摘要：根据已发表的鸭圆环病毒(duck circovirus,DuCV)序列,合成了1对检测引物。利用此对引物对广东省新兴县发生的疑似圆环病毒感染的患病番鸭的肝、胰腺、心、肾、脾、肺、血液、腔上囊、胸腺、哈氏腺、粪便和羽毛进行了PCR扩增。结果显示,获得了与预期619 bp大小相符的DNA片段,经测序确认其为DuCV特异序列,证实鸭群感染了鸭圆环病毒。然后,再设计了2对引物从鸭组织提取的DNA中扩增出2条片段,拼接校对后获得了全基因组序列,并对其进行了分析。结果表明,在感染鸭体内各组织器官中都有DuCV存在,该株病毒基因组序列全长为1 988 bp,与部分已登录GenBank的DuCV同源性高达97.0%以上。

摘要：根据GenBank中已发表的1型鸭病毒性肝炎(duck hepatitis virus type1,DHV-1)和新型鸭病毒性肝炎(new type duck hepatitis virus,N-DHV)全基因序列,在非同源区域设计一对新型鸭病毒性肝炎特异性引物P1/P2,对鸭病毒性肝炎病毒、鸭瘟病毒、鹅细小病毒细胞毒、流感病毒等鸭常见病病原进行RT-PCR扩增。结果表明引物特异性良好,引物P1/P2仅能特异性扩增出N-DHV的638bp基因片段;敏感性试验结果表明:N-DHV RNA最低检出量为21pg。同时对临床样品的检测中发现DHV-1和N-DHV存在混合感染的情况。该方法的建立为鸭病毒性肝炎病毒尤其是新型鸭病毒性肝炎病毒的鉴定及快速诊断提供了可靠的依据。

摘要：根据GenBank中已发表的番鸭细小病毒(MDPV)和鹅细小病毒(GPV)全序列,分别设计并合成特异性引物MDPVF/R和GPVF/R,对细小病毒属成员GPV、MDPV、犬细小病毒(CPV)及鸭常见病毒病病原如鸭瘟病毒(DPV)、鸭病毒性肝炎病毒(DHV)、鸭呼肠病毒(DRV)、流感病毒(AIV)的核酸进行PCR扩增。结果表明,引物特异性良好,引物MDPVF/R只能特异性扩增出MDPV的714 bp基因片段,引物GPVF/R只能特异性扩增出GPV的570 bp基因片段;敏感性试验结果表明,MDPV DNA最低检出量为17.5 pg,GPV DNA最低检出量为13.7 pg。该方法的建立对这两种疾病的鉴别诊断具有重要意义。

摘要：本研究旨在运用原位杂交检测方法检测鸡的肿瘤病。根据GenBank中登录的MDV、ALV-J和REV参考毒株序列,设计并合成3对引物,经PCR方法扩增出相应的片段,并进行了克隆测序。将测序正确的片段亚克隆至pSPT-18,经转录得到DIG标记的特异cRNA探针。将探针分别与3种肿瘤病阳性组织石蜡切片进行杂交,可看到阳性信号,特异性、敏感性较好。运用该方法对32份疑似肿瘤病料进行了检测,MDV、ALV-J和REV的阳性率分别为25.00%、18.75%和3.13%。结果提示,鸡肿瘤病在鸡场中仍广泛存在。

摘要：根据国内外已发表的鹅细小病毒（GPV）B株和GD株基因序列，应用DNA Star分子生物学软件设计一对引物，应用PCR技术扩增GPVZq株的结构蛋白基因VP2全基因片段。将扩增得到的VP2全基因克隆到pMD18-T载体上，获得的重组质粒经PCR鉴定后进行序列测定。结果表明ZQ株基因大小为1764bp，编码587个氨基酸，其基因序列与GPV参考毒株推导的氨基酸序列同源性在89．1％～99．3％之间，差异较大；与番鸭细小病毒（MDPV）参考毒株相比同源性在92．0％～92．5％之间，超过与部分GPV毒株的同源性，推测可能与该毒株来源于番鸭而不是鹅有关，另外也在基因水平上解释了GPV与MDPV在血清学上存在交叉反应的部分原因。

