摘要：背景:目前,小径人工血管移植后由于缺乏内皮细胞衬里和抗血栓特性,长期通畅率低。有研究尝试用成熟内皮细胞种植人工血管以增强其抗血栓能力,以提高长期通畅率,但由于种子细胞和支架材料存在的缺陷,其效果并不令人满意。因此,临床上亟需寻找合适的种子细胞及血管支架材料,改善小径人工血管移植长期通畅率低这一现状。目的:探讨体外诱导骨髓单个核细胞分化成为内皮祖细胞的可行性,并种植聚氨酯小径人工血管表面,为小径聚氨酯人工血管内皮化提供合适的种子细胞。设计:观察性实验。单位:中山大学附属第一医院心血管医学部,免疫学教研室。材料:实验于2004-09/2005-05在中山大学附属第一医院完成。健康志愿者成人骨髓(n=7)约10mL。方法:收集健康成人骨髓单个核细胞,置于纤维连接蛋白预衬的DMEM培养基中,用血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子加以诱导,通过荧光显微镜和免疫组化分析等方法观察和鉴定诱导后的细胞。将诱导分化的内皮祖细胞种植到聚氨酯小径人工血管表面,用扫描电镜观察。主要观察指标:①细胞形态学变化。②免疫组化VWF和CD34抗体染色结果。③聚氨酯小径人工血管表面内皮祖细胞的黏附生长状态。结果:①在血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子等诱导因子存在的条件下,骨髓单个核细胞分化成为内皮祖细胞,倒置荧光显微镜下呈典形的“纺锤样”梭形细胞,单层细胞贴壁生长融合时呈铺路石样排列。②免疫组化示VWF和CD34抗体染色阳性。②扫描电镜下,未种植细胞的聚氨酯小径人工血管表面呈典型的多孔蜂窝状结构,孔径大小比较适合内皮祖细胞爬行。种植细胞后,聚氨酯小径人工血管表面有大量的内皮祖细胞黏附、爬行及铺展生长,有时可见内皮祖细胞长入蜂窝状孔径内。结论:在体外能将骨髓单个核细胞诱导分化成为内皮祖细胞,而诱导分化的内皮祖细胞在小径聚氨酯人工血管上黏附生长状态良好,提示体外诱导骨髓单个核细胞分化为内皮祖细胞可作为小径聚氨酯人工血管内皮化的种子细胞。

摘要：背景:目前抗磨损方面的研究主要集中在关节摩擦副的改进和选择,其中金属对金属摩擦副是重要的革新与探索方向之一。目的:观察兔用金属对金属表面人工膝关节假体置入动物体内的可行性及置入后12个月的使用情况,并探讨其生物力学性能。方法:自行设计完成兔膝关节假体,人工股骨和人工胫骨假体表面均为不锈钢材料,使其摩擦表面配对成为金属对金属。10 只成年新西兰大白兔随机分成两组,每组 5 只,实验组和对照组分别行左侧人工膝关节置换,髌骨不置换,分别置入生物型网孔假体和骨水泥固定的非网孔假体。结果与结论:置换后12个月,实验组标本大体观察可见大量骨质重建现象;两组膝关节功能差异无显著性意义;X 射线检测示两组均固定良好,无脱位及松动发生;生物力学测试假体骨界面最大剪切强度实验组明显高于对照组(P < 0.05);扫描电镜观察实验组假体固定界面可见新骨形成,对照组假体与骨固定界面无新骨形成。提示金属对金属表面人工膝关节,无论是骨水泥假体还是生物型假体,均适合于在动物体内使用,置换后12个月动物实验观察见生物型假体及骨水泥假体在动物体内生存良好,多层网孔表面兔用生物型人工膝关节假体置入动物体内的固定强度要优于骨水泥假体。

