摘要：目的对一例典型草鱼出血病的病原进行分离、鉴定和全基因组序列分析。方法采用细胞培养分离病毒、PCR检测和测序分析、电镜观察、间接免疫荧光(IFA)分析、全基因组序列测定及回归感染鉴定对采集的草鱼出血病样品进行病原分析。结果接种病毒的细胞没有产生CPE,但电镜观察可见大量呈典型呼肠孤病毒特点的病毒粒子,PCR检测并测序分析和IFA鉴定表明该分离株为II型GCRV;分离的病毒感染草鱼可出现典型的草鱼出血病症状,最终死亡率为96.7%,暂命名为GD20-08株;全基因组测序表明,GD20-08的基因组结构Ⅱ型GCRV分离株的相似,其核苷酸和氨基酸序列其他Ⅱ型GCRV分离株的同源性分别在94%~99%和96%~100%不等。结论从患草鱼出血病的草鱼体内分离到一株Ⅱ型GCRV的变异强毒株。

摘要：诃子(Chebulae fructus)提取物,如鞣质等活性物质具有明显的调节免疫、抑菌、抗氧化等作用。诃子对嗜水气单胞菌、迟缓爱德华氏菌、舒伯特气单胞菌、豚鼠气单胞菌、弧菌等危害水产动物的病原菌具有抑制作用。诃子中没食子酸等成分能够减少水产动物的耐药性,降低环境污染,缓解药物残留问题。文章综述诃子的主要成分、生物学功能,探讨诃子在水产动物养殖领域、鱼类疾病预防中的作用,为诃子在水产养殖中的应用提供参考。

摘要：【目的】明确藏猪和杜藏猪(杜洛克父本与藏猪母本杂交F;代)的生长和胴体性状及肉质指标等表型差异,并分析背最长肌中脂肪沉积相关基因的表达差异,为藏猪种质资源利用及猪脂肪沉积规律研究提供参考依据。【方法】以藏猪和杜藏猪为研究对象,分别测定其体长、体高和胸围等生长性状,屠宰率、背膘厚及眼肌面积等胴体性状,以及pH、肉色、蒸煮损失及肌内脂肪含量等肉质指标;并通过荧光实时定量PCR检测脂肪沉积相关基因在2种猪背最长肌中的表达情况。【结果】杜藏猪的左胴体重、右胴体重、屠宰前重、胴体长、体长、体高、管围和胸围均高于藏猪,且差异显著(P0.05,下同);杜藏猪肌肉的pH-24 h、熟肉率、剪切力和含水率显著高于藏猪肌肉,而杜藏猪肉色的a-24 h值(10.30±1.06)和肌内脂肪含量[(2.48±1.44)%]显著低于藏猪。除GHR基因外,其他脂肪沉积相关基因的相对表达量均表现为杜藏猪低于藏猪,其中,ADIPOQ基因和FASN基因的相对表达量显著低于藏猪,IGF1基因、TNFa基因和Leptin基因的相对表达量极显著低于藏猪(P<0.01)。相关分析结果显示,GHR基因相对表达量与杜藏猪肌内脂肪含量呈显著正相关,FASN基因相对表达量与藏猪肌内脂肪含量呈显著正相关,IGF1基因相对表达量与藏猪背膘呈显著负相关。【结论】杜藏猪的肉质性状与藏猪相似,但杜藏猪具有更佳的生长性能,说明以杜洛克为父本与藏猪母本杂交得到的杜藏猪具有更优的生产效率。藏猪和杜藏猪的肌内脂肪含量差异与脂肪沉积相关基因的表达差异有关,即猪的肌内脂肪含量受多种脂肪沉积相关基因调控。

摘要：清远麻鸡(Qingyuan partridge chicken)是我国著名的优质地方鸡(Gallus gallus gallus)品种之一,已经历了20年系统地保种和利用,但其核心原种保种群体始终缺乏遗传多样性评价。本研究通过对国家级清远麻鸡原种保种场的选育群和保种群进行高通量测序,获得了清远麻鸡核心原种保种群体的99个线粒体基因组。在此基础上,本研究对清远麻鸡的线粒体基因组遗传多样性水平进行了全面评估,发现其线粒体基因组遗传多样性较高,编码基因COⅠ、ND4、COⅢ、ND2和Cytb及所有非编码基因的平均核苷酸差异数(K)均处于较高水平,说明清远麻鸡保种效果良好。比较分析保种群和选育群的遗传分化,结果表明保种群线粒体基因组遗传多样性高于选育群的,除了ND1和COⅡ单倍型多样度(H_(d))低于选育群的外,保种群其余基因的单倍型多样度(H_(d))均高于选育群的。通过两群体线粒体基因组编码区序列比对,发现选育群中共有30个错义突变位点,包括分别发生在ND3和ND5基因的2个激进变异;保种群有24个错义突变位点,包括COⅢ的1个中度激进突变和ND3的1个激进突变,提示清远麻鸡具有较大的选育潜力。本研究的结果对于清远麻鸡遗传资源的保护和评价,以及合理的开发和利用提供了理论参考。

