摘要：本研究目的是优化肝靶向干扰素(IFN-CSP)在大肠杆菌中的诱导表达条件,以提高蛋白表达量。通过考查培养基pH值、诱导剂IPTG浓度、诱导温度、诱导时间和起始菌浓度等五个因素对IFN-CSP融合基因原核表达量的影响,在此基础上,从上述影响因素中各选取4个水平进行正交实验作进一步分析。结果表明,起始菌浓度和诱导温度为影响表达的主要因素,最佳组合诱导条件为OD600为0.8时开始诱导、诱导4h、诱导温度37℃、诱导剂IPTG浓度0.4mmol/L、培养基pH值为6.0,融合蛋白的表达量高达74.3%。通过表达优化后,IFN-CSP的产量为688.8mg/L,提高了1.2倍。这为进一步制定生产工艺和评价IFN-CSP的生物活性奠定基础。

摘要：天蚕素是一类由31~39个氨基酸残基组成的阳离子型线性α螺旋抗菌肽,具有抗细菌、抗真菌、抗病毒以及抑制肿瘤细胞等生物活性。天蚕素与传统抗生素作用机制不同,具有不易产生耐药性的特点,因此成为解决传统抗生素多重耐药性问题的一个新突破口。然而,天蚕素在抗菌活性、选择性、毒性以及稳定性等方面还存在诸多问题,并且天然天蚕素提取工艺复杂,成本较高,不适合大规模生产,其对细菌的高毒性也限制了原核工程菌的使用。近年来多肽分子设计的研究方法颇受青睐,为解决多肽物质诸多问题开辟了新的途径。针对天蚕素类抗菌肽研究过程中面临的主要问题综述了其分子设计的研究进展。

摘要：目的:克隆白细胞介素-7(IL-7)剪接变异体,筛选出在IL-7开放阅读框内剪接变异体,为其生物活性的研究打基础。方法:运用自行设计的IL-7引物,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,分离正常培养的肝癌细胞株HepG2、结肠癌细胞株HT29IL-7mRNA,再对电泳所获条带进行克隆、测序和分析。结果:肝癌细胞株HepG2、结肠癌细胞株HT29都能检测到IL-7mRNA,而且从培养癌细胞株分离出多条新带,经亚克隆及测序,证实这些条带是来源人IL-7基因、但缺乏不同外显子的IL-7剪接变异体cDNA;通过和IL-7cDNA比对分析,发现其中5个剪接变异体在IL-7开放阅读框内。结论:IL-7剪接变异体广泛存在于各种肿瘤细胞中。对其进一步的研究,将为癌症病人的免疫调节紊乱和临床免疫治疗提供新的研究方向。

摘要：目的探究一种以多柔比星为母药的低毒新型抗肿瘤前药。方法采用Sybyl 8.0的Sketch模块进行前药的计算机辅助设计,通过多种短肽共价偶联多柔比星形成前药库。虚拟筛选后用化学方法合成前药,通过硅胶柱和凝胶柱进行纯化,HPLC法检测与鉴定,体外特异性酶解试验及细胞毒性试验进行活性检测。结果计算机辅助药物设计所得到的新型前药N-苄氧羰基-丙氨酰-丙氨酰-天冬酰胺-多柔比星物理及化学参数较好,其化学合成产物纯度为94%,其天冬酰胺内肽酶酶解Km和Vmax分别为(68±7)μmol/L,(3.9±0.6)μmol/(L·s),对2种体外培养肿瘤细胞株的毒性作用约降低了约90%。结论计算机辅助药物设计在指导多柔比星前药合成过程中具有参考意义;前药合成与分离纯化方法简单可靠,分离效果好;新合成前药细胞毒性降低,可被天冬酰胺内肽酶酶解。

摘要：靶向给药是指通过靶向载体将药物选择性地输送到靶部位,可减少药物全身分布从而减少用药的剂量和给药次数,提高药物的治疗指数和降低药物不良反应,为相关疾病的诊断和治疗开辟了广阔的前景。近年来,高效特异的靶向载体/导向分子研究已成为科研人员研究和探索的热点之一。很多病原体对宿主组织具有高度选择性,研究显示这种特异选择性涉及受体-配体间的相互作用,了解病原体组织特异性的分子机制,从中得到启发,为设计、研发高效、安全、特异的靶向制剂提供了新思路。