摘要：根据禽腺病毒血清4型(FAdV-4)的Hexon基因设计1对特异性引物和探针,经反应条件优化,建立了荧光定量PCR检测方法。结果显示:以重组质粒为标准品建立的标准曲线在7.3×10^3拷贝/μL^7.3×10^8拷贝/μL具有良好的线性关系;该方法仅对FAdV-4扩增呈阳性,对NDV、AIV、IBV、IBDV、ILTV、FPV、FAdV-8a、FAdV-8b的检测均为阴性;对FAdV-4最小检出的梯度为7.3×10^1拷贝/μL,灵敏度为普通PCR的100倍;批内和批间重复试验的变异系数均小于2%。对50份临床样品进行检测,表明该方法的检出率比普通PCR方法高10%,可用于FAdV-4的快速诊断和定量分析。

摘要：根据GenBank中收录的猪HSP70基因序列,设计了1对特异性引物。运用RT-PCR技术从经热应激诱导的大约克猪组织总RNA中扩增得到了HSP70基因,并将其克隆至pMD18-T Simple载体上,进行序列测定。将编码猪HSP70的基因亚克隆至pET-32a(+)上,并将重组质粒pET-32-pHSP70在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中经IPTG诱导表达。核苷酸测序结果显示,获得的基因序列全长2200 bp,含1932bp的开放阅读框,编码643个氨基酸,与已知猪HSP70核苷酸序列和氨基酸序列的同源性都高达99.5%。SDS-PAGE电泳及Western-blot分析表明,猪HSP70在BL21(DE3)pLysS中得到了高效表达。

摘要：根据国内外已发表的番鸭细小病毒(MDPV)FM株和GD株基因序列,应用DNAstar分子生物学软件设计1对引物,应用PCR技术扩增MDPV XX株的结构蛋白基因VP2全基因片段。将扩增得到的VP2全基因克隆到PGEM-T easy载体上,经菌液PCR鉴定后的重组子进行序列测定。结果表明,MDPV XX株基因大小为1764bp,编码587个氨基酸,其基因序列与国内外发表的FM株、GD株核苷酸序列同源性分别为98.4%和99.8%,而与同属的小鹅瘟病毒B株核苷酸同源性仅为78.2%。可见编码番鸭细小病毒结构蛋白的VP2基因较保守,且和同属的小鹅瘟病毒明显不同,这也是该病毒目前只有一个血清型的分子基础。

摘要：根据GenBank中收录的猪白细胞介素2(pIL-2)基因序列,设计1对特异性引物。运用RT-PCR技术从刀豆素(Con A)诱导的猪外周血淋巴细胞总RNA中扩增得到pIL-2基因,并将其克隆至pGEM-T Easy载体上。核苷酸测序结果显示,获得的基因序列全长493 bp,含465 bp的开放阅读框,编码154个氨基酸,与已知pIL-2核苷酸序列和氨基酸序列的同源性都高达100%。将克隆的pIL-2基因编码阅读框亚克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV,电转化含腺病毒基因组(pAdEasy-1)的大肠埃希菌细胞BJ5183-AD-1,成功获得了重组腺病毒DNA,将纯化后的重组腺病毒DNA转染AD-293细胞,经过病毒基因组的PCR鉴定和转录水平的RT-PCR鉴定,初步表明,获得了表达pIL-2的重组腺病毒。

摘要：参考GenBank中发表的PRV OSU毒株VP7基因核苷酸序列ORF两端保守区序列,设计1对特异引物,以PRV GD1株反转录cDNA为模板,通过PCR方法扩增出长约1 kb的基因片段,并克隆到pMD18-T载体中进行序列测定。测序结果表明:VP7基因全长1 062 bp,含有一个981 bp的开放阅读框,编码326个氨基酸。与国内外已知的13个毒株VP7全长基因的核苷酸及推导的氨基酸序列比较,相似性分别为77.4%～100%和78.6%～99.7%;核苷酸系统发育进化树结果表明,GD1毒株与轮状病毒A2,JP3-6毒株亲缘关系较近,为一个进化群。