摘要：针对目前国产食品级亮氨酸氨肽酶的工业生产产量不高的现状,将米曲霉、黑曲霉和酱油曲霉的5个亮氨酸氨肽酶基因(lapA、lap1O、lap2、lap1S、lap1N)在低蛋白背景的无孢黑曲霉HL-1中进行重组表达,通过信号肽替换对其编码区进行改造,利用杂合启动子PnaII及营养缺陷标记pyrG构建表达载体,并基于规律间隔成簇短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)/Cas9工具设计亮氨酸氨肽酶的基因组定点整合策略,获得高活力的亮氨酸氨肽酶表达菌株,重组菌株LapA-C的亮氨酸氨肽酶活力达到11 701.2 U/mL,比未利用CRISPR工具的LapA-T重组表达菌株的酶活力(2 476.0 U/mL)提高了约3.7倍。此外,通过融合6×His标签实现了重组亮氨酸氨肽酶LapA的纯化,并对其进行了酶学性质研究:蛋白质大小约为35.0 kDa,重组亮氨酸氨肽酶LapA最适pH值为8.5,最适温度为65℃。综上所述,本研究基于CRISPR策略成功实现了亮氨酸氨肽酶在黑曲霉中的高效重组表达。

摘要：为提高南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica lipase B,CALB)表达量,根据黑曲霉(Aspergillus niger)密码子偏好性设计合成CALB基因,以PnaII/tpi为启动子构建CALB表达载体并转化到黑曲霉HL-1中表达,摇瓶发酵120 h后上清液中重组CALB活力为171 U/mL。研究重组CALB的酶学性质,最适反应温度和pH值分别为50℃和8.0,在pH 6.0~9.0和45℃以下具有较高的稳定性,10 mmol/L Cu2+、Zn2+和0.1 g/100 mL十二烷基硫酸钠强烈抑制酶活力,而1 mmol/L Ca2+、0.1 g/100 mL山梨醇对酶活力具有非常明显的激活作用。此外,以硅藻土为载体固定CALB,固定化酶活力为187 U/g。将制备的硅藻土-CALB固定化酶用于生物合成己酸乙酯,经反应条件优化后在无溶剂体系中己酸乙酯产率达91%。

摘要：FM22培养基以丰富的氮源、较强的适应性等优势,适用于毕赤酵母发酵。为进一步对毕赤酵母发酵表达南极假丝酵母脂肪酶B进行优化,选取培养基中对其影响较大的CaSO4、KH2PO4、(NH4)2SO4、PTM4为自变量,酶活力为响应值。通过单因素试验得自变量最佳值及高低水平,再采用Box-Behnken组合设计方法,模拟二次多项式回归方程的预测模型,研究各自变量及其交互作用对酶活力的影响。最终得到自变量最佳值:KH2PO445.02g/L、(NH4)2SO45.63g/L、CaSO40.46g/L、PTM4 1.63mL/L,酶活力为3214.7U/gDCW,较优化前提高约40%。

摘要：目的设计合成左旋单胺班布特罗(R-MONO),初步探讨其抗哮喘作用。方法以3,5-二羟基苯乙酮为原料,通过苄基保护、酰化、溴化、不对称还原、醇化、胺化和脱苄基7步反应合成R-MONO。取24只豚鼠,分为4组,分别于试验前2、1、0.75、0.5 h灌胃给药R-MONO(剂量4 mg/kg),用超声波雾化器以0.15 m L/min的雾化量向密闭钟罩内雾化质量分数0.6%磷酸组胺15 s,然后观察豚鼠的引喘潜伏期。

摘要：辣蓼是一种传统的中药材,来源广泛,具有消炎、镇痛和抗氧化等多种生物活性。使用混料试验和正交试验联合的方式进行了辣蓼饲料添加剂的生产工艺优化,混料试验用于优化麦糟、辣蓼和木薯渣的物料配比,正交试验用于优化黑曲霉、酿酒酵母和枯草芽孢杆菌的接种配比。结果表明,混料试验待优化变量的方差分析均极显著,R2和调整R2均超过90%,模型拟合优秀。选择黄酮含量2.75 mg/g、总酚含量3 mg/g、蛋白质含量28%和蛋白质增量40%作为多重响应的临界条件,得到满足条件的物料配比为麦糟∶辣蓼∶木薯渣=59∶10∶31。正交试验的单一效应不显著,使用总数据趋势进行结果分析,得出最佳接种配比为黑曲霉∶酿酒酵母∶枯草芽孢杆菌=10∶10∶2,此外除了2∶10∶2接种配比外,其他均达到混料试验的预测结果,完好地验证了混料试验的有效性。最后的验证试验结果表明联合试验设计合理可行。