摘要：背景:survivin基因特异性表达于肿瘤和胚胎组织,与肿瘤细胞的分化增殖、浸润转移以及多药耐药密切相关。目的:构建靶向survivin基因的shRNA重组质粒表达载体,转染前列腺癌细胞PC3,验证该载体能否下调细胞survivin基因mRNA水平。方法:以survivin基因为靶点设计具有短发夹结构的shRNA序列,经退火成互补双链后克隆入pENTR/U6建立重组表达载体pENTR/U6-SUR;转化***10菌株,挑取阳性菌落进行菌落PCR和测序鉴定;将重组质粒转染前列腺癌细胞株PC3细胞,RT-PCR检测重组质粒对细胞survivin基因mRNA水平的抑制效果。结果与结论:将设计合成的shRNA序列经退火后克隆至pENTR/U6载体中,菌落PCR可扩增出目的条带,测序结果证实插入片段为所需序列;pENTR/U6-SUR重组质粒转染后PC3细胞survivin基因mRNA表达水平显著下降,且24h比48h作用更明显。成功构建了靶向survivin基因的shRNA质粒表达载体,并证实该载体显著下调了PC3细胞中survivin基因mRNA水平。

摘要：目的:分析家蝇抗菌肽(Musca domestica cecropin,Mdc)的结构,并对其衍生肽的抗肿瘤活性进行筛选,以期找到高效、经济的抗肿瘤候选小分子肽。方法:采用生物信息学相关软件对抗菌肽Mdc的理化性质和二级结构等进行分析;MTT法测定小分子衍生肽对10种不同肿瘤细胞株的抑制作用,并测定Mdc和衍生肽对正常细胞的毒性作用;溶血实验检测Mdc和衍生肽的溶血性。结果:在抗菌肽Mdc结构分析的基础上,设计了5种衍生肽M1-6、M1-7、M1-8、M9-21、M27-39;MTT结果显示5种衍生肽对特定肿瘤细胞株具有不同程度的抑制作用,但对正常细胞无明显细胞毒性;并且5种衍生肽在一定浓度范围内无溶血现象。结论:成功筛选出了具有相应抗肿瘤活性的小分子肽,其中M27-39、M1-8和M1-7有望成为有前途的抗肿瘤候选小分子肽。

摘要：HBD-2-haFGF是一种具有痤疮治疗作用的新型融合蛋白。为提高重组大肠埃希菌Escherichia coli BL21(DE3)/pET-21b-hBD-2-haFGF中hBD-2-haFGF基因的表达水平,本研究尝试优化其诱导表达条件。分别选取IPTG浓度、诱导温度、培养基pH和诱导时间进行单因素试验,在此基础上设计4因素3水平响应面实验,以蛋白表达量作为考察指标。经过响应面分析,响应面二次回归方程为y=55.33-1.59A+0.754B+0.26C+6.33D-0.56AB+5.42AC+9.66AD-2.12BC-0.93BD-2.84CD-4.73A^2-8.11B^2-1.74C^2-4.33D^2。BL21(DE3)/pET-21b-hBD-2-haFGF的最优表达条件为:诱导温度39.52℃,IPTG浓度0.60 mmol/L,pH值7.95,时间3 h,预期灰度值为62.893。通过本研究可为进一步大量诱导制备、纯化hBD-2-haFGF蛋白提供技术支持。

摘要：首次设计开发一种促愈合,抗细菌感染的多肽分子——人源抗菌肽LL-37修饰haFGF的融合蛋白,旨在探讨此新型融合蛋白LL-37-haFGF的复性及纯化条件。利用重组大肠杆菌表达LL-37-haFGF并鉴定,初步考察8种复性添加小分子对其包涵体复性的作用,经分析表明,添加0.3 mol/L精氨酸可以大大提高LL-37-haFGF的复性效率。经镍亲和色谱及CM阳离子色谱纯化获得纯品。本研究获得了5.9 mg纯度为95.43%的LL-37-haFGF目的蛋白,为研究其功能奠定了基础,也为类似的双功能多肽的制备提供了参考依据。

摘要：[目的]对159株蜚蠊肠道内生放线菌的卤化酶等相关基因进行检测和初步分析。[方法]活化蜚蠊肠道内生放线菌,制备各菌株基因组DNA,根据依赖黄素腺嘌呤二核苷酸FADH2的卤化酶基因保守区设计简并引物,通过PCR扩增卤化酶基因片段,TA克隆后进行测序鉴定。在此基础上,对卤化酶阳性菌株进行聚酮合酶PKSⅠ和非核糖体多肽合成酶NRPS等2个次级代谢产物生物合成主要基因进行检测。[结果]159株蜚蠊肠道放线菌有84株含有卤化酶基因,占比52.83%;卤化酶基因阳性放线菌中71株含有PKSⅠ基因,70株含有NRPS,占比分别为84.52%、83.33%。[结论]蜚蠊肠道含有较丰富的卤化酶基因阳性放线菌,可作为未来分离卤化活性物质的微生物资源。