摘要：背景:在胚胎期,上皮型钙粘蛋白的表达对于肝组织的形成有决定作用。目的:将上皮型钙粘蛋白基因转染小鼠胚胎干细胞,观察其对分化细胞间黏附能力变化的影响。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-12/2008-12在中山大学附属第一医院外科实验室完成。材料:清洁级BALB/c系孕13d小鼠由中山大学实验动物中心提供。BALB/c系小鼠胚胎干细胞由中山大学眼科中心黄冰教授建系和保存。含CMV启动子的真核表达质粒pEGFP-N1由中山大学医学院吕志跃博士惠赠。方法:取BALB/c小鼠新鲜肝脏组织,提取总RNA,反转录合成cDNA。以合成的cDNA为模板,进行PCR扩增目的片段,将其和pEGFP-N1双酶切后连接构建pEGFP-上皮型钙粘蛋白,转染小鼠胚胎干细胞并进行体外分化。主要观察指标:RT-PCR及免疫细胞化学检测上皮型钙粘蛋白在分化系统中的动态表达,同时观察分化细胞间黏附能力的变化。结果:基因转染的胚胎干细胞分化后1～17d稳定表达上皮型钙粘蛋白,而普通胚胎干细胞分化后上皮型钙粘蛋白的表达则逐渐降低。稳定表达上皮型钙粘蛋白的分化细胞间黏附能力明显增强,并在19d时仍能保持致密的细胞连接和多层生长状态,普通胚胎干细胞则由拟胚体结构逐渐分化为松散的细胞群落。结论:稳定表达上皮型钙粘蛋白的胚胎干细胞分化后,细胞间黏附能力明显增强,并保持多层细胞生长状态。

摘要：背景：嗅鞘细胞移值可促进脑梗死大鼠的神经功能恢复，而移植后嗅鞘细胞在脑梗死大鼠中的迁移规律及迁移到不同脑区与该脑区的可塑性上调及神经功自旨恢复之间的关系如何尚不清楚。目的：观察嗅鞘细胞移植在皮质脑梗死大鼠中的治疗价值及迁移规律。设计、时间及地点：随机对照观察细胞移植实验．于2002—06／2004-01在中山大学第一附属医院神经内科实验室及中山大学动物实验中心完成。材料：2．5月龄SD大鼠用于嗅鞘细胞的分离培养。60--90d龄SD大鼠150只，按双肾双夹疗法复制易卒中型肾血管性高血压大鼠模型。方法：利用差速贴壁方法纯化大鼠嗅鞘细胞，移植前以Hoechst33342标记。将符合要求的易卒中型肾血管性高血压大鼠70只制作大脑中动脉梗死模型，随机选取造模后大鼠根据移植部位分组进行嗅鞘细胞移植：皮质梗死灶周围移植、梗死灶对侧皮质移植、两侧同时移植。主要观察指标：移植后第2．6周进行行为、触觉功能检查观察运动、感觉功能恢复1育况荧光显微镜下观察移植细胞体内存活与分布情况。结果：两侧同时移植嗅鞘细胞大鼠运动、感觉功能恢复情况明显好于皮质梗死灶周围移植、梗死灶对侧皮质移植（P〈0．01），梗死边缘区神经纤维数月、生长相关蛋白43阳性信号值明屁多于皮质梗死灶周围移植、梗死灶对侧皮质移植。皮质梗死灶周围移植细胞沿肼胝体分别向梗死灶和梗死刘侧皮质区迁徙，梗死灶对侧皮质移植细胞沿胼胝体分别向中线及梗死灶所存的对侧皮质区迁徙，两侧同时移植的细胞沿胼胝体迁徙，且双侧的皮质均可见移植细胞。梗死灶侧明显多于对侧皮质。结论：植入体内的嗅鞘细胞能长期存活，同时可以看到这些细胞并非局限于注射点，可沿胼胝体分别向梗死灶和梗死对侧的皮层区迁徙，并迁移至对侧，促进脑梗死大鼠神经功能恢复的作用，双侧移植效果更加明显。

摘要：背景:体内胚胎期,上皮型钙粘蛋白对肝脏组织的发育起到决定作用,探讨其在胚胎干细胞分化中的动态表达对于肝脏组织的体外发育可行性具有重要意义。目的:观察上皮型钙粘蛋白在小鼠胚胎干细胞体外分化过程中的动态表达,及其与细胞间黏附状态的关系。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-12/2008-12在中山大学附属第一医院外科实验室完成。材料:BALB/c系小鼠胚胎干细胞由中山大学眼科中心黄冰教授建系和保存。清洁级BALB/c系孕13d小鼠20只,由中山大学实验动物中心提供。方法:BALB/c系小鼠胚胎干细胞克隆经胰酶消化后,利用含胎牛血清、2-巯基乙醇、HEPES、青霉素、链霉素的DMEM培养基悬浮培养,使其自然发育5d形成拟胚体,第6天转至培养板使其贴壁生长。取BALB/c系孕13d小鼠,取其胎鼠肝脏组织制备胎肝细胞及冰冻切片,作为对照组。主要观察指标:按胚胎干细胞初分化、拟胚体形成、细胞分化群落形成等阶段,于细胞分化第1,5,9,13,17天利用RT-PCR和免疫细胞化学法检测上皮型钙粘蛋白的表达,观察其表达水平与细胞黏附状态的关系。结果:RT-PCR检测结果显示,在胚胎干细胞自然分化系统中,上皮型钙粘蛋白mRNA于分化第1天未表达,在第5天拟胚体形成后表达最强,其后表达能力逐渐降低,至17d时不再表达,作为对照的BALB/c系小鼠胎肝细胞表达较强的上皮型钙粘蛋白mRNA。免疫细胞化学检测结果亦体现相同规律。胚胎干细胞在形态学上由单细胞发育为致密的包含3胚层结构的拟胚体,再继续分化为松散的细胞群落。结论:上皮型钙粘蛋白在胚胎干细胞体外培养系统中的表达水平与分化细胞间黏附状态变化呈一定的相关性,其在体外环境中丧失表达可能是分化细胞不能组织化的一个重要原因。

