摘要：为建立一种三重DPO-PCR方法用于食品样品中的产志贺毒素大肠杆菌O26的检测。以志贺毒素stx1和stx2、O抗原基因wzx O26特异性和实际检测效果,设计引物,构建三重DPO-PCR反应体系,进行特异性、灵敏度、模拟样品验证和实际样品验证。结果表明,三对DPO引物对退火温度不敏感,在49~69℃之间均能发生扩增,且引物之间干扰较小,具有较高的特异性,除目的基因外非目标细菌均无扩增条带出现,纯菌灵敏度检测表明,三重DPO-PCR方法对O26的最低检测限为3.8×10^3 cfu/g。在模拟样品和实际样品中具有良好的检测效果。本研究基于DPO引物构建的三重DPO-PCR方法具有效率高,特异性强,不受退火温度限制等优点,可用于食品样品中产志贺毒素大肠杆菌O26的快速准确检测提供一种高效的辅助检测方法。

摘要：电活性微生物奥奈达希瓦氏菌的胞外电子传递(extracellular electron transfer,EET)在污染物降解、环境修复、生物电化学传感、能源利用等方面具有广泛的应用潜力;四血红素细胞色素CctA(small tetraheme cytochrome)是希瓦氏菌周质空间中最丰富的蛋白质之一,能够参与多种氧化还原过程,但目前对CctA在EET中的行为和机理认识仍然有限。【目的】研究阐明CctA蛋白在希瓦氏菌模式菌株MR-1周质空间以偶氮染料作为电子受体的EET中的作用,补充和拓展希瓦氏菌的厌氧呼吸产能机制。【方法】以周质还原型偶氮染料甲基橙(methyl orange,MO)作为电子受体,在mteal reduction(Mtr)蛋白缺失菌株Δmtr中研究MO的周质还原特点,并通过基因敲除和回补表达研究CctA蛋白在周质电子传递中的作用。【结果】在缺失Mtr通道的情况下,细胞色素CctA可以介导周质空间的电子传递而还原MO。重组表达CctA在低水平时,MO在周质空间中的还原速率与其表达水平呈正相关,更高水平的CctA表达无助于进一步提高MO的还原速率。蛋白膜伏安结果展示了CctA与周质空间内其他高电位氧化还原蛋白的显著区别,可能参与构成一条低电位的MO还原通道。【结论】从分子动力学层面揭示了CctA在周质MO还原中的独特电子传递行为,为进一步推进对细菌周质电子传递机制的理解,以及通过合成生物学设计或改造胞外氧化还原系统、强化生物电化学在污染物降解中的应用提供了重要信息。

摘要：磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol,PI)可以作为特异性底物对单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)进行快速检测。传统的PI分离方法效率不高,难以得到单一磷脂。而利用磷脂酶D(phospholipase D)的磷脂转移特性,水解大豆磷脂中除PI以外的成分,可以得到高纯度PI。通过单因素和正交试验设计,优化phospholipase D水解大豆磷脂的条件。实验结果表明,在100 mg大豆粉末磷脂中加入phospholipase D(≥50,000 units/mL)2.0μL,在37℃下反应4 h得到纯度达到86.67%的PI。进一步将制备产物用于显色培养基,经细菌试验显示了对LM具有特异的显色效果,可以作为昂贵的进口底物的替代品应用。

摘要：为了解曲霉(Aspergillus sp.)N1-14’的高产L-苹果酸(LMA)机制,提取其总DNA作模板,设计同源引物扩增包含丙酮酸羧化酶基因(pyc)和苹果酸脱氢酶基因(mdh)全长的片段并测序,再参考测序结果找到丙酮酸羧化酶(PYC)和苹果酸脱氢酶(MDH)的编码区,设计引物从N1-14’总cDNA扩增出其编码序列并通过TA克隆测序。测序结果显示pyc基因编码区长3582 bp,编码1193aa,分析结果显示PYC氨基酸序列在曲霉属内相当保守,同源性高达90%以上,其中N1-14’在两个保守位点出现突变,833位的A位于一个环区和1022位的F位于α-螺旋中部,可能与其高产酸活性相关;mdh编码区全长1023 bp,编码340aa。MDH氨基酸序列高度保守,突变株同样有两个保守区出现氨基酸点突变,且两点均出现在α-螺旋区域。本试验主要克隆两个曲霉N1-14’产L-苹果酸通路关键酶基因,分析其种属的特异性及预测特异氨基酸位点的功能,为继续探究N1-14’的高产LMA机制及相应的基因工程改造提升产酸水平奠定基础。

