摘要：目的构建pDsRed2-N1-SDF-1α真核表达载体并转染骨髓间充质干细胞(MSCs),观察其在MSCs内的表达。方法设计并合成SDF-1α基因引物,用RT-PCR法从小鼠平滑肌细胞中扩增出带有XhoI与EcoRI酶切位点的SDF-1α基因片段,将SDF-1α基因片段克隆到真核表达载体pDsRed2-N1上,酶切和测序鉴定。培养小鼠MSCs并Vimentin蛋白免疫荧光鉴定。通过脂质体将pDsRed2-N1-SDF-1α转染入小鼠MSCs。免疫荧光检测转染后的MSCs表达SDF-1α蛋白的情况。结果扩增出的基因片断大小与基因文库中已知的SDF-1α序列大小完全相符,酶切也得到目的基因片断,测序结果显示与已知的SDF-1α序列相同,成功构建pDsRed2-N1-SDF-1α真核表达载体。培养的细胞经Vimentin蛋白免疫荧光检测为阳性,pDsRed2-N1-SDF-1α表达载体转染到MSCs,24h后细胞免疫荧光检测可见SDF-1α融合蛋白表达。结论pDsRed2-N1-SDF-1α真核表达载体能够在小鼠MSCs中表达SDF-1α蛋白。

摘要：背景:神经干细胞的发现为中枢神经系统损伤修复带来希望,但脑损伤后的内部环境对神经干细胞存活和分化的影响是一个复杂多变的过程。目的:观察大鼠脑液压冲击伤后植入的人胚神经干细胞存活情况和分化状态。设计:开放性实验。单位:广东省中医院神经外科,北京市神经外科研究所。材料:实验于2002-09/2003-03在北京市神经外科研究所神经干细胞室完成。选取SD雌性大鼠24只(购自中国医学科学院实验动物研究所,动物质量合格证号:SCXK(京)2002-2003),7周龄,体质量(250±10)g。8周龄流产胎儿大脑(产妇及其家属均同意提供),流产过程中B超监测胎儿的存活状况。BrdU单克隆抗体(Sigma公司),兔抗巢蛋白多克隆抗体(Chemicon公司),鼠抗微管相关蛋白2单克隆抗体(Neomarkers公司),兔抗胶质纤维酸性蛋白多克隆抗体(Biogenex公司)。方法:①取8周龄流产胎儿大脑皮层细胞,体外培养获得人胚神经干细胞。②大鼠制作液压冲击伤模型。大脑皮质运动感觉区骨窗位置:以前囟为零点,向后2.5mm,中线右3.0mm。液压冲击参数:冲击压力0.3MPa,冲击时间25ms,冲击次数为1次。③伤后24h在损伤区移植标有BrdU的人胚神经干细胞,1周和4周后处死大鼠,邻片行BrdU/微管相关蛋白2和BrdU/胶质纤维酸性蛋白免疫组织化学双染。主要观察指标:①人胚神经干细胞移植后的存活及迁移。②人胚神经干细胞移植后的分化。结果:①BrdU阳性细胞为椭圆形棕褐色,移植后1,4周均可见其存活并向周围迁移,且移植后4周迁移的范围更广。②移植后1周,皮质颗粒层和皮层下均见较多的BrdU阳性细胞,且BrdU/微管相关蛋白2双阳性细胞多于BrdU/胶质纤维酸性蛋白双阳性细胞;移植后4周,BrdU阳性细胞数明显减少,脉络丛和微血管中可见BrdU阳性细胞,且BrdU/胶质纤维酸性蛋白双阳性细胞多于BrdU/微管相关蛋白2双阳性细胞。结论:人胚神经干细胞能够存活于脑损伤区域,移植后逐渐分化为星形胶质细胞,且易被内皮吞噬细胞所消化。提示免疫排斥反应可能影响人胚神经干细胞的存活。

摘要：LVIS支架作为治疗颅内动脉瘤的新型辅助支架,是一种编织型、自膨式设计的镍钛合金闭环支架.具有较高的金属覆盖率,网孔直径仅1 mm,故可有效避免弹簧圈突出和逃逸,尤其适合微小宽颈动脉瘤的辅助栓塞[1].虽然理论上LVIS支架具有理想的顺应性和贴壁性,但任何类型的支架在动脉转折处都存在贴壁困难的可能,特别是LVIS支架作为编织型支架,如果规格选择有偏差或释放手法不当,则可能在动脉转折处出现张开不良、无法贴壁的情况,甚至导致血栓栓塞性并发症[2].现报道2例应用LVIS支架辅助弹簧圈栓塞颈内动脉虹吸部动脉瘤的经验,探讨LVIS支架的规格选择和释放技巧.

