摘要：目的 研究人巨细胞病毒（Human cytomegalovirus,HCMV）临床病毒株UL/b＆#39;区域UL148基因功能及抗HCMV治疗新策略,应用DNA性质外部引导序列（External guide sequences,EGS）在体外抑制UL148 RNA的表达.方法 应用RNA structure生物软件模拟UL148 RNA二级结构,选择二级结构相对简单的区域设计EGS,并合成EGS核苷酸序列.应用PCR方法分别扩增UL148及M1RNA基因,克隆至T7启动子下游,在T7 RNA聚合酶的作用下,体外转录UL148 RNA及M1RNA,其中UL148以32p标记并进行体外转录.混合EGS、M1RNA及UL148 RNA于切割反应液中,反应1h后,进行尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,Typhoon扫描仪观察结果.结果 根据UL148 RNA二级结构选取第58 ～72位碱基作为EGS结合区域,其切割位点位于57位,针对此区域设计EGS57,并在体外进行EGS57与UL148 RNA结合的二级结构的模拟,可形成M1RNA天然作用底物类似的茎环结构.在T7 RNA聚合酶的作用下,分别在体外转录M1RNA及UL148 RNA,其大小均与预期相符.经切割反应,可获得与预期切割位点相符的切割条带.结论 EGS57可切割UL148RNA,其切割位点准确,与预期相符.该研究为进一步探讨UL148基因功能提供有效基因沉默工具.

摘要：目的:应用多重PCR技术鉴定体外培养、分离获得的人巨细胞病毒(HCMV)临床病毒株。方法:以先天性感染HCMV的新生儿为研究对象,采集尿液标本进行病毒分离,将分离获得的临床低传代病毒感染HELF细胞,提取病毒DNA,针对较保守基因IE和LA,设计两对引物,同时扩增IE和LA基因,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分析。结果:成功分离获得2株HCMV临床低传代病毒株(D2、D3),经多重PCR同时扩增出209bp(IE)和401bp(LA)目的片段。结论:多重PCR可以作为病毒分离后,基础研究中鉴定HCMV临床病毒株的一种方法。

摘要：目的探讨血管内皮生长因子小分子干扰RNA（VEGFsiRNA）体外实验对缺氧视网膜微血管内皮细胞（RMECs）的影响。方法原代培养未足月胎儿的视网膜微血管内皮细胞，用氯化钴模拟缺氧生长状态。设计、合成VEGFsiRNA并转染缺氧培养的细胞，分为VEGFsiRNA转染组（实验组）、缺氧组（空白对照组）和阴性siRNA转染组（阴性对照组），用RT-PCR和Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测转染前后VEGF表达的变化，噻唑蓝比色法（MTY法）观察细胞的生长增殖情况。结果转染VEGFsiRNA-脂质体复合物后24h、48h、72h，hRMECsVEGFmRNA表达水平较对照组分别下降21．05％、79．67％和90．48％，hRMECsVEGF蛋白的表达水平较对照组分别下降14．58％、66．97％和81．61％。转染后12h、24h、48h及72hhRMECs的增殖分别被抑制达15．0％、42．9％、78．3％和65．9％。结论VEGFsiRNA能下调未足月胎儿缺氧视网膜微血管内皮细胞VEGF的表达，抑制视网膜微血管内皮细胞增殖，是基因治疗早产儿视网膜病变的一个研究方向。

摘要：Objective To provide epidemiological data for revising the diagnostic criteria of neonatal hyperbilirubinemia in China Methods A survey was performed among full term infants in multiple centers throughout the country From less than 24 hours after birth, the infants' bilirubin levels were measured every day until the peak level fell to less than 68 4?μmol/L Auditory brainstem responses were assessed in 56 infants randomly chosen from those with serum bilirubin levels of higher than 220 5?μmol/L Results Jaundice in most infants was detected at 2-3 days after birth The bilirubin level usually reached a peak level of 204±54 69?μmol/L at 5 days after birth and then fell Among the 875 infants, the serum bilirubin levels in 34 4% of neonates were higher than 220 5?μmol/L The mean serum bilirubin level of the infants during the first week after birth varied with geography ( P <0 001) and season ( P <0 001) The serum bilirubin level was significantly associated with gestation age ( P <0 01), delivery method ( P <0 01), weight loss ( P <0 001), and PCV elevation ( P <0 001) during the first three days after birth Conclusions The start time of neonatal jaundice was similar to that reported elsewhere, but the mean peak level in our study was higher than the reported It is suggested that the diagnostic criteria for neonatal hyperbilirubinemia in China should be strict

