摘要：目的探讨所设计针对血管紧张素Ⅱ1型受体（angiotensin Ⅱ receptor 1，AT1R）不同亚型的小发夹RNA（short hairpin ribonucleic acid，shRNA）的腺病毒注入小鼠脑干孤束核（nucleus tractus solitarius，NTS）相应受体mRNA表达抑制的有效性和特异性。方法选择雄性C57BL小鼠作为动物模型，将携带针对各自受体的shRNA腺病毒注入脑干右侧NTS部位，左侧注射对照用的腺病毒。正常饮食喂养10d后处死，采用原位杂交的方法检测每只小鼠脑干NTS的AT1aR mRNA和AT1bR mRNA表达情况。结果注入携带针对AT1aR的shRNA腺病毒后，AT1aR mRNA表达量的同位素亮度平均由1．81μCi／mg下降为0．71μCi／mg，降低了（61．2±6．8）％，P〈0．01；AT1bR mRNA的表达则不受影响（P〉0．05）。注入携带针对AT1bR的shRNA腺病毒，AT1bR mRNA表达量的同位素亮度平均由10.28μCi／mg下降到4．97μCi／mg，降低了（51．6±5．2）％，P〈0．01；而AT1aR mRNA的表达不受影响（P〉0．05）。结论所设计的shRNA，可以特异地抑制相应各自亚型受体mRNA的表达，而对另一个亚型受体mRNA表达未发生交叉影响。

摘要：目的针对小鼠血管紧张素Ⅱ 1型受体(Angiotensin Ⅱ Receptor 1,AT1R)两亚型之间无工具药区分的现状,研究应用RNA干扰(RNAinterference,RNAi)技术来区分两种亚型受体功能的可行性。方法选择雄性C57BL小鼠作为动物模型,通过在脑干孤束核(nucleus tractus solitarius,NTS)注射携带短发夹RNA(shor thairpin RNA,shRNA)腺病毒的方法,喂养10d后取出脑干组织做标本,使用原位杂交的方法检测每只小鼠脑干NTS部位AT1R mRNA两种亚型的表达情况,同时使用免疫组织化学的方法显示受体蛋白表达的情况。结果注入携带针对AT1aR mRNA的shRNA腺病毒后,AT1aRmRNA的表达降低了(61.2±6.8)%(P0.05);改用AT1bR mRNA相应的shRNA腺病毒,AT1bRmRNA的表达降低了(51.6±5.2)%(P0.05)。用免疫组织化学显示AT1R蛋白表达情况,发现两种情况下表达均出现不同程度的下降。结论所设计的针对不同亚型AT1R的shRNA,可以特异地沉默各自不同受体的mRNA表达,并同时在蛋白水平上显示出AT1R受到抑制的结果,故可以将其应用于区别AT1R两种亚型受体功能的研究。

摘要：目的通过与国外进口温控射频消融导管的比较，评价国产温控射频消融导管在房室结折返性心动过速（AVNRT）和房室折返性心动过速（AVRT）的临床疗效和安全性。方法自2008年6月至11月共入选AVNRT或AVRT患者1342例。采用多中心随机平行对照开放试验设计，应用解放军第四军医大学设计的最小化随机统计方法进行动态随机分为二组，国产导管组应用国产温控射频消融导管，进口导管组应用强生或圣犹达等公司的进口温控射频消融导管。采用常规方法在X线透视下进行心内电生理检查和射频消融。结果国产导管组672例，即时消融成功率97．9％，进口导管组670例，即时消融成功率99．1％，两组成功率均达到96．0％以上，差异无统计学意义。国产导管组与进口导管组的手术时间[（68±36）min与（67±34）min]、曝光时间[（14±14）min与（10±11）min]、放电次数[（4．5±4．5）次与（4．6±3．9）次]、放电时间[（260±218）S与（257±207）s]、导管性能总体评分[（4．4±0．5）分与（4．5±0．4）分]，两组间差异均无统计学意义。发生并发症3例，均为心包积液（国产导管组1例，进口导管组2例），经心包穿刺引流后转为正常出院，差异无统计学意义。随访3个月，复发30例，分别为国产导管组14例、进口导管组16例（2．1％与2．4％），差异无统计学意义。结论国产温控射频消融导管可安全有效治疗AVNRT或AVRT。