摘要：背景:骨髓间充质干细胞的分化与微环境密切相关,心肌梗死后,心肌细胞发生坏死,补体活化,自由基产生,分泌各种细胞因子,患者的血清成分也发生改变,这些改变究竟对骨髓间质干细胞向心肌细胞分化存在怎样的影响?目的:观察急性心肌梗死大鼠血清在体外对大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞的作用。设计、时间及地点:对比观察体外细胞学实验,于2005-09/2006-06在中山大学干细胞与组织工程中心实验室完成。材料:体质量50～80g三四周龄SD大鼠用于骨髓间质干细胞分离培养;体质量200～300g6～8周龄SD大鼠用于制作急性心肌梗死大鼠模型。方法:采用贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞。结扎左冠状动脉前降支制作急性心肌梗死大鼠模型,并抽取正常大鼠与模型大鼠血清备用。取第3代骨髓间充质干细胞分6组培养:未诱导组、5-氮胞苷诱导组、5-氮胞苷+心肌梗死模型大鼠血清诱导组、5-氮胞苷+正常大鼠血清诱导组、心肌梗死模型大鼠血清诱导组、正常大鼠血清诱导组。主要观察指标:大鼠骨髓间充质干细胞经诱导后的形态学变化。大鼠骨髓间充质干细胞经诱导后心肌肌钙蛋白的表达情况。大鼠骨髓间充质干细胞经诱导后GATA-4和结蛋白mRNA表达水平。结果:大鼠骨髓间充质干细胞经5-氮胞苷联合血清诱导后,部分细胞渐伸长、变细,胞体中央形成球形,二三周后可见细胞呈球形、棒状,邻近细胞之间形成连接,镜下可见部分分化的细胞呈节律性跳动,呈心肌样细胞改变,其心肌肌钙蛋白、GATA-4、结蛋白表达阳性。对照组和单纯血清诱导组骨髓间充质干细胞未见形态改变,其心肌肌钙蛋白为阴性,GATA-4、结蛋白呈弱阳性。结论:单纯使用心肌梗死大鼠血清不能诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化,但心肌梗死血清能促进5-氮胞苷诱导的骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化,并促进分化的心肌细胞成熟。

摘要：背景:嗅鞘细胞被证明有修复损伤脊髓的作用,但对其移植后的生物学特性了解不多。目的:观察移植的嗅鞘细胞在损伤脊髓中的迁移方式。设计:随机对照实验。单位:广东省人民医院骨科,中山大学北校区动物实验中心。材料:2个月雄性SD大鼠38只,体质量(350±20)g。方法:实验于2004-02/05在中山大学北校区动物实验中心进行。①取SD大鼠2只用于嗅鞘细胞提取,将嗅鞘细胞用双苯亚甲胺染色。②取SD大鼠36只,随机分为3组,近端组,远端组和对照组,每组12只。近端、远端组建立大鼠胸髓损伤模型。分别于脊髓损伤近端、远端注入嗅鞘细胞悬液;对照组不损伤胸髓,仅注射嗅鞘细胞悬液。主要观察指标:术后1,2,4,6周荧光显微镜下观察脊髓中嗅鞘细胞的分布。结果:36只大鼠,分为3组,术后近端组死亡1只;远端、对照组各死亡2只。进入结果分析29只。各组大鼠脊髓中嗅鞘细胞分布:术后2,4,6周,近端组和远端组的嗅鞘细胞进一步沿着脊髓长轴纵向迁移,最远达8mm,能够穿过瘢痕,到达断端对侧的细胞数量很少;对照组嗅鞘细胞只是局部的扩散,没有迁移。结论:嗅鞘细胞的迁移主要沿着轴突进行,向头端和尾端迁移的数量和速度都没有明显区别,嗅鞘细胞只在损伤的脊髓中进行迁移。