摘要：目的:探讨神经外科工作站对内镜经鼻蝶入路垂体瘤手术的指导作用。方法 :自2009年9月至2012年11月我科行内镜经鼻蝶入路垂体瘤切除术70例,术前均采用64排CT扫描及工作站进行三维重建。比较术前工作站三维重建图像和术中内镜图像并行经鼻蝶入路中解剖结构累加分值Spearman秩相关分析;利用工作站辅助定位重要解剖标志,精确量化三维解剖关系。结果:术前工作站三维重建图像与术中内镜图像基本一致,相符性好,10个解剖标志显示的累加分值具有显著相关关系(r=0.864,Р<0.001);工作站重建虚拟图像可模拟内镜经鼻蝶入路垂体瘤手术,准确辅助定位、观察解剖标志及变异,精确量化个体化的三维解剖关系,设计最佳的鞍底开窗,同时准确显示与手术设计相关的距离参数。结论:神经外科工作站是一种简便实用的辅助性工具,可用于指导内镜经鼻蝶垂体瘤手术术前计划形成,增加手术操作的安全性,提高手术效率。

摘要：目的探讨清醒状态下丘脑底核（STN）长期在体多通道单细胞放电记录新技术。方法采用自行设计的集束式微电极阵列记录STN单细胞放电情况。设计主要由3部分构成：（1）29号皮下注射用不锈钢管为引导管固定电极丝，并作为脑组织接地电极；（2）5根20μm铂铱合金丝作为记录电极，1根50．8μm不锈钢合金丝作为局部参考电极，电极尖端呈“路标手”样排列，聚乙二醇固定；（3）带有螺丝旋紧的连接器减少实验动物自由活动带来的信号伪迹。将这种电极用于6只正常清醒大鼠STN单细胞放电记录，评价术后5周内的STN单细胞放电单位的记录稳定性。结果术中记录到27个STN放电单位，70．4％（19／27）存活超过2d：5周内记录到9个新生放电单位。术后峰峰波幅与时间之间无显著线性相关性（r=-0．047，P=0．655）；并且信噪比维持稳定，其与峰峰波幅间存在显著线性相关（r=0．934，P=0．000）。电极植入3周，仍有超过50％的细胞保留率。相同神经元75％波形相似系数大于0．90。结论本研究设计的微电极阵列在记录活动状态下STN单细胞放电时．波形特征稳定．细胞保留率理想，适用于慢性清醒状态在体STN多通道单细胞放电的电生理记录．

摘要：目的探索一款适用于神经外科的直观且精确可靠的三维可视化定位系统及影像学信息存储、管理工具。方法通过自行研制的神经外科影像与手术工作平台系统f简称神经外科工作站，又称神经外科三维可视化工作站1对7例重型颅脑外伤硬膜外血肿、凹陷性骨折，8例垂体瘤，5例脑胶质瘤，3例脑膜瘤患者的影像学资料进行三维重建，根据外科手术要求在工作站上进行手术计划，辅助行手术治疗。结果神经外科三维可视化工作站可以直观显示颅内各种病变与各解剖结构、体表标志的三维空间量化关系，迅速辅助定位并设计最佳个体化手术人路，提高手术精确性与手术效率。同时，神经外科三维可视化工作站可便捷管理患者影像学资料及手术录像等各种信息，提高科研与临床工作效率。结论神经外科三维可视化工作站是一种直观快捷、功能强大的神经外科手术辅助工具及影像学信息管理工具。

摘要：目的探讨大型(直径大于40mm)颅咽管瘤切除术后并发症的发生情况和有效的防治方法。方法40例大型颅咽管瘤患者中20例经翼点入路,11例经眶上眉弓锁孔入路,6例经纵裂穹隆间入路,3例经前纵裂终板入路,经鞍区不同解剖间隙切除肿瘤。术中注意保护来自颈内动脉、前后交通动脉和脉络膜前动脉供应下丘脑的穿动脉。肿瘤囊液放出后分块切除实体肿瘤部分。结果36例全切除;1例次全切除,侧脑室钙化囊壁残留,长期无特殊变化;1例鞍内、2例鞍旁残留均加行放射治疗。术后早期26例出现尿崩,33例出现不同程度钠、氯、钾、镁、钙等电解质紊乱,2例出现高热及术后早期意识恢复不佳,6例视力下降加重,均经积极治疗后好转。36例术后不同时间参加日常工作,2例需要生活照顾,2例死亡。结论术前良好准备,精心设计手术入路,保证良好视野和照明,术中直视下尽可能多锐性解剖,保护垂体柄、下丘脑及其小的穿支血管,术后立即监测水电解质的变化对防治大型颅咽管瘤术后并发症具有重要价值。

