摘要：目的 建立一种基于通用多重不对称聚合酶链反应(PCR)联合基因芯片的下呼吸道病原菌及耐药基因检测方法,同步实现6种下呼吸道常见病原菌(大肠埃希菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、卡他莫拉菌)和两种碳青霉烯酶基因(blaKPC、blaVIM)快速检测。方法 针对待检病原菌及耐药基因的保守序列设计特异性引物与探针,并制备相应的基因芯片。优化多重PCR的反应体系和杂交参数,分析其特异度、灵敏度,并通过临床标本进行方法应用评价。结果 本研究建立的检测方法特异性强、稳定性好,能在4 h内特异性地鉴别单一或多重靶标。检测大肠埃希菌纯培养物的灵敏度为104copy/mL,鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌及碳青霉烯酶基因(blaKPC、blaVIM)的灵敏度均为103copy/mL,金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、卡他莫拉菌的灵敏度均为102copy/mL。与产酸克雷伯菌、黏质沙雷菌、奇异变形杆菌、表皮葡萄球菌、唾液链球菌、流感嗜血杆菌等6种病原菌无交叉反应。结论 基于通用多重不对称PCR结合基因芯片的下呼吸道病原菌及耐药基因检测方法特异性强、灵敏度高,为快速、灵敏地鉴定下呼吸道病原菌及耐药基因提供了一种有效的检测手段。

摘要：目的:通过化学方法设计合成得到唑吡坦的半抗原及其人工抗原。方法:唑吡坦小分子连接上经化学修饰的连接臂,并使用碳二亚胺法与载体蛋白偶联合成唑吡坦人工抗原,并通过质谱分析、紫外吸收光光谱扫描技术、SDS-PAGE电泳法及胶体金免疫层析法对抗原进行偶联效果和抗原活性的鉴定。结果:通过上述分析测试,方案中唑吡坦半抗原结构合成成功,并与载体蛋白偶联得到人工抗原;通过临床样本验证,该抗原具有较高的活性,与唑吡坦抗体反应表现出较高的特异性。结论:该方法合成的唑吡坦抗原可用于免疫检测方法,也可作免疫原制备相关抗体。