摘要：在广东广州番禺某牛蛙养殖场发现较为特殊的疾病且传染率和死亡率较高,为查明其致病原,从患病牛蛙(Rana catesbeiana)中抽取其背部的积液和对其他病变部位如肝、脾等进行细菌的分离纯化后得到两株优势菌,然后将两株优势菌进行16S rRNA基因测序、进化树构建、革兰氏染色细菌和生理生化实验进行鉴定和分析,结果显示一株菌株GPY923为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila),另一株菌株GPY924为海豚链球菌(Streptococcus iniae),进行人工感染后表明其具有较强的致病性。药敏试验结果显示嗜水气单胞菌对丁胺卡那、红霉素、头孢他啶、头孢呋辛、青霉素和氟苯尼考敏感,对多种药物耐药;海豚链球菌对林可霉素和头孢呋辛耐药,对头孢他啶中度敏感,其余药物均敏感。

摘要：为查明广东省肇庆市某牛蛙养殖场患病牛蛙的致病原及有效的治疗药品,试验取病蛙的肝脏、肾脏、腹水划线培养,分离得到菌株N1和N2,在纯化后通过细菌生理生化和细菌16S rRNA序列分析对其进行鉴定,并进行人工感染试验及药敏试验。结果表明:菌株N1为迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda),菌株N2为弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)。N1与迟缓爱德华氏菌(NR118487.1)、N2与弗氏柠檬酸杆菌(NR117752.1)亲缘关系较近,在同一个进化分支上。迟缓爱德华氏菌对头孢他啶、丁胺卡那霉素、新霉素、米诺环素和多黏菌素B高度敏感;弗氏柠檬酸杆菌仅对头孢他啶高度敏感,对哌拉西林中度敏感,对新霉素、麦迪霉素、复方新诺明等抗菌药物耐药。

摘要：清远麻鸡经过多世代选育已建立了不同的专门化品系,性早熟和性晚熟肉鸡的体重、鸡冠与睾丸发育时空差异性尚未研究。为探讨不同日龄阶段父系(K系)高冠(H组)和矮冠(L组)清远麻公鸡的生长发育规律,本研究运用Logistic、Gompertz和Bertalanffy 3种曲线模型分别对7~20周龄的体重和鸡冠进行拟合,并对11周龄公鸡睾丸进行组织学观察,采用qRT-PCR分析8周龄睾丸组织Ly1抗体反应基因(LYAR)、热休克蛋白家族A成员4样基因(HSPA4L)、神经外营养蛋白2基因(NXPH2)和内咖肽A3基因(SH3GL3)的相对表达量。结果表明:H组和L组比较体重增长差异不显著,鸡冠高度差异逐渐减小。最佳Gompertz拟合分析表明H组体重和鸡冠的拐点周龄均早L组2周,H组体重拐点比鸡冠高度拐点晚1周,而L组则相反。育成期H组的鸡冠和睾丸发育优于L组。H组中LYAR、HSPA4L、NXPH2和SH3GL3的表达量分别显著低于L组,其均可能与睾丸发育有关。

摘要：【目的】分析gga-miR-30d-5p在鸡腹脂和肌内脂肪沉积中的作用,为进一步阐明鸡腹脂和肌内脂肪沉积的分子机制提供理论依据。【方法】实时荧光定量PCR检测gga-miR-30d-5p在S3系鸡和隐性白羽鸡不同发育时期不同组织中的表达,转染gga-miR-30d-5p mimics和inhibitor,观察脂肪细胞脂肪沉积的变化。【结果】gga-miR-30d-5p在心脏、肝脏、脾脏、皮脂、腹脂、胸肌、肾脏、卵巢和腿肌组织中均有表达。在腹脂组织中,gga-miR-30d-5p在0周龄时的表达存在显著的品种差异(P<0.05,下同),且在0周龄时的表达均显著高于其他周龄;肝脏组织中,gga-miR-30d-5p在0、14和16周龄的表达存在显著的品种差异,gga-miR-30d-5p在S3系鸡中的表达随着发育时期的增长逐渐升高,16周龄的表达显著高于其他周龄;在隐性白羽鸡,16周龄的表达最高且显著高于8周龄;腿肌组织中,gga-miR-30d-5p在2周龄时的表达存在显著的品种差异性。在脂肪细胞中,gga-miR-30d-5p在诱导分化4 d后的表达均显著高于增殖期;转染gga-miR-30d-5pmimics,脂肪细胞脂滴沉积极显著升高(P<0.01,下同);转染gga-miR-30d-5pinhibitor脂肪细胞脂滴沉积能力极显著下降。靶基因GO功能注释和KEGG信号通路富集分析结果显示,SOCS3和PGP可能是gga-miR-30d-5p调控脂肪沉积的预测靶基因。【结论】gga-miR-30d-5p在鸡的肝脏、腹脂和腿肌组织中表达存在显著的品种差异,转染gga-miR-30d-5p mimics/inhibitor脂肪细胞脂滴沉积极显著升高或降低。gga-miR-30d-5p具有促进鸡腹脂和肌内脂肪沉积的作用。

