摘要：目的从基因角度分析家蝇生长发育各阶段抗菌肽的表达情况。方法制备家蝇卵以及Ⅰ龄、Ⅱ龄、Ⅲ龄幼虫、蛹和成虫等6个生长阶段的总RNA,采用半定量RT-PCR技术,以磷酸甘油醛脱氢酶(GADPH)基因作为内参照,根据GenBank公布的家蝇抗菌肽基因-天蚕素(cecropin)基因、防御素(defensin)基因和攻击素(attacin)基因的核苷酸序列设计特异性引物进行RT-PCR扩增,分析家蝇生长发育各阶段抗菌肽基因mRNA表达量。结果上述6个生长发育阶段均检测到cecropin、defensin和attacin等3种抗菌肽基因的表达,分别在210、300和650bp出现一条带,与其理论值相符。其中Ⅲ龄幼虫期和成虫期抗菌肽基因mRNA的表达量最高(3种抗菌肽基因电泳图谱扫描光密度与内参基因GAPDH光密度的比值分别为1.61、1.99和1.62,1.47、1.92和1.59),卵期、Ⅰ龄幼虫期和蛹期表达量相对较低(3种抗菌肽基因电泳图谱扫描光密度与内参基因GAPDH光密度的比值分别为0.49、0.49和0.42,0.72、0.49和0.64,0.65、0.39和0.91)。结论家蝇抗菌肽基因在不同发育阶段均普遍表达,但表达水平存在明显差异。

摘要：目的建立贝类中GⅠ型扎幌样病毒的荧光定量PCR检测方法。方法通过用聚乙二醇6000（PEG6000）对贝类中扎幌样病毒进行浓缩,用序列比对软件设计出针对GⅠ型扎幌样病毒保守序列的通用引物与探针,建立GⅠ型扎幌样病毒荧光定量PCR检测方法。结果浓度为10^6-10^4,10^3,10^2-10^1拷贝/μL的GⅠ扎幌样病毒检出率分别为3/3,1/3,0/3,因此,常规逆转聚合酶链反应（RT-PCR）最低检出限为10^3拷贝/μL。此荧光定量PCR方法对贝类中GⅠ型扎幌样病毒检测高度特异,最低检出限可达10^2拷贝/μL,比常规RT-PCR的低1个数量级,即灵敏度高10倍,线性范围为10^2-10^6拷贝/μL,标准曲线的相关系数为0.998 8。结论本研究建立了GⅠ型扎幌样病毒的荧光定量PCR检测方法,可用于贝类中GⅠ型扎幌样病毒污染状况及其突发事件的快速定量检测。

摘要：目的:筛选脑得生抗血栓有效部位。方法:采用尾静脉注射胶原蛋白-肾上腺素诱发小鼠体内血栓,基于正交设计,建立复方药效的支持向量机预测模型;并经实验验证,确定脑得生抗血栓的有效部位。结果:本研究所建立的复方预测模型可对复方不同组合进行药效预测。结论:通过模型预测和实验验证,多个配伍组的药效优于原方,尤以CD效果最佳。

摘要：[目的]建立贝类中GⅡ型扎幌样病毒的荧光定量PCR检测方法。[方法]通过用PEG6000对贝类中GⅡ型扎幌样病毒进行浓缩,用Trizol法提取病毒RNA,设计出针对GⅡ型扎幌样病毒保守序列的通用引物与探针,建立GⅡ型扎幌样病毒荧光定量PCR检测方法。[结果]此荧光定量PCR方法对贝类中GⅡ型扎幌样病毒检测呈现高度特异性,与诺瓦克样病毒、GⅠ型扎幌样病毒等无交叉反应,最低检出限可达102拷贝/μl,线性范围为102～106拷贝,标准曲线的相关系数为0.9993。[结论]本研究建立了贝类中GⅡ型扎幌样病毒的荧光定量PCR检测方法。

摘要：目的建立临床粪便中GI型诺瓦克样病毒的实时荧光定量PCR检测方法。方法针对诺瓦克样病毒GI型保守序列,用序列比对软件设计特异性引物与探针,建立诺瓦克样病毒实时荧光定量PCR检测方法。并用常规RT-PCR和本文建立的实时荧光定量PCR对137份临床腹泻标本进行检测。结果该方法对诺瓦克样病毒检测准确,重复性好,标准曲线的线性范围为102～107拷贝,相关系数为0.9991。并且对临床标本的检出率显著高于普通RT-PCR。结论本研究建立的实时荧光定量PCR方法可用于检测临床腹泻粪便标本中的GI型诺瓦克样病毒,从而有效预防和控制该病毒的传染。

