摘要：为了解广东省猪圆环病毒2型（PCV2）的流行、变异及进化情况,对2013年广东省多个猪场发生PCV2感染的病猪血清进行PCV2病毒分离,参考GanBank上已发表的PCV2全基因序列,设计3对引物,用PCR方法扩增其全基因序列,测序并进行序列分析.结果分离到9株PCV2毒株,全基因序列长度都为1 767 bp.同源性分析表明,9株PCV2分离株核苷酸同源性为93.6％～99.4％,与2012年分离株同源性为94.5％～99.7％,与2011年分离株同源性为94.2％～99.7％,与GenBank中其他PCV2分离株的同源性为93.2％～99.7％.9株PCV2的ORF2核苷酸及其推导的氨基酸序列同源性分别为89.0％～99.9％和86.4％～ 100％,存在一定的变异.基因型分析表明,有5株属于PCV2d,3株属于PCV2b,1株属于PCV2a.对2011-2013年分离的PCV2基因组特征进行分析,发现PCV2核苷酸序列比较稳定,与世界其他分离株也具有较高的同源性.

摘要：对广东省几个地区发生疑似PRRSV感染的猪场送检的502份血清进行RT—PCR检测。将检测到的阳性血清接种到Marc-145细胞上并连续传代4～5次．收获出现明显细胞病变（CPE）的样品，利用蚀斑试验克隆纯化PRRSV。根据高致病性PRRSVNsp2基因缺失区的两端保守区设计了1对引物区分经典PRRSV和高致病性PRRSV。研究结果表明，成功分离到12株PRRSV并纯化出2株病毒。从502份血清样品中检测到156份阳性血清，PRRSV感染阳性率达32％，经鉴定均为高致病性PRRSV变异株。对分离毒株的Nsp2基因序列进-步分析，发现此次分离株Nsp2基因与VR-2332株（70．7％-74．6％）的核苷酸同源性较JXAl株（87．1％-100％）偏低；在系统进化树上分离株与JXAl变异株亲缘关系比较近，而与VR-2332株亲缘关系比较远。说明广东省地区普遍存在PRRSV的感染．并且病毒出现了不同程度的变异。

摘要：根据Genbank上痘病毒TK基因序列分别设计左右同源臂引物TKL-F/R和TKR-F/R,以FPV基因组为模板,扩增左右同源重组臂(TKL、TKR);PCR连接左右同源臂,使中间带有多酶切位点MCS,然后连入pBluescriptIISK(+)骨架质粒,获得的阳性质粒命名为pTK;合成反向串联表达盒:p7.5-MCS1-SV40-MCS2-P11,将表达盒插入质粒pTK的MCS位点,筛选获得阳性质粒pTKS;在鸡痘病毒早期启动子P7.5后的MCS1处插入MDPVVP3基因,晚期启动子P11后的MCS2处插入EGFPBGHpA,从而构建MDPVVP3基因重组鸡痘病毒转移载体pTKS-VP3-EGFP,对构建好的转移载体进行酶切和测序鉴定。将转移载体pTKS-VP3-EGFP转染鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)后,经RT-PCR和绿色荧光蛋白基因表达鉴定了MDPVVP3基因的表达,为进一步研制安全、高效的MDPV重组鸡痘病毒疫苗奠定了基础。

摘要：根据Gen Bank已发表的猪伪狂犬病毒(PRV)的g B、g E基因序列,分别设计了2对特异性引物,建立了一种鉴别诊断猪伪狂犬病病毒野毒与疫苗毒的双重PCR检测方法。应用该方法可从野毒基因组中扩增出与预期大小相符的2条特异性条带,分别为122 bp(g E)和246 bp(g B);从疫苗株基因组中仅扩增出1条特异性条带,为246 bp(g B)。结果显示,该方法灵敏度高、特异性强,适用于PRV的临床诊断和流行病学调查。

摘要：由鸭坦布苏病毒(DTMUV)引起的蛋鸭产蛋急剧下降给我国的养鸭业造成了巨大的经济损失。针对DTMUV E基因保守区域设计一套LAMP引物,利用实时荧光技术建立了DTMUV的实时RT-LAMP病原检测方法。该方法检测RNA的最低检测极限可达到7.8 copies,其灵敏度是普通RT-PCR的100倍,且只能特异性扩增DTMUV的RNA,对其他常见鸭源病毒核酸均无特异性扩增。该方法简单快速、特异性强和灵敏度高,判定结果只需要观察扩增曲线,适用于DTMUV早期感染的诊断、分子流行病学调查和疫情监测。

摘要：目的建立一种能够满足现场快速检测、完全脱离实验室仪器设备的大肠埃希菌O157∶H7多重PCR检测方法。方法利用大肠埃希菌O157∶H7抗原基因保守序列fli Ch7和rfb E设计2对引物,并对Palm PCR G1-12退火温度、循环数、引物浓度及引物最佳比例进行优化,建立微量快速检测大肠埃希菌O157∶H7的多重PCR方法,并对该方法的特异性、灵敏性、重复性进行验证。取疑似病牛粪便共9份,利用粪便DNA提取试剂盒提取DNA,按照建立的PCR方法进行扩增,扩增产物经微型电泳仪电泳检测并照相。结果确定大肠埃希菌O157∶H7 PCR的最佳退火温度为54℃,循环数为25个循环,上下游引物浓度为10μmol/L,2对引物最适比为fli Ch7∶rfb E=1∶3。大肠埃希菌O157∶H7扩增产物可见625 bp(fli Ch7)和213 bp(rfb E)的特异性片段,而大肠埃希菌(ATCC25922)、猪链球菌2型、金黄葡萄球菌、鲍氏不动杆菌、小肠耶尔森菌、单增李斯特菌、沙门菌的PCR检测结果均为阴性,最低扩增DNA浓度为10 pg/μl,重复扩增5次均可见目的条带。9份疑似病牛粪便样品中,共检测出7份大肠埃希菌O157∶H7阳性样品。结论建立了大肠埃希菌O157∶H7微量快速多重PCR检测方法,该方法特异性、灵敏性和重复性均良好,可在现场约1 h报告结果,对突发性传染病的防治具有重要意义。