摘要：目的:优选复方夏枯草颗粒提取工艺条件。方法:以齐墩果酸含量、总出膏率为指标,采用正交试验设计,优选提取工艺条件;以二甲苯致小鼠耳炎症试验,验证提取工艺合理性。结果:优选提取工艺条件:体积分数为90%的乙醇8倍量,提取2次,每次1.5h。结论:优选工艺可较好的提取复方夏枯草颗粒处方中的有效成分。

摘要：目的:从Hela细胞中克隆凋亡抑制因子Survivin的编码序列,进行测序,并由此预测其HLA-A*0201限制性CTL表位。方法:设计人Survivin基因序列特异引物,通过RT-PCR扩增Survivin编码序列,构建至pGEM-T载体后,测序分析,并对其进行了HLA-A*0201限制性CTL表位抗原表位相关预测。结果:从Hela细胞中克隆得到的Survivin和Survivin-ΔEx3两种剪接体,其中Survivin-ΔEx3发生1个同义突变和三个错义突变,预测其抗原表位抗原性发生了变化。结论:寻找抗原性强、结合力高的表位,对于今后抗肿瘤多肽疫苗的研究具有重要的意义。

摘要：旨在探究乌鳢(Channa argus)MHC基因的分子特征、表达方式及多态性。应用抑制差减杂交(SHH)和快速扩增c DNA末端(RACE)技术克隆并鉴定了乌鳢全长MHC I c DNA序列Char-Ia-1、Char-Ia-2和Char-Ib,推测氨基酸序列与已知硬骨鱼MHC I基因同源。Char-Ia-1和Char-Ia-2 c DNA序列包含1 167和1 083 bp的开放阅读框,分别编码388和360 aa的膜型Ⅰ类分子;而Char-Ib c DNA序列包含978 bp的开放阅读框,编码325 aa,显著截短的羧基末端显示Char-Ib为潜在的分泌型Ⅰ类分子。比较发现Char-Ia与Char-Ib在3'非转录区存在显著差异,在细胞外区、跨膜区和细胞质区的氨基酸序列同源性均较低,推测二者来自不同的MHC I基因座。氨基酸序列比对显示乌鳢MHC I分子与抗原肽结合的关键氨基酸残基较保守,在α1和α3结构域均出现硬骨鱼特征性的氨基酸残基缺失。进化树分析表明Char-Ia-1和Char-Ia-2聚为一簇,与Char-Ib处于不同的进化分支上,进一步证实Char-Ia与Char-Ib分别由不同MHC I基因座编码。RT-PCR分析显示乌鳢MHC I在组织中呈现组成型表达。设计基因专一性引物检测乌鳢Char-Ia与Char-Ib两类MHC I基因在组织中的表达水平,结果显示Char-Ia以较低的浓度表达于所有被检测组织,而Char-Ib主要表达于脾、肠、鳃和外周血,呈现明显的组织表达特异性,提示两类MHC I分子在鱼类免疫反应中发挥不同的生理功能。

摘要：为了帮助学生更全面深入地理解和掌握基因工程技术,进一步深化实验教学改革,将《基因工程》、《发酵工艺原理》和《生物技术药物药剂与药代动力学》这三门课程中相互联系比较密切的实验部分进行有机的整合,同时结合我们自己的科研项目,围绕基因工程这一中心,设计了一套较为完善的综合性实验流程,同时对实验的考核方式进行了改革.调查结果表明这一改革取得了较好的效果,为我们在其他实验课程中开展改革提供了有益的借鉴.

摘要：目的对严重急性呼吸系统综合征冠状病毒（SARS—CoV）刺突蛋白（Spike，S）S1段进行原核重组表达，并检测表达产物的抗原性。方法对S1中的HLA抗原表位进行预测分析，根据分析结果选定用于重组表达的区段，利用pET21b载体进行原核表达，将产物纯化后利用SARS抗血清进行抗原性检测。结果抗原表位分析表明，S1中包含有多个能够被HLA分子有效提呈的抗原表位，综合考虑表位肽的分布、重组表达的效率、重组蛋白的空间构象以及引物设计的优化等因素，选取S1中的关键区域259～565aa进行原核重组表达，得到了包涵体形式的重组蛋白，经过纯化和复性，获得了纯度较高的可溶性S1蛋白；用SARS抗血清对此重组蛋白进行免疫学鉴定，表明该蛋白具有SARS特异的抗原性。结论重组表达的S1蛋白具有较强的抗原性，为进一步的疫苗研究和抗体筛选奠定了基础。

摘要：目的利用TOPO克隆法构建SARS-CoV M蛋白基因的裂殖酵母重组表达载体,并验证重组载体在宿主细胞中的稳定性。方法运用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术从SARS-CoV RNA中扩增出M蛋白基因,AT克隆构建出序列正确的pMD18-T-M重组载体。设计含Kozak序列的引物从pMD18-T-M载体上亚克隆出M蛋白基因,与裂殖酵母表达载体pNMT1-TOPO进行TOPO克隆,构建出重组表达载体pNMT1-M,转化TOP10感受态细胞,菌落PCR鉴定阳性转化子后进行测序鉴定。将序列正确的pNMT1-M重组载体电转化入裂殖酵母TCP1菌株中,在EMM培养基中诱导表达,连续传代100代,在EMM+T培养基中验证其稳定性。结果RT-PCR获得666 bp的片段,pMD18-T-M重组载体经测序验证序列正确;重组表达载体pNMT1-M经菌落PCR和测序鉴定均正确;重组裂殖酵母菌经诱导后,SDS-PAGE检测出了表达条带;重组表达载体连续传代后,未发现丢失现象。结论成功地构建出了SARS-CoV M蛋白基因的裂殖酵母表达载体,验证了其在裂殖酵母中能稳定地进行遗传,为下一步的表达优化、活性和功能研究垫定了基础。