摘要：根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)变异野毒JXA1的基因变异序列和疫苗株JXA1-R的基因遗传标志设计合成了2对特异性引物,结合快速RNA抽提试剂和一步法RT-PCR,建立了JXA1变异野毒与JXA1-R疫苗毒的快速鉴别体系,其目的片段大小分别为4002、90 bp,该方法对猪瘟病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病病毒的PCR检测结果均为阴性;对JXA1变异野毒与JXA1-R疫苗毒RNA的最低检测量分别为103、104拷贝/μL。该方法敏感、特异,适用于临床样品的检测。

摘要：根据GenBank中登录的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)毒株序列,选择5’NTR保守区域设计1对特异性引物和1条Taqman探针,通过矩阵法筛选引物探针的最佳浓度,建立了检测BVDV的荧光RT-PCR方法。结果显示,用1.5μL上下游引物混合液(10μmol/L)和0.5μL探针溶液(10μmol/L)对BVDV进行检测,可获得较小Ct值、较高吸光值,并可降低检测成本。对该方法进行特异性、敏感性和重复性试验,结果表明,该方法敏感性高、特异性强、重复性好。将该方法应用在疫苗生产中,可快速准确地筛选出合格的原辅材料和半成品,为生产提供及时准确可靠的数据。

摘要：设计不同的免疫程序,用鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活疫苗(La Sota株+M41株+SS/94株)免疫黄羽肉鸡,通过对ND、IB、H9抗体滴度监测,探讨ND、IB、H9抗体消长规律及鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活疫苗(La Sota株+M41株+SS/94株)的免疫程序。试验结果表明,用鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活疫苗(La Sota株+M41株+SS/94株)免疫黄羽肉鸡后,其诱导产生的ND、IB、H9抗体的消长规律基本同步;仅于10日龄免疫一次三联灭活苗,其抗体水平较低,于20、40日龄二免、三免或10日龄先用鸡新城疫病毒(La Sota株)、禽流感病毒(H9亚型,SS/94株)二联灭活疫苗作基础免疫,20或40日龄再用三联灭活苗作加强免疫,则上述3种抗体均快速上升,且维持时间长。根据试验结果,建议按照正常免疫程序作基础免疫的健康肉鸡,饲养期较短的可于20日龄左右用鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活疫苗(La Sota株+M41株+SS/94株)作加强免疫,0.3mL/只;饲养期较长的则于40日龄左右用鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活疫苗(La Sota株+M41株+SS/94株)作加强免疫,0.5mL/只。

摘要：试验旨在通过响应面法对复合酸化剂配方进行优化,筛选出最佳酸化剂配方。试验采用Response Surface中的Box-Behnken设计方法,以85%磷酸、一水柠檬酸、80%乳酸和磷酸氢二钠为复合酸化剂的主要原料组成,通过研究29个配方2%水溶液的缓冲力、系酸力改变量和10%水溶液的抑大肠杆菌菌圈直径,建立回归方程,并通过响应面分析法得到最优复合酸化剂配方。结果表明:1当以2%水溶液缓冲力为考察指标时,最佳配方为85%磷酸1.24%、一水柠檬酸40.00%、80%乳酸30.00%和磷酸氢二钠10.00%,此时2%水溶液缓冲能力最大,为4.78;2当以2%水溶液的系酸力改变量为考察指标时,最佳配方为85%磷酸5.00%、一水柠檬酸40.00%、80%乳酸30.00%和磷酸氢二钠1.02%,此时2%水溶液对饲料的系酸力改变量最大,为13.08;3当综合考虑2%水溶液缓冲能力和系酸力改变量时,最佳配方为85%磷酸5.00%、一水柠檬酸40.00%、80%乳酸30.00%和磷酸氢二钠2.28%。由此可见,考察指标不同导致复合酸化剂配方不同,通过响应面试验设计和分析方法可快速得到不同需求的复合酸化剂最优配方。

摘要：本研究以猪圆环病毒2型(PCV2)核衣壳蛋白ORF2基因为目的基因,设计合成特异性引物和探针。PCR扩增得到目的基因,并克隆到pMD18-T载体,筛选得到标准阳性质粒。通过对荧光定量PCR反应条件的优化,建立了PCV2的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。试验结果表明,该方法特异性强,对猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)等猪常见病原的检测结果均为阴性;与普通PCR方法相比,其敏感性高出100倍,可达100拷贝/μL;对临床样品的检测证明,该方法可有效检测出淋巴结、肺脏等组织中的PCV2。

摘要：利用ERIC序列设计1对引物,分别对PCR反应的模板量、引物浓度、DNA聚合酶用量、dNTPs浓度、退火温度等影响ERIC-PCR扩增的因素进行了探索和优化,以选择最佳的PCR反应体系及反应条件。结果显示,确定的最适引物浓度为0.166～0.333μmol/L,DNA聚合酶的最适浓度为1.0U/μL,模板最适用量为8ng/μL,dNTPs为200μmol/L。利用所建立的副猪嗜血杆菌ERIC-PCR分子生物学分型技术,对临床分离菌株的指纹图谱进行了分析,13个分离菌株的ERIC-PCR指纹图谱与15个标准血清型指纹图谱相比较,可分辨出6种血清型,并与琼脂扩散试验分型方法的结果一致。证实已建立的副猪嗜血杆菌ERIC-PCR分型方法重复性好、可比性高。

