摘要：哈维弧菌(Vibrio harveyi)是海水鱼养殖中一种重要的病原菌。该研究根据已知rbs B(核糖体结合蛋白)基因序列设计引物,扩增得到哈维弧菌354(*** 354)rbs B基因的全序列(Gen Bank序列号MF797015),预测该序列可编码292个氨基酸,分子量为30.7 k D,理论等电点为5.05,亲水性系数为0.043,为疏水性蛋白。根据Rbs B氨基酸构建的系统进化树可以发现哈维弧菌Rbs B蛋白和欧文弧菌(*** CAIM 1854)的关系最近。构建了p GEX-4t-1-rbs B重组质粒并转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,得到的重组蛋白的相对分子量约59 k D,在37℃、IPTG浓度为0.6 mmol·L–1诱导8 h时表达量最高。

摘要：采用纸片扩散法(Kirby-Bauer法)研究不同来源的54株水产细菌对10种抗生素的敏感性,筛选获得耐药菌株并研究其耐药基因。根据GenBank中注册的耐药基因序列,针对不同抗生素的耐药基因设计相应的引物,对耐药基因进行扩增,检测耐药菌株中耐药基因的分布。结果由54个受试菌株中检测出42个耐药株,耐药率为77.8%。其中37株对3种以上抗生素产生耐药,多重耐药率为68.5%。以耐药菌株质粒为模板,扩增磺胺类耐药基因sul2、氯霉素耐药基因cat1、cat2、cat3、cat4、卡那霉素耐药基因aadB、喹诺酮耐药基因gyrA,结果显示:sul2基因阳性9株,3株氯霉素cat2阳性,4株氯霉素cat3阳性,1株氯霉素cat4阳性,3株aadB阳性。质粒上耐药基因的检出率分别为50%、27%、36%、9%、60%。

摘要：根据克隆得到的中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)CYP4基因开放阅读框设计引物,构建了中国对虾CYP4基因原核表达载体p28a-CYP4,并对重组菌株Rosetta/28a-CYP4的原核表达条件进行了优化。结果表明:p28a-CYP4转化Rosetta后可实现CYP4基因的原核表达,SDS-PAGE分析显示其在56.0 kDa处有显著诱导条带;通过对诱导温度、IPTG浓度、诱导时机(OD600)及诱导时间的优化表明,重组菌株Rosetta/p28a-CYP4的最佳诱导温度为37℃,最佳IPTG浓度为1.2 mmol/L,最佳诱导时机及诱导时间分别为0.59和6 h。

摘要：采用混料设计(Mixture)对复合菌比例进行优化,测定了3株芽孢杆菌(Bacillus spp.)和1株溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)不同比例搭配对细菌生长的光密度(OD)、氨氮和亚硝氮去除率的影响,建立了各搭配比例与试验指标之间的回归方程。使用Design Expert 8.0的优化功能(Optimization)对满足所有期望的响应值进行优化,得到复合菌的最优比例为芽孢杆菌BD6株5.2%、BZ5株22%、溶藻弧菌VZ5株72.8%。对该最优比例进行验证试验,得到的结果与预测基本一致。按上述比例搭配的复合菌株在第24小时即可获得较高的氨氮和亚硝氮去除率,第72小时的氨氮去除率为98.37%、亚硝氮去除率为93.81%。混料设计和调优软件可用于混合菌中多组分和多目标参数优化,以获得最优的复合菌比例组合。

摘要：利用固相萃取技术富集了水中6种邻苯二甲酸酯类：邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯（DEHP）、邻苯二甲酸二甲酯（DMP）、邻苯二甲酸二乙酯（DEP）、邻苯二甲酸二丁酯（DBP）、邻苯二甲酸二辛酯（DOP）、邻苯二甲酸丁基苄基酯（BBP）。借助均匀设计法及计算机回归建模优化技术对6种邻苯二甲酸酯类的固相萃取条件进行了设计与优化,得到最佳固相萃取条件为：洗脱剂配比（正己烷与丙酮的体积比）30∶1,洗脱体积2 mL,洗脱速率为4 mL/min,上样速率8 mL/min。富集后的样品用带电子捕获器的毛细管气相色谱检测,方法的线性范围为1~1 000μg/L（DMP、DEP、DOP）,0.2~100μg/L（DBP、DEHP）,0.1~100μg/L（BBP）;线性回归方程的相关系数为0.997 0~1.000,检测限为0.01~0.4μg/L,方法回收率为69.0%~117.0%,相对标准偏差为2.2%~9.5%。