摘要：目的构建靶向人巨细胞病毒UL145基因的CRISPR/Cas9基因敲除质粒。方法根据CRISPR/Cas9设计原则,设计3条靶向UL145基因的gRNA,构建重组lenti CRISPR-UL145-T1、T2、T3表达质粒,转化并挑选阳性克隆,进行PCR及测序验证。同时通过荧光素酶SSA(Luciferase SSA)检测CRISPR/Cas9活性,筛选出载体活性最佳质粒。结果设计了3条靶向gRNA并构建lenti CRISPR-UL145-T1、T2、T3表达质粒,经PCR及测序鉴定载体构建成功;通过Luciferase SSA检测,结果显示,lenti CRISPR-UL145-T3载体活性最强,明显高于lenti CRISPR-UL145-T1、T2载体活性。结论重组质粒lenti CRISPR-UL145-T3筛选为活性最佳质粒,为进一步进行体内外敲除人巨细胞病毒UL145基因及其功能奠定基础。

摘要：目的研究中心静脉置管对早产儿生理性体重变化的影响。方法前瞻性设计了早产儿体重变化临床观察记录表，观察最低体重日龄、最低体重、恢复至出生体重的日龄等；根据是否有中心静脉置管及置管早产儿是否有导管相关性血流感染等因素，将早产儿分为外周组、中心组和感染组，对以上数据进行方差分析和卡方检验。结果中心组、感染组、外周组的体重上升天数分别为（9．8±6．8）、（9．0±4．6）、（13．4±5．0），中心组和感染组均较外周组短，差异有统计学意义（P〈0．05）。中心组、感染组、外周组的体重恢复速度分别为（28,4-29）、（18±9）、（17±7）g／天，中心组体重恢复速度较外周组快，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论联合中心静脉置管能有效促进早产儿的体重增长。

摘要：目的　通过收集我国较大范围的母乳喂养正常新生足月儿生理性黄疸的调查资料 ,得出我国部分地区正常新生儿黄疸胆红素的峰值和平均值 ,为临床诊断奠定基础。方法　采取统一课题设计 ,多中心协作的方法 ,对 875例正常足月新生儿自生后第 1天 (2 4h内 )开始每天分别取微量血和经皮测胆红素者 ,监测至胆红素水平相当于 6 8.4μmol/L以下。对其中血清胆红素峰值大于 2 2 0 .5μmol/L的 5 6例 ,做脑干听力诱发电位的测定。 结果　 (1)正常足月新生儿生后第 2～ 3天开始出现黄疸 ,第 5天达高峰 ,平均峰值为 (2 0 4± 5 5 ) μmol/L。血清胆红素峰值超过 2 2 0 .5 μmol/L者占 34 .4%。(2 )不同地区 (P <0 .0 1)及不同季节 (P <0 .0 5 )出生的新生儿血清胆红素值差异有显著性。 (3)在围产因素中 ,新生儿早期的胆红素水平与胎龄 (P <0 .0 1)、分娩方式 (P <0 .0 1)、出生 1～ 3d的生理性体重下降 (P <0 .0 0 1)及红细胞压积水平 (P <0 .0 0 1)差异有显著性。结论　正常足月新生儿黄疸出现的时间与国内外其他报道相似 ,但平均峰值高于既往报道的局部人群的峰值 ,更明显高于西方国家的新生儿。血清胆红素峰值超过 2 2 0 .5 μmol/L者占 34 .4%。 5 6例血清胆红素超过 2 2 0 .5 μmol/L的正常足月新生儿的脑干听力?

