摘要：目的利用CRISPR/Cas9技术在肺癌细胞系A549和NCI-H3255中敲除凋亡诱导因子1(AIFM1)基因,并通过筛选,获得稳定的细胞株。方法利用在线数据库GEPIA、CPTAC、Prognosis和SangerBox分析AIF在肺癌的表达和功能。以AIFM1基因为靶点,设计向导RNA(sgRNA)并利用CRISPR RGEN Tools分析其脱靶效率,CRISPR/Cas9技术敲除肺癌细胞的AIFM1基因和倍比稀释法筛选稳定的单克隆细胞株。采用Western blot检测细胞AIF表达水平。结果TCGA和GTEx数据集结果显示,AIF蛋白在肺癌组织阳性表达率比正常组织高,差异有统计学意义(P1,P<0.05);3条sgRNA的序列脱靶效率均为0;与野生型肺癌细胞株相比,用CRISPR/Cas9基因编辑技术修饰的肺癌细胞未检测到表达AIF蛋白,且筛选的杀死A549和NCI-H3255的嘌呤霉素浓度分别为0.60~0.80μg/mL和0.60μg/mL。结论AIF在肺癌中表达上调。利用CRISPR/Cas9技术成功建立AIFM1基因敲除的肺癌细胞株,这将为研究AIF在肺癌发生发展机制提供合适的研究材料。