摘要：为开发银耳芽孢高产胞外多糖深层液态发酵培养基,提高银耳芽孢多糖的发酵产量以及实现规模化生产应用,本研究采用单因素实验探索不同来源的碳氮源及营养元素对银耳多糖产量的影响,并结合Plackett-Burman和Box-Behnken响应面设计,得到高产胞外多糖的发酵培养基配方和发酵条件,进一步使用50 L发酵罐进行了发酵工艺的验证。结果表明:优化后得到银耳芽孢高产胞外多糖发酵培养基配方为:葡萄糖35 g/L,NaCl 0.6 g/L,复合氮源(酵母浸膏和玉米浆干粉1:1)3.6 g/L,MgSO_(4)0.5 g/L,KH_(2)PO_(4)1 g/L;最适发酵条件为:发酵温度27℃,发酵初始pH5,发酵时间6 d,接种量3%(v/v),摇床转速150 r/min。优化完后银耳芽孢胞外多糖产量为214.45 mg/100 mL,在摇瓶发酵阶段达到了较高的产量水平。50 L发酵罐放大发酵中验证多糖得率为258.78 mg/100 mL,比摇瓶实验得率提高了21.03%。本次优化显著促进了银耳芽孢胞外多糖的产量,为其规模化工业生产提供理论支持。

摘要：α-葡萄糖基转移酶(α-GTF)是一类可以利用麦芽糖,异麦芽糖,O-甲基葡萄糖苷等为底物合成低聚糖的多功能性酶,因其功能多样性和独特性而备受关注。本文利用本团队测序的植物乳杆菌(FMNP01)全基因组信息,采用生物信息学方法分析获得α-葡萄糖基转移酶基因(α-gtf),同时根据NCBI中上传的乳酸菌全基因组信息中的α-GTF的DNA序列设计引物,利用PCR技术分别从植物乳杆菌、干酪乳杆菌和短乳杆菌中克隆得到3个α-gtf基因,其编码的氨基酸序列相似性分别为42%、29%和29%;将克隆得到的3个基因分别与表达载体pET-32a连接构建成表达质粒,转入大肠杆菌BL21表达宿主菌中进行诱导表达,产物经SDS-PAGE分析表明,在75 ku处都有一明显条带,与预期蛋白分子量一致,表明这3个基因成功获得了表达。同时对诱导剂浓度、诱导时间和温度进行优化,可望为以后相关研究奠定了基础。

摘要：目的:类胡萝卜素双加氧裂解酶(CCD)是类胡萝卜素生物合成途径中的一个关键酶。旨在鉴定并克隆蛹虫草中的CCD酶,通过相关生物信息学分析和荧光定量PCR探究其结构、功能聚类以及表达调控。方法:用GenBank登录的CCD酶基因序列与蛹虫草基因组比对,在保守区域设计1对引物,以蛹虫草基因组的DNA为模板对CCD酶基因进行扩增,扩增产物命名为car-TC。car-TC基因连接载体后由生物公司测序;序列通过多种生物信息学软件和在线工具分析;表达量随生长情况的变化关系通过实时荧光定量PCR进行测定。结果:克隆了car-TC基因,该基因长1784bp,编码一个577aa的蛋白质,该蛋白质含有CCD酶活性必需的4个组氨酸残基,系统发育进化分析表明该蛋白和棒束菌、白僵菌的同源蛋白聚在同一簇,实时荧光定量PCR结果表明该蛋白的表达量随生长时间的延长而减少。结论:获得一个类胡萝卜素合成途径中的关键酶——双加氧裂解酶基因car-TC,该基因的表达主要受时序调控,随生活周期的进行有逐渐降低的趋势。

摘要：10-去乙酰巴卡亭Ⅲ乙酰基转移酶(DBAT)是紫杉醇生物合成途径中催化10-去乙酰巴卡亭Ⅲ生成巴卡亭Ⅲ的一个关键酶,由于其催化效率低,使得天然巴卡亭Ⅲ和紫杉醇含量都很低,紫杉醇细胞工厂的构建也受到严重制约。本研究利用MODELLER同源建模软件,构建了未报道晶体结构的DBAT三维结构模型,结合分子动力学模拟DBAT在稳定状态前后氨基酸的位置变化,分析关键氨基酸改变对酶催化活性的影响,获得位点His162和Arg365。利用虚拟定点突变和分子对接技术,推断His162为关键活性氨基酸残基,Arg365的空间位阻效应可影响催化反应过程。本研究为后续DBAT催化机理的解析提供潜在靶点,并为DBAT分子设计奠定基础。

摘要：为了获得单细胞核的蛹虫草材料和制备原生质体的最适酶解条件,以蛹虫草芽生孢子为试验材料,通过荧光染色观察其细胞核数,以溶壁酶质量分数、酶解温度、酶解时间为试验因子,原生质体得率为响应值,采用单因素和Box-Behnken试验设计进行优化。荧光显微镜观察结果表明蛹虫草芽生孢子为单个细胞核。响应面优化试验结果表明蛹虫草原生质体最适制备条件为:溶壁酶质量分数2.06%,酶解温度26.1℃,酶解时间2.57 h。在此条件下,原生质体得率的预测值为8.97×10^6个/mL,验证试验所得原生质体得率为(9.17±0.29)×10^6个/mL,预测值和试验值差异不显著,回归模型拟合良好。在优化条件下制备的原生质体在含有0.8 mol/L甘露醇的再生培养基上的再生率达43.33%±2.08%。

摘要：为了获得超声辅助提取蛹虫草废菌质中类胡萝卜素的最适工艺参数,在筛选出最适提取溶剂的基础上,通过单因素和响应面法进行优化。通过单因素试验确定最适单因素条件:乙醇浓度70%、料液比1∶60、超声功率400W、超声时间20 min、提取时间15 min、提取温度50℃。在单因素试验基础上,选取乙醇浓度、超声功率、提取温度为自变量,类胡萝卜素提取率为响应值,采用Box-Behnken试验设计建立回归模型。根据回归模型,在料液比1∶60、超声时间20 min、提取时间15 min的条件下,确定类胡萝卜素最高提取率的优化组合为乙醇浓度71%、超声功率418 W、提取温度51℃。在此条件下,类胡萝卜素提取率的预测值为626.80μg/g,验证试验所得类胡萝卜素提取率为637.50μg/g。回归方程的预测值和试验值差异不显著,所得回归模型拟合程度较好,具有一定的实践指导意义。

摘要：设计不同质量的栽培基质和不同的成熟度,旨在对不同品种灵芝子实体产量和活性成分的关系以及变化规律进行研究。结果表明:金大灵芝和硫因灵芝FQ16栽培料越多,产量越高,与最低组间有显著差异;赤芝和鹿角灵芝子实体产量在处理组间无显著差异;灵芝子实体的多糖和三萜含量随栽培料质量增加均呈无规律变化。硫因灵芝FQ16不同成熟期,菌盖形成期多糖含量最高,达61.31±2.92 mg/g;成熟期三萜的含量最高,达8.92±0.78 mg/g。研究结果:显示灵芝的子实体产量与栽培料质量呈量的关系,在满足其生长条件下,培养料的增加灵芝子实体产量不会增加;灵芝多糖和三萜含量与栽培料质量无显著相关性。硫因灵芝FQ16不同成熟阶段多糖和三萜含量有显著差异,生产上根据产品要求选择合适成熟阶段采摘灵芝。