摘要：【目的】阐明干扰素基因刺激因子(STING)在猪抗病原微生物感染中的作用机制,为猪传染性胃肠炎、流行性腹泻和猪伪狂犬病等病毒性疾病的科学防控提供参考依据。【方法】基于CRISPR/Cas9技术,在STING基因第4、第8外显子中寻找高分靶点并设计sgRNA序列,将退火的sgRNA与酶切的LentiCRISPRv2载体用T4 DNA连接酶连接以获得LentiCRISPRv2-STING-sgRNA慢病毒载体(STING-sgRNA);以不同的STING-sgRNA慢病毒载体组合及包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2.G共同转染293T细胞,得到含sgRNA的慢病毒再转染3D4/21细胞;经嘌呤霉素筛选和有限稀释法获得单克隆细胞株,通过PCR、测序及Western blotting鉴定STING基因的敲除效果;并采用实时荧光定量PCR验证STING基因敲除对I型干扰素表达的影响。【结果】以不同的STING-sgRNA慢病毒载体组合与HA-STING过表达载体共同转染293T细胞,均能在细胞内对STING真核表达载体产生编辑效果,且以STING-sgRNA(1+5)慢病毒载体组合的编辑效率最高。以编辑效率最高的STING-sgRNA(1+5)慢病毒载体组合及包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2.G共同转染293T细胞包装出慢病毒,再用慢病毒感染3D4/21细胞,结果获得1株STING基因大片段(4989 bp)缺失的3D4/21细胞株,Western blotting检测未发现STING蛋白,说明STING基因敲除3D4/21细胞(3D4/21-STING-/-)构建成功。与野生型3D4/21细胞相比,在转染副猪嗜血杆菌DNA刺激下,3D4/21-STING-/-细胞中的IFN-β基因转录水平显著降低(P<0.05)。【结论】采用CRISPR/Cas9技术能成功大片段敲除3D4/21细胞中的STING基因,而导致STING基因功能丧失;STING基因敲除会导致细胞在病原微生物DNA刺激时Ⅰ型干扰素转录障碍,也提示STING基因可能是猪抗病原微生物感染的关键因子。

摘要：旨在通过转录组测序(RNA-Seq)与加权基因共表达网络分析(weighted gene co-expression network analysis,WGCNA)筛选慢速型黄羽肉鸡天农麻鸡胴体性状相关候选基因。本研究以104只天农麻鸡为素材,在126日龄时进行屠宰,测定胸肌重等7个胴体性状,采集胸肌组织进行RNA-Seq。基于RNA-Seq数据获得基因表达矩阵后,结合表型进行WGCNA分析,确定目标模块,筛选目标模块的枢纽基因,并分别进行KEGG通路富集、蛋白质互作网络(protein-protein interaction network,PPI)构建和相关性分析。104份胸肌组织RNA-Seq质控后获得15092个基因的表达量。与胴体表型进行WGCNA,共得到19个模块,其中4个模块与胴体性状极显著相关。功能富集结果表明,目标模块内基因主要富集在ECM-受体相互作用、黏着力等通路。以|Module membership|>0.8、|Gene significance|>0.2为标准筛选到58个枢纽基因,并通过PPI网络构建鉴定到5个网络节点基因,整合相关性分析确定COL1A2和SPARC为最重要候选基因。本研究通过大样本量转录组分析,发现ECM-受体相互作用等通路在天农麻鸡胴体性状调控中发挥主要作用,筛选到COL1A2和SPARC是影响全净膛率性状的重要候选基因,研究结果为鉴定选育分子标记,解析胴体性状分子机制奠定理论基础,为慢速型黄羽肉鸡育种提供重要参考。