摘要：目的 探索神经内镜高血压脑出血（HICH）做创手术术前精确可靠的手术定位方法。方法 南方医科大学珠江医院神经外科自2008年6月至2010年8月通过CT扫描及图像三维重建的方法定位脑内血肿、选择最佳内镜微创手术入路行神经内镜微创术治疗HICH患者18例，分析患者的临床资料和疗效。结果 根据CT三维重建结果，术者可以准确设计最佳内镜微创手术入路并实现颅骨钻孔部位的精确定位．减少手术前准备、麻醉及操作时间。本组患者平均手术时间仅1．5h左右，手术失血量仅30～40mL，血肿清除率约为89．2％，且血肿清除后脑组织松弛，无需行玄骨瓣减压。结论 HICH患者采用CT扫描、三维重建进行术前手术定位是一种快速、简便、可靠的神经内镜微创脑出血手术定位方法．

摘要：目的 探讨阻断Eag—1通道活性对胶质瘤细胞生物活性的影响。方法设计3对Eag-1通道蛋白的特异性小分子干扰RNA（siRNA）并转染人U87细胞，RT—PCR及Westernblotting检测其对U87细胞Eag-1 mRNA和蛋白表达的影响；将50nmol／LsiRNA1、siRNA2转染U87细胞，同时设5、10、20、30和40mmol／L奎尼丁（Eag-1通道特异性阻断剂）组和空白对照组，MTT法观察作用24、48、72h后U87细胞增殖情况，流式细胞仪检测作用48h后细胞周期、细胞凋亡率、胞内活性氧簇（ROS）浓度的变化。结果RT—PCR及Westernblotting结果显示siRNAl和siRNA2转染U87细胞12h后细胞Eag-1mRNA、蛋白的表达产物带明显弱于空白对照组，而siRNA3转染组产物条带虽也弱于空白对照组，但条带仍清晰；MTT检测结果显示与空白对照组比较，50nm01／LsiRNA1、siRNA2转染组和10、20、30、40mmol／L奎尼丁组细胞培养24、48和72h后吸光度值均降低，差异有统计学意义（P＜0．05），奎尼丁IC。为33．7mmol／L。流式细胞仪分析显示与空白对照组比较，50nmol／LsiRNA1、siRNA2转染组和33．7mmol／L奎尼丁组G1期细胞百分比、细胞凋亡率和胞内ROS水平均增加，差异有统计学意义（P＜0．05）。结论阻断Eag-1通道活性能明显抑制胶质瘤细胞增殖，使G1期细胞比例、胞内ROS水平明显升高并诱导其凋亡。

摘要：肿瘤的细菌治疗最早可以追溯到19世纪,人们第一次利用链球菌(Streptococcus pyogenes)成功治疗了患有无法手术切除的肉瘤患者。此后,细菌在肿瘤治疗上的研究越来越多,并取得了令人期待的结果。与其他肿瘤治疗方法相比,细菌治疗肿瘤具有许多独特的优点。随着合成生物学的发展,人们对细菌进行改造后大大增强了其在肿瘤治疗中的运用。本文介绍了细菌改造策略和应用进展,特别是鼠伤寒沙门氏菌治疗肿瘤的研究。在动物模型中,工程菌可以选择性定植到肿瘤组织中并抑制肿瘤的生长。此外,介绍了工程菌治疗肿瘤的新策略——表达抗肿瘤分子来提高肿瘤治疗的效果。最后,讨论了工程菌治疗肿瘤运用于临床还有一些需要解决的问题,如何平衡细菌毒力和抗肿瘤能力是一个关键点,需要设计更精巧的基因线路来对细菌进行改造。在减弱细菌毒力的同时,还要增强细菌靶向到肿瘤组织的能力,以减少对其他正常组织的影响。细菌的遗传不稳定性也是一个潜在的问题,因为突变可能会产生无效或有害的表型。但是,随着合成生物学的发展,在不久的将来,上述问题将会得到解决,细菌治疗将会是一种具有巨大潜力的肿瘤治疗的方法。