摘要：背景:现有成人罗叶泵使用机械瓣,但机械瓣膜的尺寸较大,对血液破坏较大,不适于婴幼儿心室辅助泵,故设计和制作尺寸小、血栓形成低的高分子瓣膜是目前研究的热点。目的:设计和制作20mL婴幼儿罗叶泵的瓣膜,并进行基本功能测试和疲劳测试方法:通过MASTERCAM软件设计瓣膜尺寸和形状,通过制作瓣膜模具和注塑获得聚氨酯瓣膜;根据ISO5840的要求测试聚氨酯瓣膜的静止泄露、跨瓣压差和耐疲劳性能。结果与结论:制作了聚氨酯三叶瓣膜,但注塑失败率较高;所制作的三叶瓣膜的基本功能基本符合ISO5840的要求;聚氨酯瓣膜在连续运行1.0×107次后,20mL罗叶泵的搏出量的变化率为5.2%。两个聚氨酯瓣膜保持完整,瓣叶无变化。说明设计并成功制作了聚氨酯三叶瓣膜;所制备的聚氨酯瓣膜能满足20mL罗叶泵的需要,已具备了临床试验的能力。

摘要：目的研究原发性高血压患者血管紧张素原(AGT)基因A-6G(c.-44G>A,rs5051)及醛固酮合成酶(CYP11B2)基因T-344C(g.4660T>C,rs1799998)多态性对钙离子拮抗剂(CCB)非洛地平降压疗效的影响。方法采用前瞻性的设计,选择清洗期结束后血压符合要求的高血压患者接受5 mg/天非洛地平治疗。患者在治疗2、4、8周后进行随访。采用PCR结合直接测序或限制性内切酶(RFLP)的方法检测AGT基因启动子区A-6G多态性和CYP11B2基因T-344C多态性。结果治疗前,不同AGTA-6G基因型之间或者不同CYP11B2 T-344C基因型之间收缩压(SBP)和舒张压(DBP)的差异无统计学意义(P>0.05),治疗后各组患者的血压下降明显(所有P0.05)。AGTA-6G基因型对剂量方案调整没有明显的影响,分别有31.8%、35.7%和33.3%携带AA、AG和GG基因型的患者在第4周末需增加剂量(P=0.9329)。不同CYP11B2 T-344C基因型之间第8周的SBP和DBP以及8周后SBP和DBP降幅的差异无统计学意义(P>0.05)。GYP11B2基因型对剂量方案调整没有明显的影响,分别有26.6%、31.2%和35.62%携带CC、TC和TT基因型的患者在第4周末需增加剂量(P=0.6891)。结论不同AGT A-6G和CYP11B2 T-344C基因型对非洛地平的降压疗效没有明显影响。

摘要：目的定点突变是通过聚合酶链式反应(PCR)等方法向目的 DNA片段中引入包括碱基的添加、删除、点突变等所需变化。体外定点突变技术是研究蛋白质结构和功能之间的复杂关系的有力工具,也是实验室中改造/优化基因常用的手段。连接蛋白43(connexin43,Cx43)是心脏表达最丰富的连接蛋白,主要分布在心室,其构成的缝隙连接(gapjunction,GJ)在心肌细胞中的电偶联中起着非常重要的作用。近年来的研究表明干细胞移植治疗心肌梗死时,细胞间电偶联障碍是导致心律失常副作用的一个重要原因。己知Cx43的磷酸化状态可以调节通道的功能,磷酸化常见的是368位点的丝氨酸磷酸化。我们对缝隙连接蛋白43基因(Cx43)的特定碱基进行定点改变,从而改变对应的氨基酸序列,并对表达产物进行研究,以利于将来探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)中转染突变的Cx43对其向心肌分化能力的影响,及其磷酸化状态是否对心律失常有调控作用。方法设计引物,sense:5'-CTTCAAGCAGAGCCAGCAGTCGTGCCAGCA-3',antisense:5'TGCTGGCACGACGACTGCTGGCTCTGCTTGAAG-3'。以已构建的Pcdh-Cx43为模板,使用Stratagene基因定点突变试剂盒进行PCR扩增,用DpnI酶识别甲基化位点并将其酶切,PCR产物转化后筛选阳性克隆,提取质粒测序验证。在293FT中与其它3个穿梭质粒一起包装,再将慢病毒颗粒转染BMSCs,用嘌呤霉素筛选出阳性克隆BMSCs-mCx43,在压力培养基下传代培养。用流式细胞仪检测BMSCs-mCx43的干细胞相关表面标记表达情况,同时用western blot检测BMSCs-mCx43的蛋白表达情况。结果测序结果显示突变位点正确,荧光照片显示90%的293FT表达绿色荧光。50%的BMSCs有绿色荧光蛋白的表达。流式细胞仪检测示BMSCs-mCx43细胞CD29阳性表达94%±0.8%,CD73阳性表达92%±0.7%,几乎不表达CD34和CD105,与未转染病毒的BMSCs和转染空病毒载体的BMSCs的表面标记一致。Western blot结果显示BMSCs-mCx43中的mCx43表达强于未转染病毒的BMSCs和转染空病毒载体的BM-SCs。结论本实验研究表明使用定点突变法能成功将Cx43的368位点的丝氨酸突变成丙氨酸。用慢病毒载体转染BMSCs,能使BMSCs稳定持久表达mCx43蛋白,且转染慢病毒,不改变BMSCs的分子表面标记,是对BMSCs进行基因修饰的一种有效方法。