摘要：目的了解佛山市三级医院早产儿视网膜病变(ROP)的防治现状及其影响因素,为进一步规范早产儿用氧及提高ROP防治水平提供参考依据。方法采用多中心回顾性研究方法,设计临床调查表,对2012年佛山市共24家各级医院ROP防治情况进行调查并汇总分析。结果全市24家医院2012年共收治早产儿4 763例,出生体重<2 000 g者2 232例,<1 500 g者753例,<1 000 g者57例;有12家医院已开展ROP筛查,普及率50%,其中10家为本院筛查,2家送本市其他医院筛查;全市共筛查早产儿1 596例,检出ROP 59例,检出率为3.7%,其中达阈值ROP者11例,检出率为0.69%。全市尚未开展ROP治疗。结论佛山市三级甲等医院NICU在早产儿用氧及ROP筛查方面已取得相当成绩,一级医院及大部分二级医院筛查率和阳性率低,氧疗设施不齐、氧浓度监测不力、ROP防治意识不强、缺乏专业培训及眼科专业人才等,需要建立一个规范的筛查管理模式来加强佛山市ROP防治工作。

摘要：目的了解广东省不同胎龄新生儿胆红素脑病发病状况。方法设计问卷调查表，采用分层随机抽样调查法随机选取广东省设有新生儿科的二甲以上医院21家，以2014年间在人选医院新生儿科住院且出院诊断为胆红素脑病的患儿为研究对象，记录患儿临床资料。结果2014年间广东省地区共159例患儿诊断为胆红素脑病，其中出生胎龄〈34周8例，占5．03％；34周≤出生胎龄〈37周30例，占18．87％；37周≤出生胎龄〈42周119例，占74．84％；出生胎龄≥42周2例，占1．26％。胆红素脑病的常见三大病因中，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）缺陷70例，同族免疫性溶血47例，新生儿感染67例，但不同胎龄间常见病因的发生比例比较差异无统计学意义（P〉0．05）。部分胆红素患儿存在两种或更多种病因，但不同胎龄间是否存在多种病因的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论广东省胆红素脑病患儿中，不同胎龄间胆红素脑病的病因构成相同，且均以葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺陷、同族免疫性溶血和新生儿感染为最常见。

摘要：目的探讨腹膜透析治疗早产儿急性。肾功能衰竭（acuterenalfailure，ARF）的有效性和安全性。方法2012年3月至2015年3月，在广东省妇幼保健院新生儿重症监护病房住院的ARF早产儿中，12例进行腹膜透析。采用连续性腹膜透析的方法，透析液不加入抗生素。比较透析前后血清尿素氮、肌酐、血钾和pH的变化。观察堵管、渗漏、感染、新生儿坏死性小肠结肠炎等并发症情况，以及胃肠内营养建立情况。透析前后指标比较采用配对设计资料的Wilcoxon符号秩和检验。结果12例ARF早产儿中，9例为败血症，2例为窒息，1例为双胎输血综合征。12例患儿的平均出生胎龄为（30．9±3．2）周，透析前体重为（1461±525）g，持续透析天数为（3．8±2．6）d。3例出现置管处渗漏。2例发生腹膜炎，腹水培养分别为白色念珠菌和肺炎克雷伯菌感染。6例患儿于腹膜透析结束后1～4d建立胃肠内营养，其中1例喂养7d后出现坏死性小肠结肠炎。共有4例患儿治愈出院，6例因家属放弃治疗后死亡，2例因原发病严重而死亡。12例患儿透析前与透析后血尿素氮平均值分别为（12．71±6．98）与（9．16±3．15）mmol／L，血钾分别为（6．24±1．72）与（4．36±0．82）mmol／L，pH分别为7．21±0．17与7．32±0．17；透析后血尿素氮和血钾水平降低，pH值升高，差异均有统计学意义（z值分别为-2．118、-2．197和-2．981，P值均〈0．05）。结论腹膜透析治疗早产儿ARF安全有效，且操作及所需设备较为简单，可用于。肾脏替代治疗。