摘要：目的探讨MHCⅡ类分子转录激活因子(CⅡTA)的M1-RNA对细胞表面MHCⅡ类分子表达的抑制。方法M1-RNA是核糖核酸酶P的催化活性单位,设计并克隆针对CⅡTA第452、629位点的M1-RNA(分别为M1-452-GS、M1-629-GS)及其相应的CⅡTA靶基因,分别插入pUC19、pGEM-7zf (+)载体,进行细胞外切割活性筛选。将细胞外切割作用明显的M1-629-GS亚克隆入psNAV载体(psNAV-M1-629-GS,pA629)并稳定转染ECV304细胞株,流式细胞术检测经典的MHCⅡ(HLA-DR、-DP、-DQ)类抗原表达,RT-PCR检测CⅡTA的mRNA水平。结果pA629阳性ECV304细胞株与对照组比较,HLA-DR、-DP抗原表达分别降低了89.21%及92.31%;同时CⅡTA的mRNA含量降低(P<0.05)。结论CⅡTA的M1-RNA(M1-629-GS)降低了自身mRNA含量,从而阻止其调控的MHCⅡ类分子的表达。

摘要：通过CIITA核酶抑制HeLa细胞表面MHCⅡ类分子的表达。设计并合成针对人类CIITA的核酶Rz464,通过体外转录和切割实验鉴定其活性。将Rz464亚克隆到真核表达载体pIRES2-EGFP(pRz464),并稳定转染HeLa细胞株,流式细胞术检测MHCⅡ类抗原表达,RT-PCR检测CIITA mRNA水平。结果表明,Rz464与CIITA靶序列体外切割产物电泳见预期切割条带。pRz464^+HeLa细胞与对照组比较,HLA-DR、DP、DQ抗原诱导型表达分别降低了79.21%、90.31%及48.30%;同时CIITA的诱导型mRNA含量明显减少。Rz464通过切割CIITA mRNA,进而阻止了后者调控的MHCⅡ类分子的表达。

摘要：目的设计一种实用的生物反应器,并探讨把它应用于组织工程血管(TEBV)培养的可行性。方法根据国外文献所报道的基本原理,设计一种实用的生物反应器,把人脐动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)接种到管状聚乙醇酸(PGA)无纺布培养支架上,放入生物反应器内进行三维压力培养,2周后收获培养新生物,肉眼观察大体外观并拍照记录,扫描电镜检测表面形貌。结果 VSMCs在生物反应器内经2周连续培养初步形成一条血管样组织。新生组织外观光滑平整,色泽鲜亮,具有一定厚度和弹性,能自我维持管腔形态。扫描电镜显示组织含有丰富的细胞外基质(ECM),PGA无纺布已被ECM完全包裹,管壁有未降解的PGA碎片。结论设计的生物反应器符合组织工程培养的要求,未来可以用其进行构建TEBV的进一步研究。

摘要：BARI（Bypass Angioplasty Revascularization Investigation）随机研究的设计目的是为了比较经皮冠状动脉球囊血管成形术（percutaneous transluminal coronary balloon angioplasty，PTCA）与冠状动脉旁路移植术（coronary artery bypass grafting，CABG）对多支血管病变的冠心病患者5年生存率的疗效。