摘要：目的设计并制作基于婴幼儿心室辅助泵——罗叶泵的体外测试平台,分别完成20 mL婴幼儿罗叶泵的流体性能实验和耐疲劳实验。方法将罗叶泵驱动装置、20 mL婴幼儿罗叶泵、前负荷腔、前负荷压力传感器、后负荷腔、后负荷压力传感器、心电监护器、阻尼器和流量计等按不同的实验目的组装成不同的测试平台,流体温度控制为37℃,分别用来完成20 mL婴幼儿罗叶泵的流体性能实验和耐疲劳实验。结果所制作的流体性能实验平台能较好地模拟人体前后负荷;在固定泵输出压力时,测量了20 mL婴幼儿罗叶泵泵频率与泵前压力(前负荷)、泵后压力(后负荷)和流量的关系;所组装的耐疲劳实验平台能够测试罗叶泵的耐疲劳性能;20 mL婴幼儿罗叶泵在连续搏动70 d后,其形变率仅为4.5%。结论所组装的搏动泵测试平台能测试20 mL婴幼儿罗叶泵的流体性能和耐疲劳性能;所制作的20 mL婴幼儿罗叶泵具有较好的稳定性和耐疲劳性。

摘要：目的:设计并制作基于心室辅助泵-罗叶泵的搏动式组织工程培养体系,并完成其基本性能测试。方法:根据血管组织工程的需求进行生物反应器的设计,生物反应器主体部分由玻璃构成。启动罗叶泵,调节罗叶泵的输出压力和频率,利用心电监护仪监测生物反应器内流体压力的大小和频率,利用流量计测量其实际流量。结果:生物反应器的主体部分由玻璃制备而成。所组装的培养系统经14d运行无松脱、无渗漏。心电监护仪显示罗叶泵产生的压力波形为脉冲波。当罗叶泵的输出频率固定时,循环管路中的实测压力和流量随罗叶泵输出压力的增加而增加。当罗叶泵的输出压力固定时,循环管路的实测压力和流量随输出频率的增大而增加。结论:本研究所开发的组织工程培养体系稳定性好,可产生脉动刺激,可初步应用于血管组织工程三维培养。通过调节输出压力、频率等参数,可产生不同的流体规律,可用于调节心血管组织工程的微环境。

摘要：目的建立血浆循环MicroRNA的提取检测方法,并且检测其在冠心病患者和健康人群之间的差异表达,寻找新的疾病诊断标记物。方法前期入选收取15例冠心病患者和15例健康人的血样标本,性别和年龄在统计学上没有差异,采用Trizol LS提取血浆中的总RNA,NanoDrop1000检测总RNA浓度,设计特异性引物检测hsamiR-16、hsa-miR-126的表达,采用外加cel-miR-39进行校正,分析血浆中循环miRNA的表达差异。结果 (1)血浆提取的总RNA在280nm处有最大吸收峰,260 nm/280 nm比值介于1.67-2.17之间;(2)检测方法的特异性和灵敏度较好,cDNA梯度稀释20倍可以分辨出来,用hsa-miR-16 mimics的检测累加特异性,其CT值成梯度的累加,特异性较好;(3)检测hsa-miR-126在冠心病患者和健康人的表达有统计学差异(P<0.001),hsa-miR-16在两组间的表达没有统计学差异(P=0.396)。结论采用Trizol LS提取血浆总RNA的方法可行,茎环实时定量荧光检测miRNAs的方法特异性和灵敏性较好,血浆hsa-miR-126表达的差异可能在冠心病的发展过程中发挥调节作用,其具体的机制还有待于进一步的研究。

