒全基因序列与GenBank里的序列比对,高度同源性达98%以上,均属于人类博卡病毒HBoV1型。结论广东地区流行的人类博卡病毒基因与国际流行株基因比对无大的变异,可为人类博卡病毒相关蛋白的表达工作奠定基础。

摘要：目的从临床标本中扩增人偏肺病毒（hMPV）基因片段进行亚克隆，为进一步全面深入地研究人偏肺病毒奠定基础。方法根据GenBank中已知的hMPV全基因序列设计引物。收集呼吸道感染住院患儿鼻咽抽吸物697例，提取病毒核酸，运用长片段RT-PCR技术扩增目的片段，切割舍目的条带的凝胶进行纯化，并将目的片段连接到PJET1．2／blunt克隆载体，转化感受态细胞TOP10，经含氨苄青霉素的抗生素平板筛选，得到阳性克隆，提取质粒，最后对重组质粒进行PCR鉴定和测序鉴定。结果随机选取5例所获的阳性条带经PCR和测序鉴定，证实确为hMPV基因片段。结论成功构建了hMPV基因组亚克隆，可用于后续的实验研究。

摘要：目的构建人偏肺病毒(hMPV)N蛋白(hMPV-N蛋白)的原核表达载体,研究其表达效果,为临床抗体检测及预防提供基础资料。方法根据hMPV-N基因的全序列设计引物,扩增目的基因片段,连接质粒载体RSET-A,转化大肠埃希菌BL21,IPTG诱导以his为标签的目的蛋白表达,并用人血清进行检测。结果重组质粒转化诱导后,出现了与预期分子量相符的蛋白条带;采用Western blot方法,检测了102份呼吸道感染住院患儿血清标本中的抗hMPV-N蛋白IgG抗体,阳性率为53.9%。结论成功获得了hMPV-N蛋白的表达,为临床血清学检测奠定基础。