摘要：利用固相萃取技术富集了水中5种邻苯二甲酸酯类(邻苯二甲酸二甲酯(DMP)、邻苯二甲酸二丁酯(DBP)、邻苯二甲酸丁基苄基酯(BBP)、邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)、邻苯二甲酸二辛酯(DOP))。借助均匀设计法及计算机回归建模优化技术对5种PAEs的固相萃取条件进行了设计与优化,得到最佳固相萃取条件为:洗脱剂配比(正己烷与丙酮的体积比) 30:1,洗脱体积2 ml,洗脱速率为4 ml·min-1,上样速率8 ml·min-1。富集后的样品用带电子捕获器的毛细管气相色谱检测,方法的线性范围为1～1 000lμg·l-1(DMP,DOP),0．2～100μg·l-1(DBP,DEHP),0．1～100μg·l-1(BBP);线性回归方程的相关系数为0．9970～1．000,检测限为0．01～0．4μg·l-1,方法回收率为69％～116．9％,相对标准偏差为2．5％～9．5％。

摘要：以设计强度为C40的混凝土作为基准,本研究采用L9（33）正交试验设计,通过混凝土的坍落度,抗压强度和抗渗性能等测试,用极差分析法得出混凝土的最优配合比。结果表明,掺入一定量的牡蛎壳、粉煤灰和矿粉的混凝土能提高混凝土的流动性和抗压强度等性能。牡蛎壳还对混凝土的工程性能有积极的影响,减少自然资源的开采,做到实现牡蛎壳、粉煤灰和矿粉的回收再利用,保护环境的作用。

摘要：采用响应面法优化研究糟醉西伯利亚鲟鱼(***)的湿腌工艺。通过单因素实验研究食盐添加量、腌制时间和腌制温度对鱼肉品质的影响,根据响应面中心组合实验设计原理,建立感官评定的三元二次回归方程。通过分析等高线图和响应面图得到回归方程的决定性系数为0.974,说明模型能够代替真实实验点对感官评价得分进行预测。响应面结果表明:盐水浓度对鱼肉品质的影响最为显著,腌制温度为10℃,腌制时间为10.5 h,盐水质量分数为14%时,糟醉鲟鱼产品品质较佳,感官评分值最高,为90分,与模型预测值基本相符。

摘要：类菌胞素氨基酸(MAAs)是具有抗紫外辐射功能的小分子水溶性活性化合物。为了最大程度提取海萝(Gloiopeltis furcata)中MAAs成分,采用甲醇溶剂超声提取法,通过单因素实验确定超声温度、超声时间、液料比、甲醇体积分数、提取次数的最佳范围,并用响应面法进一步优化提取海萝中MAAs的工艺参数。经Box-Behnken实验设计优化出最佳提取工艺条件为超声温度为41℃,超声时间为81 min,液料比为67 m L·g-1,甲醇体积分数为12%。在此条件下预测MAAs的提取率为1.311 5 mg·g-1,实际提取率为1.306 4 mg·g-1。

摘要：为了开发云斑尖塘鳢、线纹尖塘鳢及其杂交尖塘鳢种间特异性分子标记,选择泛素化相互作用基序包含蛋白1(sumo-interacting motif-containing protein 1,simc1)基因作为候选基因。利用该基因mRNA序列设计引物对P1针对3种尖塘鳢基因组进行扩增,均扩增到893 bp的外显子序列。该序列在3种尖塘鳢种内个体间均未获得单核苷酸多态性(singe nucleotide polymorphisms,SNP)位点,但种间共存在21个SNP位点,其中有7个同义突变,14个错义突变。选择较容易设计引物的SNP15位点设计等位基因特异性PCR(allele specific PCR,AS-PCR)引物对P2和P3。利用这两对引物针对待测样品基因组进行扩增,若P2扩增出222 bp条带,而P3无扩增条带,则样品为线纹尖塘鳢;若P2无扩增条带,而P3扩增出566 bp条带,则为云斑尖塘鳢;若P2和P3同时扩增出222 bp和566 bp条带,则为杂交尖塘鳢。通过对模板进行梯度稀释,检测P2和P3引物对灵敏度,结果表明,P2引物对检测的基因组最低浓度为5×10^(-4)mg/L,P3引物对检测的基因组最低浓度为5×10^(-2)mg/L。3种尖塘鳢特异性SNP标记的开发及快速检测方法的建立,可为尖塘鳢种质资源鉴定及新品种培育等工作提供技术支撑。