摘要：神经氨酸酶(NA)是一种具有唾液酸酶活性的流感毒粒表面糖蛋白,切断病毒HA与细胞膜上神经氨酸残基之间的连接,使病毒能够从宿主细胞表面释放.检测了新型H1N1流感NA基因核苷酸序列,用免疫信息学方法预测、筛选和鉴定B细胞表位;人工合成NA抗原多肽SE8和RE6,并免疫新西兰兔制备抗血清.两种抗血清具有体外中和新型H1N1流感病毒能力(微量中和实验),而且还具有拮抗血凝释放作用.根据2009年全球毒株NA基因序列检测和比对结果,发现多肽SE8和RE6序列未变异.实验揭示,多肽SE8和RE6可以作为新型H1N1流感候选多肽疫苗.

摘要：采集空气环境微生物,根据菌落和革兰氏染色特征,分离5株细菌。提取分离株DNA,采用设计的16SrRNA引物扩增DNA片段;纯化PCR产物,进行测序反应并再纯化,上机读序。拼接与校对DNA序列,在NCBI网站进行Blast,鉴定细菌型别。5株菌株分别是表皮葡萄球菌、头状葡萄球菌、施氏假单胞菌、溶血葡萄球菌和大肠杆菌;其中溶血葡萄球菌是致病菌,其他4株是条件致病菌。这提示,应警惕空气环境中致病菌的感染。

摘要：目的建立高致病性禽流感H7和H9亚型荧光定量PCR方法。方法根据禽流感病毒(avian influenzavirus,AIV)HA-H7基因和HA-H9基因分别设计特异AIV H7和H9亚型特异荧光定量PCR引物和探针,优化反应体系和反应条件,分析该试剂的敏感性、特异性、重复性等。结果经优化反应体系和反应条件后,AIV H7试剂和AIV H9试剂的敏感性达到1×104.67EID50和1×103.80EID50水平,特异性与细胞培养敏感性类似;批内和批间精密度Ct值的CV值均远小于10%,可重复性良好。结论本项目研制的AIV H7和H9亚型的敏感性、特异性、重复性均好,适合在禽流感H7和H9亚型疫情和人类疑似禽流感病例中检测使用。

摘要：目的采用PCR检测肺炎链球菌(***)毒力基因psaA和ply,研究分析两个毒力基因的特异性,为***临床诊断提供依据。方法对广东省12家医疗机构诊断为***感染患者的654份标本,经过细菌培养和乳胶凝集试验筛选出575株,以psaA、ply基因核心区域序列设计合成扩增引物,以抽提的***分离株DNA为模板,采用常规聚合酶链反应(PCR)扩增目标基因psaA、ply片段,长度分别为838bp和209bp,调查分析不同来源标本的分离株psaA和ply基因检出率;采用乳胶凝集试验与多重PCR分型,比较两种结果中***菌株psaA和ply检出率差异,以及广东***主要血清型与非主要血清型菌株的psaA和ply检出率情况。结果经乳胶凝集试验鉴定为***的560株菌株中,psaA和ply基因检出率分别为78.21%和83.57%,ply基因检出率高于psaA基因,psaA基因阳性的***菌株,其ply基因均阳性;来源于血液和脑脊液标本的***分离株的psaA和ply基因检出率分别为93.18%和95.45%,脓液标本分离的***菌株psaA和ply基因检出率为100%。在荚膜肿胀反应和多重PCR检测为***可分型血清型菌株中,前者psaA和ply基因阳性率分别为93.90%和98.57%,后者为96.34%和98.31%;而在多重PCR检定为不可分型血清型菌株中,psaA和ply基因检出率分别为47.06%和57.84%,显著低于荚膜肿胀试验的68.59%和74.64%,但ply基因检出率也均比psaA高;可分型血清型中主要血清型菌株的psaA和ply基因检出率高于非主要血清型。结论广东地区***临床分离株中ply基因检出率比psaA高,保守性高,但其他链球菌亦能扩增出ply基因从而出现假阳性,因此,对于***菌株的鉴定,采用PCR同时扩增psaA和ply基因,并结合临床常规实验,鉴定更为可靠。此外,血液和脑脊液psaA和ply基因阳性率高可能与psaA和ply是***入侵血和脑的关键因子有关。

摘要：目的:建立高致病性禽流感H5亚型荧光定量PCR方法.方法:根据禽流感病毒(AIV)M基因和H5-HA基因分别设计AIV通用和H5亚型特异荧光定量PCR引物和探针,优化反应体系和反应条件,分析该试剂的敏感性、特异性、重复性等.结果:经优化反应体系和反应条件后,AIV通用试剂和AIV-H5试剂的敏感性达到1×101.25EID50水平;与细胞培养比较,AIV-H5试剂Kappa吻合系数κ为0.991(P<0.01),统计学显示两种检测结果的吻合度很强;批内和批间精密度CT值的CV值均远小于10%,可重复性良好.结论:本项目研制的AIV通用试剂和AIV-H5试剂的敏感性、特异性、重复性均好,适合在禽流感疫情和疑似H5禽流感病例中检测使用.

摘要：目的建立适用于猪肝样本中戊肝病毒检测的荧光RT-PCR方法。方法采用匀浆处理直接提取法（方法一）与聚乙二醇处理法（方法二）两种处理方法对染毒猪肝样本进行病毒富集,针对4种型别戊肝病毒的基因组而设计的特异性引物和探针,建立一套Taq Man荧光定量RT-PCR方法,并评价该方法的准确性和灵敏性。采用新建荧光定量RT-PCR检测人工染毒的猪肝样本并比较两种方法的处理效率。结果所建立的Taq Man荧光定量RT-PCR标准曲线显示在10^2-10^8copies/μL范围内具有良好的线性关系,相关系数为0.999。批内和批间重复性实验结果表明,不同浓度的质粒标准品检测所获得的Ct值的变异系数分别在0.11%-3.75%、2.47%-6.62%间。2种方法均可以检测出10^2copies/μL的染毒猪肝中戊肝病毒拷贝数。结论所建立的Taq Man荧光定量RT-PCR方法具有灵敏度高、稳定性好、特异性强等特点,适用于HEV的定量检测。匀浆处理直接提取法更加快捷,适用于长期监测。