摘要：【背景】淡玫红鹅膏(Amanita pallidorosea)是鹅膏属檐托鹅膏组的一种剧毒鹅膏菌,其子实体内含有丰富的鹅膏环肽毒素,但其编码毒环肽和相关肽的基因家族"MSDIN"尚待深入研究。【目的】探究淡玫红鹅膏中编码毒环肽及相关肽的基因家族成员的多样性、保守性及其系统发育。【方法】采用Illumina HiSeq2000平台对淡玫红鹅膏转录组进行测序,使用TBLASTn软件对MSDIN基因家族进行检索,并设计特异性引物进行PCR验证,通过生物信息学比对分析MSDIN基因家族成员的种类和序列构成,通过重建分子系统发育树了解其演化历程。【结果】通过对MSDIN基因家族的查找,从转录组数据获得了60条环肽编码基因,经PCR验证其可编码32条环肽,包括α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽和羧基二羟鬼笔毒肽。本研究报道了8条新环肽。分子系统发育树分析显示,鹅膏环肽分为鹅膏毒肽、鬼笔毒肽和未知功能环肽3大支。系统发育结合保守序列推测出7条潜在的新毒肽。【结论】淡玫红鹅膏具有丰富的鹅膏环肽资源,利用转录组测序能够系统挖掘鹅膏环肽新资源,为其整体结构解析奠定基础。

摘要：氨基化改性可有效地破坏纤维素固有的结晶结构,赋予纤维素一定的碱性,改善纤维素的水溶性,极大地提升了纤维素的利用价值。文中对氨基纤维素的合成路径及结构特征进行了归纳总结。通过具体实例分析,总结了氨基纤维素在吸附、生物医药、催化剂和酶蛋白固载领域的应用,提出了氨基纤维素绿色合成、生物相容性分析、仿生材料设计等研究发展方向。期望为氨基纤维素的利用提供理论参考,为氨基纤维素的研究提供方向。

摘要：为探明精氨酸对尼罗罗非鱼生长、脂肪蓄积、血清生化指标及肝脏多胺代谢途径相关基因表达量的影响。采用单因素试验设计,对初始体重20 g左右的尼罗罗非鱼(Oreochromis nilotica)分别投喂精氨酸含量为2.21%(对照组,CL组)、3.58%(低精氨酸组,LA组)和4.46%(高精氨酸组,HA组)的饲料进行为期60 d的饲喂试验,评价尼罗罗非鱼的生长指标。酶法测定血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TCHO)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(ALP)、胆汁酸(TBA),索氏抽提法测量肌肉脂肪含量(MFC)和肝脏脂肪含量(LFC),定量RT-PCR方法检测肝脏多胺代谢途径相关基因表达量。结果表明:各处理组间尼罗罗非鱼的末均重、增重率、特定生长率、饲料系数和成活率均无显著性差异(P>0.05)。HA组的尼罗罗非鱼肝体比、肥满度均显著高于CL组、LA组(P0.05)。因此,饲喂30 d时,高精氨酸含量饲料饲喂尼罗罗非鱼可减少其肝脏脂肪蓄积、保护肝脏和减少血清脂肪含量,60 d后,可增加其肝脏脂肪蓄积、对肝脏造成一定损伤和提高血清脂肪含量。多胺代谢途径在精氨酸调节尼罗罗非鱼肝脏脂肪代谢过程中起重要作用。

摘要：本研究设计了一种基于PCR的快速检测方法,可在富集培养的情况下检测化妆品中的金黄色葡萄球菌。该方法首先采用优化的金黄色葡萄球菌富集培养基进行增菌,再利用耐热核酸酶nuc基因、纤维蛋白原结合蛋白clfA基因和Sma I限制性酶切片段特异序列为靶基因,建立多重PCR检测体系。结果表明,三对引物扩增金黄色葡萄球菌DNA的灵敏度为1.35 pg/μL,且在保湿乳中可检测到1.5 CFU/g的金黄色葡萄球菌。本研究针对化妆品中金黄色葡萄球菌的多重PCR检测方法具备检测灵敏度高、特异性好、操作简单、耗时短等特点,具有广泛的市场应用前景。