摘要：目的优选家蝇幼虫蝇油的提取条件,研究蛆油的抗衰老作用和体外抑菌的效果。方法设计正交试验优选出家蝇幼虫蝇油的提取工艺;通过皮下注射D-半乳糖和紫外灯照射小鼠背部皮肤造成皮肤亚急性衰老模型,同时设空白、阳性对照和模型组,检测皮肤组织中丙二醛(MDA)和SOD的变化;研究蝇油的体外抗菌效果。结果蝇油的最优提取工艺为:70℃提取2.5 h,料液比为10∶1;蝇油有较好的抗衰老作用,并对大肠杆菌、金色葡萄球菌和枯草杆菌均有一定的抑菌效果。结论超声联合浸提法适合从家蝇幼虫中快速有效地提取蝇油,同时蝇油具有一定的抗衰老、抑菌作用。

摘要：目的初步研究家蝇抗菌肽Cecropin cDNA在非洲绿猴肾细胞株COS-7中的表达及其产物的抗菌作用。方法以Cecropin基因为模板设计2条特异引物,扩增在C端含6×His标签的Cecropin开放阅读框序列,将此序列与真核表达载体pcDNA3.1(+)进行重组,构建重组质粒pcDNA3.1(+)/Cecropin-His_6。以脂质体LipofectamineTM2000为载体,对COS-7细胞进行重组质粒pcDNA3.1(+)/Cecropin-His_6和空载体pcDNA3.1(+)的转染,72h后收集细胞培养上清液,表达产物经His-TrapHP亲合层析柱分离纯化和Tricine-SDS-PAGE电泳鉴定后,进行杀菌活性的初步检测。结果转染了重组质粒pcDNA3.1(+)/Cecropin-His_6细胞培养上清液的纯化物,行Tricine-SDS-PAGE电泳得到与预期分子量大小相符的单一目的条带,该纯化物对大肠杆菌*** K12D31具有一定的杀菌活性。结论家蝇抗菌肽Cecropin cDNA在COS-7中得到了正确表达。

摘要：目的克隆新的家蝇抗菌肽基因双翅肽(diptericin)的全长序列并对其进行相关生物信息学分析。方法根据本实验室已经克隆的家蝇抗菌肽基因diptericin片段设计1对引物,运用cDNA末端快速扩增技术(GeneRacer)、T-A克隆和序列测定,将所得序列与GenBank中已知的diptericin基因进行同源性分析。结果成功地从免疫诱导的3龄幼虫中得到一个全长433bp的基因cDNA,该全长cDNA具有完整的编码框,编码99个氨基酸,相关生物信息学分析结果表明,其与厩蜇蝇diptericinA基因的同源性最高,为77%。结论初步推断此全长cDNA是家蝇抗菌肽的一个新基因,可能广泛存在于蝇类昆虫中,为进一步研究其生物活性奠定基础。

摘要：目的:研究受试制剂氯氮平口腔崩解片和参比制剂氯氮平片在精神分裂症患者体内的药动学过程并判断两制剂是否具有生物等效性。方法:采用随机双周期,自身交叉设计,20名受试者分别口服受试制剂或参比制剂100 mg,q12 h,连续服用10 d后采集血样,HPLC-MS/MS法测定血浆中氯氮平的浓度,DAS软件求算有关药动学参数和相对生物利用度。结果:受试制剂和参比制剂的主要药动学参数Cmax分别为(540.0±228.3)μg.L-1、(534.1±205.7)μg.L-1,tmax分别为(2.0±0.9)h、(2.0±0.9)h,t1/2分别为(9.7±3.6)h、(11.4±6.3)h,AUCss分别为(3753.9±1371.5)μg.h.L-1、(3 819.4±1 591.8)μg.h.L-1;以AUCss计,受试制剂的相对生物利用度为(101.2±19.4)%。20名受试者口服受试制剂口感良好,没有沙砾感,崩解时限为(34.6±10.2)s。结论:两种制剂生物等效。

摘要：为了开发工业用酶,在前期菌株筛选的基础上,利用Design-Expert软件,通过Plackett-Bru-man设计与响应面法(RSM)相结合的实验统计方法实现对Serratia proteamaculans sp.L 3菌株产冷β-半乳糖苷酶培养基成分的优化.Plackett-Burman设计筛选出3个显著影响因子:K2HPO4,MgSO4和NaCl,应用中心组合设计和响应面分析确定产酶的最优组合为:K2HPO40.15 g·L-1,MgSO40.50 g·L-1,NaCl 0.76 g·L-1,此时预测的最高A420为0.370 4.经过验证实验,结果表示最佳产酶培养基成分条件下,优化后降解ONPG的能力提高了1.1倍.本研究为微生物β-半乳糖苷酶的后续工业化应用提供理论依据.