摘要：背景:羟基磷灰石人工骨作为骨移植替代物植入人体内不会引起炎症反应、免疫排斥,具有良好的生物相容性,是一种具有骨传导活性的新型植入材料。目的:观察羟基磷灰石人工骨用于颈椎后路双开门椎管扩大成形治疗的效果,比较羟基磷灰石人工骨与自体骨的差异。设计、时间及地点:回顾性病例分析,病例来自于 2001-03/2008-12 中山大学附属第一医院黄埔院区脊柱外科。对象:颈椎病患者 70 例,伴 3 节或 3 节以上压迫或合并颈椎管狭窄;颈椎管狭窄合并颈椎外伤 15 例。方法:行颈椎后路棘突纵切双开门椎管扩大成形治疗,治疗中植入自体骨 23 例,植入羟基磷灰石人工骨 62 例。主要观察指标:①对比观察治疗前后 JOA 评分、手术时间、术中出血量。②材料与宿主的生物相容性。结果:85 例患者术后随访>3 个月。两组间手术前后 JOA 评分比较无显著性意义(P > 0.05) 。羟基磷灰石人工骨组手术用时65～110 min,平均 85.2 min;自体骨组手术用时 75～150 min,平均 116.4 min。羟基磷灰石人工骨组术中出血量 130～400 mL,平均 210 mL;自体骨组手术出血量 170～ 500 mL,平均 260 mL。羟基磷灰石人工骨组除 3 例有羟基磷灰石碎裂外,未发生材料宿主反应及其他严重并发症。结论:羟基磷灰石人工骨用于颈椎后路双开门椎管扩大成形术的效果好,并发症少;手术用时及出血量少。

摘要：背景:放射性脑损伤是鼻咽癌放射性治疗(简称放疗)后的严重并发症,其早期诊断目前仍有一定困难,而磁共振波谱(magneticresonancespec-troscopy,MRS)能无创性地检测脑组织细胞代谢,是对放疗后脑损伤检测较理想的手段和方法。目的:探讨磁共振波谱对放射性脑损伤的表达。设计:以诊断为依据,非随机化同期对照研究。单位:中山大学附属第一医院放射科。对象:对1998-10/2002-12临床证实因鼻咽癌行颈部鼻咽部放疗后,在中山大学附属第一医院放射科追踪治疗并行MRI和MRS检测76例(病变组)。同期选择无鼻咽癌及放疗史的健康者25例用同样的方法进行检测作对照组。干预:用1.5TMR成像系统和氢波谱采集分析软件,对两组对象行常规MRI和MRS检测。波谱检测序列:单容积波谱定位序列,激励回波探测法,扫描参数TR2000ms,TE135ms,FOV180mm×180mm,感兴趣区取20mm×20mm×20mm(8cm3),采集时间6.5min。MRS波峰形态分析,按NAA,Cr,Cho波峰的高低排列不同组合,分Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型。波峰积分值分析,取病变中央区、边沿区和正常区的3个主要波峰:NAA峰,Cr峰,Cho峰,用随机的软件包测各自的积分值并分别计算NAA/Cr,NAA/(Cr+Cho)和Cho/Cr的积分值比。主要观察指标:①病变组和对照组不同部位波型。

摘要：背景:脑梗死后坏死灶边缘可能存在存活的缺血半暗带组织,该组织的存在与否对指导治疗、评估病情预后有重要参考价值。目的:观察99Tcm-HL91SPECT脑显像能否显示急性脑梗死患者梗死灶外周处于缺血缺氧状态但尚存活的脑组织。设计:病例分析。单位:中山大学附属第二医院神经科,核医学科和中山大学附属第一医院神经科。对象:2002-09/2003-05中山大学附属第二医院收治的发病96h内的大脑半球梗死患者43例,男20例,女23例,39例为首次发病,4例为再次发病。干预:患者行99Tcm-HL91SPECT脑显像和同机CT扫描,并进行图像融合。主要观察指标:在连续2个以上层面和2个以上不同轴向断层上,梗死侧大脑半球出现放射性浓集区,为乏氧显像阳性。结果:43例患者中,乏氧显像阳性者24例,均属完全或部分前循环梗死,分别有8例和16例。乏氧显像区位于梗死灶周围。9例在起病后7～17d复查SPECT,仍呈阳性,但乏氧组织已减少。12例部分前循环梗死患者和全部腔隙性梗死患者(7例),乏氧显像均阴性。结论:99Tcm-HL91SPECT显像能清晰地显示完全及部分前循环梗死患者的脑乏氧组织,能提示急性脑梗死后脑组织的存活,有助于指导治疗及早期康复干预。