摘要：目的了解小发夹核糖核酸(short hairpin ribonucleic acid,shRNA),在小鼠孤束核抑制血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensin Ⅱ receptor 1,AT1R)信使核糖核酸(messenger RNA,mRNA)表达的有效性和特异性。方法8只雄性C57BL小鼠作为动物模型,选择脑干孤束核作为研究靶点,用微量注射方法,将携带shRNA的腺病毒注入脑干右侧孤束核,左侧同时注射对照腺病毒。正常饮食喂养10d后宰杀,用原位杂交的方法检测每只小鼠脑干AT1aR mRNA表达的情况,用配对的t检验进行统计学分析。结果注入携带针对AT1aR mRNA的shRNA腺病毒后,AT1aR mRNA的表达量由1.81μCi/mg下降为0.71μCi/mg,降低了61%±7%,差异有统计学意义(P0.05)。结论本所设计的shRNA,能够在活体上有效和特异地抑制AT1aR mRNA表达;脑干孤束核的解剖特点适宜作为活体上评价小片段RNA干扰AT1R mRNA表达效率的位置。

摘要：背景:组织多普勒超声心动图被证明可以用来评价心脏的整体和局部功能,但用于评价骨髓基质细胞移植对阿霉素所致兔心肌病的连续观察研究较少。目的:利用组织多普勒超声心动图评价骨髓基质细胞直接注射治疗阿霉素所致心肌病心肌功能的变化。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2002-09/2003-12在华中科技大学同济医学院附属协和医院超声科实验室完成。材料:雄性成年日本大耳白兔28只,体质量(2.0±0.2)kg,利用阿霉素诱导其中20只制备扩张型心肌病模型。方法:造模成功后,20只白兔分为细胞移植组和PBS组,每组10只。8只生理盐水处理组作为假手术组。细胞移植组于实验开始第8周每只兔分别取其骨髓进行骨髓基质细胞培养。第12周进行细胞荧光标记后,于心外膜直接注射回各自兔的左室侧壁心肌处。PBS组于第12周注射相同剂量的PBS培养液作为对照。另外8只作为假手术组仅开胸,每次给予相同剂量生理盐水。主要观察指标:细胞移植前及移植后4周利用常规和组织多普勒超声心动图评价左室整体和局部功能;组织学和荧光检测观察心肌细胞形态变化。结果:①细胞移植组组织多普勒发现局部注射区组织速度增高,由(4.0±1.1)cm/s到(5.3±1.2)cm/s(P<0.05),而整体功能未见明显改善。PBS组及假手术组整体和局部心肌功能均未见改善。②细胞移植后4周存活的细胞仍可见DAPI荧光标记。组织学检查发现注射区附近心肌损伤减轻,凋亡较少。结论:骨髓基质细胞治疗扩张型心肌病可以改善局部心肌功能,组织多普勒可以检测出局部心肌功能的改善,为细胞移植提供了一种有效的评价手段。

摘要：本研究旨在探讨抗MHCⅡ类分子转录激活因子(CⅡTA)的M1-RNA抑制细胞表面MHCⅡ类分子的表达。M1-RNA是核糖核酸酶P的催化活性单位,设计并克隆针对CⅡTA第3408位点的M1-RNA(M1-3408-GS)及其相应的CⅡTA靶基因片段(3176-3560),分别插入pUC19、pGEM-7zf(+)载体,进行细胞外切割活性筛选。将细胞外切割作用明显的M1-3408-GS亚克隆入psNAV载体并稳定转染Jurkat细胞株,采用流式细胞术检测该细胞表面经典的MHCⅡ(HLA-DR、-DP、-DQ)类抗原表达,RT-PCR检测其CⅡTA的mRNA水平。结果表明:在重组人干扰素(IFN)-γ诱导下,M1-3408-GS阳性Jurkat细胞株与对照组比较,其表面HLA-DR、HLA-DP、HLA-DQ抗原诱导型表达分别降低了83.17%、94.12%及84.31%;同时CⅡTA的mRNA含量明显降低(P<0.05,t=4.89)。结论:抗CⅡTA的M1-RNA(M1-3408-GS)降低了自身mRNA含量,从而阻止其调控的MHCⅡ类分子的表达。