摘要：目的研究心室辅助泵-罗叶血泵（L-Y泵）的流场，并与BerlinHeart血泵（B-H泵）进行比较。方法本研究运用计算流体力学（CFD）的方法，研究L—Y泵（80ml）和B—H泵（80ml）的流场，并从两种血泵的流线图和压力分布图中选择典型截面进行比较分析。结果流线图显示，舒张早期，L—Y泵内流体呈现切线，舒张中期以高度连续流线状顺序在泵体内旋转形成旋涡；B—H泵在舒张早期泵内流体也呈切线状，但舒张中期末见旋涡形成。收缩期，两血泵内血流均以射流形式流出，由于L—Y泵的交叉设计特点，L-Y泵的流线分布较均匀；而B—H泵出人口呈平行状，其流线分布不太均匀。压力分布图显示，舒张期B-H泵局部低压区较多，L—Y泵只有1个局部低压区，收缩期B—H泵压力分布与L-Y泵类似。L-Y泵和B—H泵舒张期早期最高速度分别为0．472m／s和0．486m／s；收缩期中期最高速度分别为1．33m／s和1．34m／s。结论L—Y泵能保持较好的线性流场，流线和压力分布较合理。B—H泵出人口区较易形成湍流，压力分布不够均匀，小旋涡和湍流较多。

摘要：目的建立Ⅱ型糖尿病合并高血压大鼠模型,评价动物心功能情况并测定模型大鼠心肌细胞钙瞬变特征。方法 STZ20 mg/kg一次性尾静脉推注后用自行设计配制的高脂饲料喂养SD大鼠,并给予0.02%L-Name溶液作为日常饮水,期间监测处理前后大鼠空腹血糖(FPG)、OGTT2h血糖(PG2h)及尾静脉血压。12周后麻醉大鼠,Mmode超声心动图测定心功能各项指标。完毕处死大鼠,分离心肌细胞用Fluo-4AM荧光指示剂负载后60HZ电刺激记录钙瞬变变化。结果 (1)饲喂12周后,模型组大鼠FPG>7.0 mmol/L(p,PG2h>11.1 mmol/L(P140 mm Hg并显著高于对照组;(2)超声心动图监测分析结果:模型组左室舒张末期内径(LVIDd)、左室收缩末期内径(LVIDs)升高,左室后壁舒张末期厚度(LVPWd),左室射血分数(EF)及左室收缩百分率(EFS)下降(P<0.05);(3)电刺激后模型组心肌细胞钙瞬变达峰时程和半数衰减时程均显著长于对照组(P<0.05)。

摘要：目的建立血浆循环MicroRNA的提取检测方法,并且检测其在冠心病患者和健康人群之间的差异表达,寻找新的疾病诊断标记物。方法前期入选收取15例冠心病患者和15例健康人的血样标本,性别和年龄在统计学上没有差异,采用Trizol LS提取血浆中的总RNA,Nan-oDrop 1000检测总RNA浓度,设计特异性引物检测hsamiR-16、hsa-miR-126的表达,采用外加cel-miR-39进行校正,分析血浆中循环miRNA的表达差异。结果 (1)血浆提取的总RNA在280nm处有最大吸收峰,260 nm/280 nm比值介于1.67-2.17之间;(2)检测方法的特异性和灵敏度较好,cDNA梯度稀释20倍可以分辨出来,用hsa-miR-16 mimics的检测累加特异性,其CT值成梯度的累加,特异性较好;(3)检测hsa-miR-126在冠心病患者和健康人的表达有统计学差异(P<0.001),hsa-miR-16在两组间的表达没有统计学差异(P=0.306)。结论采用Trizol LS提取血浆总RNA的方法可行,茎环实时定量荧光检测miRNAs的方法特异性和灵敏性较好,血浆hsa-miR-126表达的差异可能在冠心病的发展过程中发挥调节作用,其具体的机制还有待于进一步的研究。