摘要：为建立一种快速、简便、准确的方法以诊断和检测H1亚型猪流感病毒(swine influenza virus,SIV),试验根据H1亚型SIV血凝素(hemagglutinin,HA)基因保守序列,分别设计并合成1对特异性引物和1条TaqMan MGB探针,建立检测H1亚型SIV的一步法实时荧光定量RT-PCR技术。结果显示,该方法的敏感性可达102拷贝/μL,除H1亚型SIV外,对H3N2亚型SIV、H9N1亚型SIV、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒的检测均为阴性,且应用该方法对疑似猪流感样品进行检测,其结果与SPF鸡胚分离病毒方法结果的符合率为94%。本试验结果表明该方法特异性强、重复性好,有望成为一种特异、敏感、快速、定量检测H1亚型SIV的方法。

摘要：为了研究含有猪圆环病毒2型(porcinecircovirus type 2,PCV2)的重组腺病毒作为基因工程疫苗的潜在应用价值,本试验根据GenBank中猪圆环病毒2型基因序列,设计了1对引物,用于猪圆环病毒2型ORF2基因的扩增。将目的基因T/A克隆后,亚克隆至腺病毒转移载体pShuttle-CMV,构建重组穿梭质粒pShuttle-CMV-ORF2。经PCR方法和限制性内切酶酶切法及测序证明该基因已成功连接后,重组腺病毒转移载体经PmeⅠ酶切线性化,在BJ5183细菌中与腺病毒骨架载体pAdEasy-1同源重组获得重组腺病毒质粒pAd-CMV-ORF2。经PCR方法和PacⅠ酶切方法及测序鉴定表明该重组腺病毒载体已构建成功。PacⅠ酶切线性化pAd-CMV-ORF2,脂质体法转染AD293细胞进行病毒的包装和扩增。PCR及RT-PCR、IFA、Westernblotting检测目的基因及其表达。结果表明,本试验成功构建了重组腺病毒pAd-CMV-ORF2。3次噬斑试验纯化重组腺病毒,测得其TCID50为10-8.75/0.1mL。将重组腺病毒接种SPF级雌性BALB/c小鼠,用ELISA抗体检测试剂盒检测特异性抗体水平。小鼠免疫试验测得其特异性抗体水平较高,为PCV2重组腺病毒基因工程疫苗的进一步研究打下基础。

摘要：以伪狂犬病毒为载体表达其他病原体抗原蛋白是伪狂犬病疫苗研究的一个重要方向。根据已发表的伪狂犬病毒(PRV)Ra株TK基因序列设计2对引物,用PCR方法得到同源左右臂,克隆入PUC19载体中。利用平末端连接的方法将绿色荧光蛋白(EGFP)的基因表达盒插入到缺失位点,并在下游引入1个多克隆位点,构建缺失通用转移载体PUC19TK-EGFP。用脂质体转染试剂盒将PUC19TK-EGFP和PRV-Ra株的基因组共转染BHK细胞,以EGFP为标记基因,用噬斑法得到纯化的重组病毒,命名为TK/EGFP,为研制以伪狂犬病毒为载体的二价或多价基因工程疫苗奠定了物质基础。

摘要：本试验旨在评估饲用酸化剂对1-63日龄黄羽肉鸡生长性能、肠道损伤和盲肠微生物菌群变化的影响,同时探讨壳寡糖对饲用酸化剂的增效作用。试验采用单因素完全随机区组设计,设对照组（Con.）、饲用酸化剂（Trt.1）和饲用酸化剂＋壳寡糖（Trt.2）共3个处理。每个处理5个重复,每个重复50羽。饲养周期为63天。试验结果表明,从零日龄开始持续在黄羽肉鸡日粮中添加饲用酸化剂、饲用酸化剂＋壳寡糖后,对1-21d和22-42d阶段黄羽肉鸡生长性能的影响未达显著（P〉0.05）水平;但在43-63d阶段时,与对照组相比,添加饲用酸化剂、饲用酸化剂＋壳寡糖组的耗料增重比分别降低0.11和0.14,具有极大的生产意义;且饲用酸化剂添加组盲肠大肠杆菌/乳酸杆菌值显著（P〉0.05）低于对照组,饲用酸化剂＋壳寡糖添加组盲肠大肠杆菌/乳酸杆菌值显著（P〉0.05）低于对照组和饲用酸化剂添加组。说明饲用酸化剂可通过维持肠道健康,促进养分消化吸收,从而提高饲料利用率;而壳寡糖在平衡肠道菌群、维持肠道健康方面对饲用酸化剂有增效作用。